杀菌剂联合毒力测定演示文稿
7种杀菌剂对寄生疫霉菌的毒力测定试验
Ｃｈｉｎｅｓｅ Ａｇｒ ｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｂｕｌｌｅｔｉｎ
７种杀菌剂对寄 生疫霉菌 的毒 力测定试 验
王 芳 ，王 莹 ，岑 宗泽 ，陈文胜 ，何 丽烂
（佛 山科学技术学 院，广东佛 山 ５２８０００）
摘 要 ：旨在鉴 定 出潺菜病叶病原 菌和 筛选 出防治寄生疫霉（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｐａｒａｓｉｔｉｃａ Ｄａｓｔｕｒ）的最佳 药
它 含 有 大量 维 生 素和 矿 物 质 ，有清 热 解 暑 ，滋 补 强 身 ， 抑 制 疾 病 等 功 效 ［１］。 因此 ，潺 菜 近 年 来 的产 量 逐 渐 增 加 ，潺 菜 的 主 要 病 害 之 一 寄 生 疫 霉 （Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｐａｍｓｉｔｉｃａ）的危 害 也 随之 加重 ，严重 影 响 了潺 菜 的产 量 和 经 济效 益 。寄 生疫 霉 寄生 范 围广泛 ，包 括 番茄 、茄
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅ ａｉｍ ｏｆ ｔｈｉｓ ｅｘｐｅｒ ｉｍｅｎｔ ｉｓ ｔｏ ｉｄｅｎｔｉｆｙ ｔｈｅ ｐａｔｈｏｇｅｎ ｉｎ ｉｎｆｅｃｔｅｄ ｌｅａｖｅｓ ｏｆ Ｇｙｎｕｒａ ｃｕｓｉｍｂｕａ ａｎｄ ｓｃｒｅｅｎ ｏｕｔ ｔｈｅ ｂｅｓｔ ｂａｃｔｅｒｉｃｉｄｅ ｆｏｒ ｃｏｎｔｒｏｌｌｉｎｇ Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｐａｒａｓｉｔｉｅａ Ｄａｓｔｕｒ．Ｔｈｅ ｉｎｆｅｃｔｅｄ ｌｅａｖｅｓ ｏｆＧｙｎｕｒａ ｃｕｓｉｍｂｕａ ｗｅｒｅｉｓｏｌａｔｅｄ ａｎｄ ｐｕｒ ｉｆ ｉｅｄ，ａｎｄ ｔｈｅｎ ｔｈｅ ｐａｔｈｏｇｅｎ ｗａｓ ｉｄｅｎｔｉｆ ｉｅｄ ａｓＰｈｙｔｏｐｈｔｂｏｒａ ｐａｒａｓｉｔｉｃａ Ｄａｓｔｕｒ． Ｓｅｖｅｎ ｋｉｎｄｓ ｏｆ ｆｕｎｇｉｃｉｄｅｓ ｗｅｒｅ ｕｓｅｄ ｉｎ ｔｈｉｓ ｓｔｕｄｙ，ａｎｄ ｔｈｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｉｈｅ ｓｅｖｅｎ ｋｉｎｄｓ ｏｆ ｆｕｎｇｉｃｉｄｅｓ ｏｎ Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｐａｒａｓｉｔｉｃａ Ｄａｓｔｕｒ ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ ｗｉｔｈ ｇｒｏｗｔｈ ｒａｔｅ ｍｅｔｈｏｄ ｗｉｔｈ ｔｏｘｉｃ ｍｅｄｉｕｍ ．Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ：ａｆｔｅｒ ４８ ｈ， ０ ｏｆ ｃｈｌｏｒｏｔｈａｌｏｎｉｌ ｗａｓ １３．６０ ｍｇ／Ｌ，ｔｈｅ ｖｉｒｕｌｅｎｃｅ ｉｎｄｅｘ ｗａｓ ｈｉｇｈｅｒ，ａｎｄ ｔｈｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｙ ｅｆｆｅｃｔ ｗａｓ ｖｅｒｙ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ； ｜５０ ｏｆ ｓａｎｄｏｆａｎ ａｎｄ ｍａｎｃｏｚｅｂ ｗａｓ １ ６．９９ ａｎｄ ２８．６２ ｍｇ／Ｌ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ， ｔｈｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｅｆｆｅｃｔｓ ｗｅｒｅ ｍｏｒｅ ｓｉｇｎｉｆ ｉｃａｎｔ；ＥＣｓ０ ｏｆ ｍｅｔａｌａｘｙｌ ｍａｎｃｏｚｅｂ，ｐｒｏｐａｍｏｃａｒｂ ａｎｄ ｄｉｍｅｔｈｏｍｏｒｐｈ ｗａｓ ５６．