鸡新城疫灭活苗的制备

试验三鸡新城疫灭活疫苗的制作

制备油佐剂灭活苗

1 材料

1.1 毒种：鸡新城疫病毒弱毒La sota株（老师提供）

1.2 实验动物：9-10日龄鸡胚若干。

1.3 主要试剂：碘酊，1％硫柳汞溶液，7号白油,司盘- 80,硬脂酸铝,吐温- 80,甲醛等

1.4 主要仪器：孵化箱、1ml注射器、蛋架、打孔器，蜡烛，胶体磨等。

2 实验步骤

2.1 种毒繁殖：将毒种用灭菌生理盐水作适当稀释(如10-4或10-5)，尿囊内接种10日龄SPF 鸡胚，每胚0.1ml。选接种后72~120小时之间死亡且病痕明显的鸡胚，分别收获鸡胚液(尿囊液及羊水)，装于灭菌容器内，定量分装于安领瓶中，冷冻保存。（1%红细胞凝集试验）

2.2 接种前准备：种毒稀释，照蛋，打孔。

2.3 接种：取生产用毒种，用灭菌生理盐水作适当稀释(如10-4或10-5)，每胚尿囊内接种0.1ml。接种后密封针孔。置36~37℃继续孵育。

2.4孵育和观察：鸡胚接种后。每日照室1次。将24小时内死亡的鸡胚弃去。此后，每天照蛋两次。死亡的鸡胚随时取出，4℃保存，冷却时间4~24小时。直至96小时。

2.5 收获：将冷却的鸡胚取出，用碘酐消毒气室部位，然后以无菌手术剥除气室部卵壳，捐去卵壳膜。剪破绒毛尿至膜及羊膜(谨防卵黄破裂)。吸取胚液。对每个鸡胚在吸取胚液前均应注意检查、凡胎儿腐败、胚液混浊及有任何污染可疑者，弃去不用。吸取胚液放于同一灭菌的容器内。（凝集试验和无菌试验）

2.6 灭活：可以过滤，再加甲醛溶液，甲醛溶液的最终浓度为0.1％。然后在37℃灭活16小时，期间振摇3~4次，在4℃保存，应不超过1个月。（无菌检验和灭活检验）

2.7 制苗

2.7.1 油相制备：将7号白油与司盘- 80 ( Span - 80)按94 ∶6比例混合,再加总量2%的硬脂酸铝溶液混匀后,121 ℃高压灭菌15 min即为油相。

2.7.2 水相制备：将灭活胚液(抗原液)和吐温- 80 ( Tween - 80)以96 ∶4的比例混合，充分搅拌，使吐温-80完全溶解为止，作为水相。

2.7.3 乳化：水相与油相比例为1：3加入混合。取油相3份放于胶体磨或乳剂缸内，开动电机慢速转动搅拌，同时徐徐加入水相l份。以10000r／min搅拌2~5分钟，在终止混拌前加入1％硫柳汞溶液，使其最终浓度为0.01％。

2.7.4 检验：乳化后，取3~5ml以3000r／min离心15分钟，若有分层现象，应重复搅拌1次。

2.7.5分装：定量分装，加盖密封，成品。

3 疫苗质量的鉴定

3.1 物理性状

3.2 无菌检验、安全检验、效力检验等