细菌分离培养及鉴定pt课件

G-杆菌
Figure 2 - Gram stain of Gram - E. coli cells
显微镜下的杆菌
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革兰染色注意事项
标本涂片不宜太厚 固定不宜过热 脱色不宜过度 选用培养18--24小时菌龄的细菌为宜
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抗酸染色
原理：分枝杆菌细胞壁含脂质较多,其中
主要成分为分枝菌酸,此物具有抗酸性,染 色时与石炭酸复红结合牢固,能抵抗酸性 乙醇的脱色作用,因此抗酸菌能保持复红 的颜色,达到染色目的。
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S型菌落
2020/9/30
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21 21
R型菌落
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M型菌落
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细菌在液体培养基中的生长现象
混浊 沉淀：多见于链状排列的细菌 菌膜：多见于厌氧菌
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细菌在液体培养基中的生 长现象：
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细菌在半固体培养基中的生长现象
有鞭毛细菌：在培养基中沿穿刺线并向 外扩散生长，穿刺线边缘模糊。 无鞭毛细菌：只沿穿刺线生长，穿刺线 边缘清晰。
龄、门诊号/住院号、病床号、标本类型、容器 、标识、检验目的等。
所有拒收或退回标本均应在登记本上登 记，登记内容包括：病人姓名、病区、床号
送检医师、送检项目、拒收(退回)原因、拒收 时间、经手人等
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痰标本涂片染色低倍镜下分类
分级 白细胞（个） 上皮细胞（个）
A
>25
<10
B
>25
<25
C
<10
>25
（M） 菌苔：指多个菌落融合在一起形成的细菌堆积物 。
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菌 .落
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菌落与菌苔
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菌落的三个类型：
1.光滑型菌落（Smooth type Colony） ：又称S 型
2.粗糙型菌落（Rough type Colony）：又称R型 3.粘液型菌落（Mucoid type Colony）又称M型
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细菌在半固体培养基中的生长现象
无动力 现象
有动力 现象
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斜面接种法
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接种斜面后菌落生长示意图（菌苔）
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革兰染色
原理：通过结晶紫初染和碘液媒染后，在细胞壁内形
成了不溶于水的结晶紫与碘的复合物，革兰氏阳性菌 由于其细胞壁较厚、肽聚糖网层次较多且交联致密， 故遇乙醇或丙酮脱色处理时，因失水反而使网孔缩小 ，再加上它不含类脂，故乙醇处理不会出现缝隙，， 因此能把结晶紫与碘复合物牢牢留在壁内，使其仍呈 紫色；而革兰氏阴性菌因其细胞壁薄、外膜层类脂含 量高、肽聚糖层薄且交联度差，在遇脱色剂后，以类 脂为主的外膜迅速溶解，薄而松散的肽聚糖网不能阻 挡结晶紫与碘复合物的溶出，因此通过乙醇脱色后仍 呈无色，再经复红等红色染料复染，就使革兰氏阴性 菌呈红色。
真菌显色平板—真菌培养用
罗氏培养基—分枝杆菌用.
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接种工具
接种针和接种环 ：由三部分组成，即环 （针）、金属柄和绝缘 柄 接种针：用于穿刺接种细菌 接种环：用于固体、液体培养基的细菌 接种
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器具：接种环（上）和接种针（下）
2—5cm
柄约22cm
5—8cm
金属柄约14.5cm
绝缘柄 约7.5cm
A、B两种情况的痰适合做培养，C不合格，应重新留标本
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常用的培养基种类和用途
哥伦比亚血平板—营养要求高的细菌
巧克力平板—含V、X因子，主要培养嗜血杆菌、脑 膜炎球菌和淋球菌用
中国蓝/麦康凯平板—G-杆菌用
SS平板—沙门氏菌和志贺氏菌用
M-H平板—细菌药敏用
TCBS平板—弧菌科细菌用
沙包氏平板—真菌培养用
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清洁中段尿液
尽量取早晨第一次尿液 嘱患者留取标本的前一天晚上少饮水 女性病人 ➢收冲集 洗标 尿本 道前 口用肥皂水冲洗外阴，再以灭菌清水 ➢排出几毫升后，不停止尿流，采集中段尿 男性病人 ➢翻转包皮，清洗尿道口 ➢排出几毫升后，不停止尿流,采集中段尿
采集标本后立即送检！
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标本接收原则
严格实行核对制度 ：包括姓名、性别、年
细菌培养及鉴定
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1
标本采集原则
1.及时采集微生物标本作病原学检查
2.在抗菌药物使用前采集标本
3.采样时严格执行无菌操作
4.标本容器须无菌，但不得有消毒剂
5.采样后立即送检
6.送检标本应注明来源. 和检验目的
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咳痰方法
病人先漱口，清洁口腔，去除表面的菌群 病人深咳，收集从下呼吸道咳出的痰液 无痰可用3％～5％N百度文库Cl 5ml雾吸约5min导痰 以清晨第二口痰为佳 标本采集后放置时间不超过2小时
安装环(针)的螺口(约8mm)
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操作原则：无菌操作（烧灼灭菌）
Aseptic area 10-20cm
外焰 内焰 焰芯
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细菌接种的基本程序
灭菌接种环 杀灭接种环沾染的细菌，以免污染标本
沾取标本
接种
灭菌接种环 杀灭接种环沾染的细菌，以免污染环境
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细菌接种法
平板划线接种法：
★目的：使混合的细菌呈单个分散生长， 形成单个菌落，以便获得纯菌。
★方法：
★分区划线法：适用于含菌量较多的标本
★连续划线法：适用于含菌量较少的标本
液体培养基接种法
穿刺接种法 :用于观察细菌动力
斜面接种法
倾注培养法:用于细菌计数
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分区划线法(3区) 第一区划线
灭菌接种环
第二区划线
灭菌接种环
第三区划线
灭菌接种环
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连续划线法
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细菌培养法
一般培养（需氧培养）： ★培养温度：35℃（采用恒温培养箱） ★培养时间：18～24h
二氧化碳培养法：烛缸法、二氧化碳培养 箱
厌氧培养法：厌氧培养箱、厌氧袋、厌氧 罐、疱肉培养法、硫乙醇酸盐法等
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细菌在固体培养基中的生长现象
菌落 ★定义：指单个细菌在平板培养基上生长繁殖，形
成单一肉眼可见的细菌集团。 ★菌落特征：大小、形状、边缘、颜色、表面、透
明度、湿润度、黏度、溶血性 ★菌落类型：光滑型（S）、粗糙型（R）、黏液型
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革兰染色步骤
涂片包括涂片、干燥、固定三步。
涂片
干燥
固定
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固定的目的：
使细菌的细胞凝固，使菌体与玻片粘 得更牢固； 可改变菌体对染料的通透性； 加热固定可杀死细菌，比较安全。
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革兰染色程序
初染
媒染
脱色
复染
冲洗
冲洗
冲洗
结晶紫 1’ 碘液 1’ 95%乙醇 30” 复红 1’
冲洗
滤纸干燥 . 油镜观察
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革兰染色
甲
紫紫色色（（GG＋＋））
菌
初染 媒染 脱色 复染
革结兰晶氏紫 染碘色液步骤乙示醇 意图稀释复红
乙
红色（G-）
菌
革兰染色步骤示意图
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【结果】
细菌被染成紫色者，称为革兰阳性菌； 而细菌染成红色者，称为革兰阴性菌；
阳性菌——紫色（G+b
阴性菌——红色（G-b)
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G+ 球菌
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