２３，５７．１６ ａｎｄ ６０．７１ ｍｇ／Ｌ， ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ， ａｎｄ ｔｈｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｙ ｅｆｆｅｃｔｓ ｗｅｒｅ ｃｏｍｍｏｎ； ０ ｏｆ ｓｏｄｉｕｍ ｄｉｃｈｌｏｒｏｉｓｏｃｙａｎｕｒａｔｅ ｗａｓ ３ １９．２１ ｍ Ｌ，ａｎｄ ｔｈｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｙ ｅｆｆｅｃｔ ｗａｓ ｐｏｏｒ．Ｔｈｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｙ ｅｆｅｃｔｓ ｗｅｒｅ ｓｉｍｉｌａｒ ｂｅｔｗｅｅｎ ２４ ｈ ａｎｄ ４８ ｈ．Ｔｈｅｒｅｆｏｒｅ．ｔｈｅ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｃｈｌｏｒｏｔｈａｌｏｎｉｌ ｏｎ Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｐａｒａｓｉｔｉｃａ Ｄａｓｔｕｒ ｉｓ ｔｈｅ ｂｅｓｔ ａｍｏｎｇ ｔｈｅ ｓｅｖｅｎ ｆｕｎｇｉｃｉｄｅｓ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：Ｇｙｎｕｒａ ｅｕｓｉｍｂｕａ；Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａｐａｒａｓｉｔｉｃａ；ｔｏｘｉｃｉｔｙ ｄｅｔｅｒ ｍ ｉｎａｔｉｏｎ
实验5 除草剂与杀菌剂毒力测定
×100%
注：菌饼直径为5mm
抑制率 机率值 80.1 5.8452 55.9 5.1484 53.7 5.0929 38.7 4.7129 30.1 4.4785 19.4 4.1367
剂量 400 200 100 50 25 12.5
剂量对数 2.6 2.3 2 1.7 1.4 1.1
机率值
毒力回归方程1
缺点： ① 对供试菌种要求较严格，病菌要易于培养，生长较快且边缘 整齐、产孢子缓慢，而且是农业生产上重要的病原菌； ② 对供试药剂要求，有一定的耐热性，遇热不易分解。
多菌灵（carbendazim）对小麦赤霉病菌的毒力测定
试验目的：掌握生长速率法测定杀菌剂毒力。 • 供试菌株：
小麦赤霉病菌（Fusarium graminerarum）敏感 菌株2021和抗性菌株JT04。
➢ 利用有害生物（靶标生物，如昆虫、螨类、病菌、线虫、杂 草等）对作用物的反应评价化合物生物活性的基本方法 ---陈年春“农药生测技术”
生物测定已成为研究 作用物、靶标生物 和反应强度三者关系 的一项专门技术
生理活性 物质
靶标生物 虫、草、菌等
反应程度
杀菌剂的毒力测定
杀菌剂生物测定流程
药剂毒力测定； 定性定量分析； 防治效果测定；
除草剂的毒力测定
几个概念
1. 抑制中浓度：指抑制50%测定指标时除草剂的浓度， 需采用毒力回归方程的方法计算；
2. 最高无影响计量：不影响作物生长发育的最高剂量， 是除草剂对作物是否有影响的剂量分界线；
3. 相对毒力指数：除草剂A的相对毒力指数=标准除草 剂的IC50/除草剂A的IC50；
4. 生长抑制率和抑制指数
注意事项： 应先加药液再加 培养基（1:9）； 对一些受热易 分解的药剂则要 待培养基冷却到 50度左右时再加入。
杀菌剂的毒力测定和
第十页，编辑于星期二：三点 五分。
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杀菌剂的毒力测定和
但近代随着新型内吸杀菌剂的发展，对杀菌剂的生物筛选
逐渐由经典的离体筛选趋向活体筛选。 因为它不仅模拟田间实际，同时可以防止那些在离体平板 上无效，而必须在植物活体上方显示活性的化合物漏筛。 但活体筛选涉及的因素较多，对寄主植物、试验条件要求
较高，如光照、湿度、温度，为控制病原菌与寄主相互作用的
条件，必须有适合的温室，费工耗资都较大。 离体测定能反映化合物毒力的本质和程度，方法简便，为 研制新农药不可缺少，但它存在有一点缺点，应该和温室活体 的盆栽试验结合起来。
过试验确定其药效的好坏，经济效益的高低，
也就是说，田间试验是确定一种药剂在生产 上有无实用价值的主要方法。 田间实验的具体方法可参考《农药药效 试验的设计与分析》一书，防治效果可用以 下公式计算。
一，活性效应显现较快，缺点是有时与活体测
定结果不一致，有时会漏筛或误筛，如用粉锈
宁处理大麦白粉病菌，离体测定不仅分生孢子
能萌发且能形成吸器，但此药在活体上却表现
高效。所以初筛手段不采用平板法，采用盆栽
法，即病原---寄主植物组合法。
2．盆栽方法
在温室内进行的，具体方法随各种不同病害
而异，例：小麦赤霉病采用分生孢子 --- 幼苗
抑制百分率=50%，机率值=5
将 5 代入回归方程，然后求其反对数，即
LD-P-Line（剂量对数---机率值直线）。
ED50 可以作为多种药剂对同一病菌等效剂 量的毒力比较，在一定的范围内可以用它来 衡量一种药剂对病原菌毒力的大小，但不能 做为田间防治的实际指标。
三、田间试验
室内筛选的药剂必须进行田间试验，通
（3）生长速率测定法
即在琼脂培养基中加入药液，冷凝后接
菌的方法，用木塞钻孔器切取正常培养基上
实验十五杀菌剂混合毒力测定
三、操作步骤 (一) 孢子悬浮液配制
(二) 带菌培养板制作
水浴加热融化 44-45℃
加孢子悬浮液 混匀,迅速倒入培养皿中
带菌培养板
(三) 带药滤纸条放置
将4 条滤纸条放入药液（单剂或混剂）中浸泡一定时间后沥去多 余的药液，垂直交叉放入带菌平板，置于一定温度下培养，观察 菌落抑制区域的生长形状，并测定大小。
实验十五 杀菌剂混合毒力测定
一、试验目的 学习滤纸条交叉放药法判定杀菌剂混用对生物的影响 了解杀菌剂混合后的生物效应
二、试验原理相加源自药剂 A + 药剂 B
增效
拮抗
本实验通过滤纸条交叉放药法，来简易地判别任何 两种不同药剂混合对病菌生长的影响。
相加
增效
滤纸条交叉放药法对生物的影响
拮抗 互不干扰
七种杀菌剂对番茄早疫病病原菌室内毒力测定
七种杀菌剂对番茄早疫病病原菌室内毒力测定方案，为番茄早疫病的防治提供科学依据，制定出切实可行的防治措施。
1 材料与方法1.1材料1.1.1供试菌株番茄早疫病病原菌株采集于豫北地区番茄种植大棚中的病果，经组织分离、纯化获得病原菌［10］。
1.1.2试验药剂50%异菌脲（病可丹）可湿性粉剂为山东鑫星农药有限公司生产，50%氯溴异氰尿酸（比秀）可湿性粉剂为以色列海法作用保护有限公司生产，80%丙森锌（好锌泰）水分散粒剂为陕西美邦农药有限公司生产，10%苯醚甲环唑（病可丹）水分散粒剂为山东鑫星农药有限公司生产，50%醚菌酯（信赖）可湿性粉剂为陕西美邦农药有限公司生产，32.8%烷基腈氧基醌（凯银）水分散粒剂、35%腐霉利悬浮剂为宜宾川安高科农药有限责任公司生产。
1.2方法1.2.1杀菌剂单剂毒力测定将7种杀菌剂单剂与PDA培养基充分混匀，配制成0.01、0.05、0.10、0.50、1.00、5.00mg/L系列浓度的平板。
采用菌丝生长速率法测定，用5mm打孔器在培养6d后的番茄早疫病菌平板上打孔，用镊子取菌丝面向下接种在含药PDA培养基上，每皿1个菌碟，28℃倒置培养，以去离子水作为对照组，每个处理设3次重复，于接种后第3天检查菌丝生长情况并用十字交叉法测量菌落生长直径，通过菌丝生长抑制率值和各药剂浓度对数值间的线性回归性进行分析，求出各菌株EC50并计算相对抑菌率。
抑菌率计算方法为每个菌落使用十字交叉法测量2次，取其平均数作为菌落的大小。
计算7种杀菌剂对菌丝生长的抑制百分率，公式如下：菌落增长直径=菌落测量直径-菌盘直径抑菌率=（对照菌落增长直径-含药培养基上菌落增长直径）/对照增长菌落直径x100%[11]以浓度对数为横坐标（x）,相对抑制率几率值为纵坐标（丫），求出各药剂对供试菌株的毒力回归曲线方程y=a+bx、相关系数r与有效抑制浓度（EC50）。
根据EC50分析比较不同杀菌剂对供试病菌菌丝生长的影响[12]。
5种杀菌剂对桃炭疽病菌的毒力测定
中国园艺文摘 2018年第3期5种杀菌剂对桃炭疽病菌的毒力测定胡晓颖，赵 杰（上海市浦东新区农业技术推广中心，上海 201201）摘 要：以桃炭疽病菌为试验菌，采用生长速率法，测定5种杀菌剂对病菌的毒力，结果表明：咪鲜胺锰盐、氟啶胺、多菌灵、苯醚甲环唑和吡唑醚菌酯5种杀菌剂都具有较高的毒力。
咪鲜胺锰盐与氟啶胺的联合毒力测定结果表明：咪鲜胺锰盐和氟啶胺按3∶1和6∶1复配表现为增效作用，咪鲜胺锰盐和氟啶胺按1∶6、1∶3和1∶1复配表现为相加作用。
关键词：杀菌剂；桃炭疽病菌；毒力测定水蜜桃是我国的主要果品之一，也是上海市浦东新区的主要果树，常年种植面积0.2…万余hm2。
桃炭疽病是水蜜桃的主要病害，能侵染桃树枝梢、叶片和果实[1]，在上海市浦东新区以秋季叶片受害最重，造成叶片穿孔或枯焦，严重时导致大量叶片枯死和早落，影响花芽和结果枝充实，从而影响翌年结果产量。
科技工作者在桃树炭疽病菌生物学特性和防治方面开展大量工作[2-5]，但不同地区和寄主存在差异。
本文以当地桃炭疽病菌为试验材料，通过开展杀菌剂的毒力测定，筛选出高效低毒药剂，为防治该病害提供技术参考。
1 材料与方法1.1 供试病菌从浦东新区盛果期桃树病叶上分离获得桃炭疽病菌[Colletotrichum gloeosporioides…(Penz.)…Sacc.]，病菌于PDA培养基上25℃培养5…d后用于毒力测定。
1.2 供试药剂50%咪鲜胺锰盐可湿性粉剂(江苏辉丰农化股份有限公司)、50…g/L氟啶胺悬浮剂(浙江石原金牛农药有限公司)、50%多菌灵悬浮剂（江苏龙灯化学有限公司）、30%吡唑醚菌酯悬浮剂(深圳诺普信农化股份有限公司)、10%苯醚甲环唑水分散粒剂(江苏丰登农药有限公司)。
1.3 试验方法1.3.1 毒力测定方法…采用生长速率法[6]：将以上第一作者简介：胡晓颖(1979-)，女，农艺师；从事作物栽培研究。
通讯作者：赵 杰，硕士，高级农艺师。
5种杀菌剂对水稻恶苗病病菌的毒力测定
－ １２２ －上海农业科技 ２０１５－１５种杀菌剂对水稻恶苗病病菌的毒力测定李 斌 赵 杰（上海市浦东新区农业技术推广中心 ２０１２０１）黄玉人 （上海市浦东新区农业服务中心 ２０１２０１）水稻恶苗病（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｍｏｎｉｌｉｆｏｒｍｅ Ｓｈｅｌｄ）又名徒长病、白秆病，在水稻苗期至穗期均可发生，在全国稻区普遍发生。
由于浦东新区水稻栽培模式正处于人工插秧向机械插秧转变的过渡阶段，再加上主栽品种的抗病性不强，导致恶苗病急剧上升，并已成为浦东新区水稻上的主要病害，苗期自然发病率高达１５％～２０％，少数重病田块甚至毁耕重种。
为有效防治该病，笔者选用５种杀菌剂对水稻恶苗病病菌进行了抑菌试验，以期为水稻生产提供高效低毒的杀菌剂。
１ 材料与方法１．１ 供试病原菌水稻恶苗病病菌从浦东新区惠南镇发病的水稻田中采集，经室内组织分离、纯化，病原菌于ＰＤＡ培养基上培养５ｄ后备用。
１．２ 供试药剂供试药剂为９８％恶霉灵原药（吉林省延边绿州化工有限责任公司，简称恶霉灵）、８０％代森锰锌可湿性粉剂（江苏省南通市德斯益农化工有限公司，简称代森锰锌）、６５％代森锌可湿性粉剂（上海生农生化制品有限公司，简称代森锌）、５０％多菌灵可湿性粉剂（上海升联化工有限公司，简称多菌灵）、１０％二硫氰基甲烷乳油（广东植物龙生物技术有限公司，简称二硫氰基甲烷）。
１．３ 试验方法采用生长速率法，测定５种杀菌剂对水稻恶苗病病菌的毒力。
根据试验需要，先将各供试药剂配制成５～７个有效成分浓度梯度的药液；于灭菌好的４９ ｍＬ ＰＤＡ培养基内，加入１ ｍＬ配好的药液，充分摇匀，分装到３个直径为９ ｃｍ的培养皿中，冷却凝固；将直径为１ ｃｍ的菌丝块放在含药培养基中央，每皿１块，于２５ ℃培养箱内培养５ ｄ，测量菌落直径，计算抑制率，以各药剂有效成分在培养基中的浓度，为测试浓度计算回归方程和抑制中浓度ＥＣ５０。
２ 结果与分析试验结果表明，５种杀菌剂对水稻恶苗病菌菌丝生长的抑制作用差异较大，二硫氰基甲烷和多菌灵的抑制作用最高，ＥＣ５０分别为３．５１４８、６．８８１７ ｍｇ／Ｌ。
杀菌剂毒力测定
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一、杀菌剂毒力测定方法 1.4 孢子萌发条件 B、湿度：真菌孢子一般要求在水滴
中才能萌发，但也有少数真菌孢子， 如白粉病菌的分生孢子，在相对湿度 很低的情况下也能萌发。
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一、杀菌剂毒力测Biblioteka 方法1.4 孢子萌发条件 C：光照：光照对多数真菌孢子萌发
可），形成均匀的药膜，再滴加孢子 液。 许多有机溶剂（丙酮、乙醚）表面张 力小，不易形成均匀的药膜，因此， 应采用凹玻片。防尘条件下干燥。
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一、杀菌剂毒力测定方法 C、装置喷雾 利用精确喷雾装置将药液喷于载玻片
上，干燥后滴加孢子悬浮液。
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一、杀菌剂毒力测定方法 1.3孢子悬浮液的配制 孢子萌发法常用菌种 马铃薯晚疫病，水稻稻瘟病，小麦赤
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一、杀菌剂毒力测定方法 2 .3结果检查及其表示方法 十字交叉测2个直径，以其平均值代
表菌落大小。
抑制 生 1处 对 长理 照 率菌 菌 菌 菌 落 落 饼 饼 直 直 1 直 直 0 % 径 径
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一、杀菌剂毒力测定方法
3 滤纸片附着法(adsorption technique)
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一、杀菌剂毒力测定方法
4 扩散法（抑菌圈法,detection of inhibition zone）
基本原理是在已接种的琼脂培养基上 加少量的抗菌物质，使其接触培养基 和病原菌，经一定时间的培养后，接 触部分的周围由于抗菌物质的扩散而 产生抑菌圈。
扩散法广泛用于医用和农用抗菌物质 的筛选和抗菌性物质有效成分的定量
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一、杀菌剂毒力测定方法
5 稀释法(最低抑制浓度测定法, determination of minimum inhibitory concentration)
11种杀菌剂对白术根腐病病菌的室内毒力测定word资料4页
11种杀菌剂对白术根腐病病菌的室内毒力测定白术（Atractylodes macrocephala Koidz.）属菊科草本植物，被列为中医四大名贵药材之一，主要以根入药，具有健脾益气、燥湿利水之功效[1]。
近年来，贵州省白术种植面积不断扩大，由于连作，导致白术根腐病发生日趋严重，成为白术生产栽培中主要的病害之一。
白术根腐病主要病原菌为尖孢镰刀菌（Fusarium oxysporum）[2-4]，引起干腐。
然而，刘英慧等[3]、臧少先等[4]、段明华等[5]报道还包括半裸镰刀菌（F.semitectum）、茄病镰刀菌（F.solani）、燕麦镰刀菌（F.avenaceum）、木贼镰刀菌（F. equiseti）、串珠镰刀菌（F. moniliforme Sheldon）和立枯丝核菌（Rhizoctonia solani）等病原，常引起根茎腐烂致死苗，重病田块死苗率高达80%以上，严重制约了贵州白术产业的发展。
为了筛选出防治白术根腐病的杀菌剂，本试验在室内选择了几种杀菌剂对F. osysporum进行了毒力测定，为田间防治提供依据。
1 材料方法1.1 供试病原菌白术根腐病标样采自贵州省开阳县，用组织分离法[6]获得病原菌。
在PDA培养基上进行培养，纯化后将试管保存于4 ℃下备用。
经鉴定为尖孢镰刀菌F. oxysporum。
1.2 供试药剂供试药剂共11种，药剂名称、生产厂家及试验浓度详见表1。
1.3 毒力测定利用生长速率法对菌丝生长进行室内毒力测定。
确定药剂试验浓度后并配制供试药剂母液，按照系列稀释的方法将供试药剂加入溶化并冷却至60 ℃左右的PDA培养基中，摇匀后制成不同浓度梯度（表1）的含药平板。
将待测定菌株接种于PDA平板上于28 ℃培养4 d，用打孔器在菌落边缘打块，菌饼直径为5 mm，将这些菌饼转接于有毒培养基中央，带菌丝一面朝下，以加等量无菌水的PDA培养基为空白对照。
每个药剂设6个处理，4次重复，28 ℃恒温培养5 d，待对照的菌落接近长满培养皿，用“十”字交叉法测量各处理菌落直径，取平均值，计算抑制率。
3种杀菌剂对葡萄霜霉病菌的毒力测定和田间药效试验共4页文档
3种杀菌剂对葡萄霜霉病菌的毒力测定和田间药效试验收稿日期：2013-05-22基金项目：国家公益性行业（农业）科研专项（编号：201203035）。
1材料与方法1.1供试药剂88%代森锰锌原药、97.4%烯酰吗啉原药和98%嘧菌酯原药均由山东省农业科学院提供。
80%代森锰锌可湿性粉剂（大生-M45）为陶氏益农农业科技（中国）有限公司产品；50%烯酰吗啉可湿性粉剂（安克）为德国巴斯夫贸易股份有限公司产品；25%嘧菌酯悬浮剂（阿米西达）为瑞士先正达作物保护有限公司产品。
1.2室内抑菌活性测定1.2.1孢子悬浮液的配制取田间自然发病的新鲜葡萄病叶，用自来水冲洗净表面的孢子后，将病叶置于25 ℃条件下保湿24 h来培养新鲜的孢子；用干净的毛笔将新鲜孢子刷于无菌蒸馏水中，配成孢子悬浮液；在显微镜下调整孢子悬浮液浓度至5×105 个/mL用于试验测定。
1.2.2接种方法将88%代森锰锌原药依次稀释为800、400、100、50、25 mg/L；97.4%烯酰吗啉原药依次稀释为80、40、20、10、5 mg/L；98%嘧菌酯原药依次稀释为12.5、6.25、3125、1.563、0.781 mg/L。
试验采取叶盘法[3]，将葡萄新枝条上健康无病的4～5位叶片喷洒相应的药液后自然晾干，用打孔器打取直径1 cm的叶盘，叶背面朝上置于铺有无菌湿润滤纸的培养皿中，每皿放置15个叶盘；在叶盘中央滴20 μL孢子悬浮液，置于生物培养箱中培养，培养条件为温度25 ℃、湿度保持在80%左右、光照12 h/d。
对照叶片喷施等量清水，晾干，打取叶盘后滴加等量的菌液。
每处理重复4皿，5～7 d后调查发病情况。
1.2.3统计方法病情调查采用6级记载法[4]，根据病斑面积占叶盘面积的百分率划分病级：0级，无病斑；1级，病斑面积占整个叶面积的5%以下；3级，病斑面积占整个叶面积的6%～25%；5级，病斑面积占整个叶面积的26%～50%；7级，病斑面积占整个叶面积的51%～75%；9级，病斑面积占整个叶面积的75%以上。
农药生测PPT杀菌剂
药剂与病菌的作用关系 传统的：以其“毒力”抑制或杀死病菌。一 般是一致的。 病菌 药剂 环境
新类型的杀菌剂： 影响病菌的致病过程； 影响寄主的抗病性；
第一节 杀菌剂的培养基毒力测定
1 孢子萌发试验法 以观察供试病菌孢子是否萌发，来判定杀 菌剂的毒力大小。 基本方法：将供试药剂以一定方法附着在 载玻片上，然后将病菌孢子悬浮液滴在其上 （或将药液与病菌孢子悬浮液混合滴于载玻 片上），于保湿、定温的条件下保持一定时 间，然后镜检观察孢子萌发数量。
滤纸打孔 干热灭菌（130℃1h ） 酒精消毒（70-80% 20-30min） 接孢子液 带菌滤纸片入药液浸渍（10min） 置于培养基 （2-3d） 观察有无菌丝产生
如：
4 稀释法 在液体或固体培养基中加入含有一系列浓 度的供试药剂，并接种供试菌进行培养，一 定时间后，把具有使病菌发育完全停止的最 低浓度称之为抗菌力的指标。（此法可用于 抗菌素的定量测定，也即效价测定）。 药剂抗菌力也即药剂毒力。
孢子萌发试验法的注意事项： 1 ） 洁净的用具； 载玻片表面必须对供试菌无毒、对孢子萌发无 促进作用、并能使液滴扩散一致。 2 ） 药剂附着： 混合滴加、先后滴加、精密喷布 3 ） 供试菌种 菌种纯、能产生大量孢子、孢子体形大，在显 微镜下易观查、
4 ） 孢了悬浮液的配制 尽可能的使供试菌产生大量孢子（培养 基、培养条件、培养方法和时间） 单位容积内的孢子数： 50000个/ml左右，依孢子大小，一般在低 倍镜下（接目镜X 10，接物镜X10），每个 视野20-30个孢子。 有些孢子较大时还可以 适当降低。
如果对照的萌发率较高可采用简单校正法： 即在各处理组的调查孢子总数中增加调查 孢子数量，增加的数量根据对照组孢子萌发 率换算出来。 如：CK孢子萌发率达98%时，在调查处理 组时，拟定调查数量为100时，此时就要调查 102个，并对其不萌发孢子数减去2，然后计 算孢子萌发率。
杀菌剂毒力测定
17
一、杀菌剂毒力测定方法
孢子萌发条件 B、湿度：真菌孢子一般要求在水滴 中才能萌发，但也有少数真菌孢子， 如白粉病菌的分生孢子，在相对湿度 很低的情况下也能萌发。
1.4
18
一、杀菌剂毒力测定方法
孢子萌发条件 C：光照：光照对多数真菌孢子萌发 的影响不大，但对某些真菌孢子有刺 激或抑制作用，如光照可刺激水稻黑 粉病菌厚垣孢子的萌发，抑制小麦秆 锈病菌夏孢子的萌发。
2.
26
Determining fungicide inhibition of pathogen spore germination on concave slides
药剂的配制 水溶性药剂直接用水溶解，其它药剂 选用合适的有机溶剂（甲醇、丙酮、 二甲基亚砜等）溶解，再用0.1%的吐 温80水溶液稀释，设置5~7个浓度， 有机溶剂最终含量不超过2%
4.
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Determining fungicide inhibition of pathogen spore germination on concave slides
调查 当空白对照孢子萌发率达到90%以上 时，每重复了随机观察3个以上视野， 调查孢子总数不少于200个，分别记 录萌发数和孢子总数。
4
一、杀菌剂毒力测定方法
1、孢子萌发法
(spore germination method) 快速。广泛用于保护剂的测 定 此法适用于抑制病菌能量合 成系统，而使孢子不能萌发 的杀菌剂。
5
一、杀菌剂毒力测定方法
玻璃器皿的处理 清洁：以洗液浸泡数十分钟,用自来水 冲洗, 用蒸馏水清洗,防尘干燥. 载玻片保存于70%的酒精溶液内.
多菌灵对镰刀菌及由镰刀菌引起的赤
4.3-杀菌剂毒力测定
第一单元：农药生物测定与田间药效试验1.杀菌剂生物测定（Bioassay of fungicides）利用病原菌或感菌生物体对杀菌剂的反应，来确定杀菌剂效力（毒力，药效）的农药生物测定。
2.杀菌剂的毒力测定方法（1）基于离体平板培养的毒力测定方法（2）活体测定法（3）组织筛选测定法（1）基于离体平板培养的毒力测定方法①孢子萌发测定法原理：在载玻片或平板上，通过滴加、喷施等方法将药液施于其上，然后滴加一定浓度的孢子悬浮液，经过一定时间培育后在显微镜下观察孢子的萌发率。
一般在低倍镜下，每处理随机检查200个孢子。
毒力越大的药剂，孢子萌发抑制率也越大。
%100⨯=检查孢子数萌发孢子数孢子萌发率%100-⨯=对照萌发率处理萌发率对照萌发率孢子萌发抑制率（1）基于离体平板培养的毒力测定方法②抑菌圈法此法先将病原菌孢子或菌丝的悬浮液与培养基混匀，待混合物冷却后，在培养基表面利用各种方法（管碟法、滤纸片法、孔碟法）使药液和培养基接触，培养一定时间后，由于药剂的渗透扩散作用，施药部位周围的病原菌被杀死或生长受到抑制，从而产生抑菌圈。
毒力越大的药剂，抑菌圈也越大。
该方法所用药剂需有较好的水溶性。
（1）基于离体平板培养的毒力测定方法③生长速率测定法此法的原理是趁热在培养基中加入药液，混合均匀后冷却，然后在无菌条件下将病原菌接入装有培养基的培养皿中央，经过一定时间培育后观察病原菌菌丝的生长情况。
毒力越大的药剂，菌丝的生长越缓慢。
此法多用于不产孢子或产孢子量少而菌丝较密的真菌。
病原菌生长速率的表示方法有2种：①菌落达到一定大小所需的时间；②单位时间内菌落的直径大小。
该方法的优点是操作简便，适用范围广，重复性好。
但对病原菌要求严格，病菌易于培养，生长较快且边缘整齐，产孢子缓慢；供试药剂遇热不易分解。
（1）基于离体平板培养的毒力测定方法④对峙培养法将天然提取物及病原菌同时放在同一个有培养基的培养皿的两边，经过一定时间培育后观察菌丝生长的情况。
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示例：SCF1#对4种供试菌株的毒力测定
SCF5#对4种供试菌株的毒力测定
抑制几率值
福美双对4号菌毒力曲线
y = 1.3151x + 4.3449 R2 = 0.9694
6.0000
5.0000
4.0000 3.0000
2.0000 -1.000 0.000 1.000 浓度对数
2.000
多菌灵对4#菌的毒力测定
杀菌剂联合毒力测定演示文稿
优选杀菌剂联合毒力测定
混配的目的
扩大防治谱，兼治多种病害；
两种内吸性 杀菌剂能否
混配？
延缓抗药性的产生和发展；
混配的两种杀菌剂的选择：保护＋内吸；？
协同增效 降低成本
无交互抗药性的两种杀菌剂以 相互减少选择压来延缓抗药性
内吸性杀菌剂和保护剂混配 比例的根据
靶标真菌的性质特点； 两种药剂各自的药效持效期； 增效活性和防治成本
y = 2.943ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱx + 4.0438 7.0000 R2 = 0.9953
抑制几率值
6.0000
5.0000
4.0000
3.0000 0.000
0.500 浓度对数
1.000
SR＜0.5
颉抗
共毒系数法（1960年提出）
• 理论毒力指数A（Th)=Σ（某药剂的毒力指数×在 混剂中该药剂有效成分的百分率）
• 混剂的共毒系数C=（实际毒力指数A(OB)/理论毒 力指数A(TH) ）×100
• C大于120时为增效作用，小于80时为拮抗作用， Ｃ＝ 80～120为加和作用 。
混合协同增效作用
根据杀菌剂混合后的生物活性，可表现为： 加和作用；颉抗作用；协同增效作用 两种药剂各混配中力争增效，避免颉抗；同时能够 要求可延缓抗药性发展和扩大防治谱， 甲霜灵＋代森锰锌（加和） 噁唑烷酮＋代森锰锌（增效）＋霜脲氰（增效） EC50，并经过温室和田间试验验证。
Wadley 方法
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试验方法（采用孙云沛的共毒系数计算方法）
理论毒力指数A=Σ（某药剂的毒力指数×在种衣 剂中该药剂有效成分的百分率）
种衣剂的共毒系数C=（实际毒力指数/理论毒力 指数 ）×100
C大于120时为增效作用，小于80时为拮抗作用。 种衣剂的增效倍数=（混剂的实际毒力指数/混剂
理论毒力指数）-1
EC50(TH)为混剂的理论值 EC50(OB)为混剂的实际观测值 SR：为相互作用程度 A、B、C是三种不同杀菌剂在混剂中的比例
A+ B+C
EC50(TH)＝
A
B
C
+
+
EC50(A) EC50(B) EC50(C)
SR＝
EC50(TH) EC50(OB)
SR＝0.5～1.5 加和
SR＝＞1.5 增效
• 混剂的增效倍数=（混剂的实际毒力指数/混剂理 论毒力指数）-1= C/100-1
示例：联合毒力的计算
同一组试验数据，大家采用上述两种不同 的联合毒力测定方法，结果有差异吗？
算一算！！
示例：杀菌剂及其混剂对西洋参种 苗上寄藏真菌的联合毒力测定
材料与方法 供试药剂
95%福美双、95%恶霉灵、 97%多菌灵、 97%咪鲜胺、95%甲基立枯磷原粉 SCF 1#、SCF4#、SCF5#（西洋参专用） SCF1#（3%甲霜灵、6%甲基立枯磷、6%代森锰锌混配制成） SCF4#（2%咪鲜胺、9%多菌灵、7%福美双混配制成） SCF5#（3%恶霉灵、2%甲霜灵、10%福美双混配制成）