分光光度法测定榄香烯脂质体磷脂含量_曾昭武

分光光度法测定榄香烯脂质体磷脂含量
曾昭武，周广林，展晓日，谢恬（通讯作者）
（杭州师范大学生物医药与健康研究中心，江苏杭州310012）
[摘要]目的：探索简单快速检测榄香烯脂质体磷脂含量的方法。

方法：采用氯仿破坏脂质体，硫氰铁铵与磷脂反应生成配位化合物，在468nm处检测其吸收度，计算其磷脂含量。

结果：回归方程为A=10.65C－0.325，在0.10-0.35mg·mL-1范围内成线性。

平均加样回收率为113.3%(n=9)，RSD%为7.9%，其RSD值较大，超过5%。

日内差异度RSD%为2.1%(n=9)，日间差异度RSD%为4.0%(n=9)。

榄香烯脂质体的磷脂含量为（19.95±1.76）mg·mL-1，RSD%为8.8%，大于5%。

结论：分光光度法测定磷脂含量简单、快速，但尚不够精确，适用于榄香烯磷脂含量的快速粗略分析。

[关键词]分光光度法；榄香烯；脂质体
[中图分类号]R927.2[文献标识码]A[文章编号]1672-951X（2009）11-0054-02
Determination of Phospholipid Content of Elemene Liposomes
with Spectrophotometric Method
ZENG Zhao-wu,ZHOU Guang-lin,ZHAN Xiao-ri,XIE Tian
Hangzhou Normal University,Hangzhou,China,310012
[Abstract]Objective:To detect simply and fastly phospholipid content of elemene liposomes.Methods:Liposomes were destroyed using chloroform,and the coordination compound was generated by reaction of Ammonium Ferrothiocyanate and phospholipid.The absorption was detected at468nm,and phospholipid content was calculated.Results:Its regression equation is A=10.65C-0.325,and its linear range was0.10-0.35mg·mL-1.Its average recovery was113.3%(n=9)，RSD%was7.9% and more than5%.The RSD of intra-day and inter-day precision was2.1%(n=9)and4.0%(n=9).The content of elemene liposomes was(19.95±1.76)mg·mL-1,RSD%was8.8%and more than5%.Conclusion:Spectrophotometric method for determi－nation of phospholipid content was simple and fast,but not accurate enough,so it can be used for detecting phospholipid content of elemene liposomes fastly and roughly.
[Key words]Spectrophotometric method;Elemene;Liposomes
榄香烯是从莪术等中药中提取出来的一种抗癌有效成分，可用于多种肿瘤的治疗[1,2]。

作者将其制成脂质体剂型，进行质量分析时需要检测其磷脂含量。

磷脂含量是衡量脂质体稳定性的一项重要指标，脂质体中磷脂含量测定各国药典均未收载。

磷脂的经典测定方法为无机定磷法，该法准确性高，但操作繁琐，且不能反映对磷脂的氧化降解程度。

分光光度法测定磷脂含量已有少量报道[3,4]，但作者在实验中发现尚存在一些问题，报告如下。

1试剂与仪器
榄香烯脂质体，自制。

卵磷脂，上海爱康精细化工有限公司。

氯仿、硫氰酸铵、三氯化铁等购自杭州天威工贸有限公司。

纯化水，自制。

2550型紫外可见分光光度仪，日本岛津公司。

BS224S型精密电子天平，德国赛多利斯公司。

WH861型涡旋振荡仪，华利达公司。

2实验方法
2.1试验原理用氯仿破坏脂质体，加硫氰铁铵显色剂。

红色的硫氰铁铵不溶于氯仿，但与卵磷脂反应生成的配位化合物能溶于氯仿，且在某个波长处有最大吸收，而磷脂与榄香烯等在此处吸收很小，通过测定该配位化合物的吸收度可得到脂质体中磷脂的含量。

2.2溶液的制备
2.2.1标准溶液精密称取卵磷脂100mg，置于100mL容量瓶中，加氯仿溶解并稀释至刻度，摇匀，制成浓度为1mg·mL-1的卵磷脂标准溶液，4℃保存，备用。

2.2.2卵磷脂样品溶液精密称取卵磷脂100，200，300mg，置于100mL容量瓶中，加氯仿溶解并稀释至刻度，摇匀，制成浓度为1,2,3mg·mL-1的卵磷脂样品溶液，4℃保存，备用。

2.2.3显色剂准确称取三氯化铁2.70g、硫氰酸铵
3.04g，置于100mL容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，制成显色剂（室温下可保存数月）。

2.3测定波长的选择精密吸取1mg·mL-1的卵磷脂标准溶液0.4mL，置于试管中，加硫氰铁铵溶液2.0mL，再补加氯仿，
54
使试管中氯仿的最终体积为2.0mL ，涡旋振荡5min ，静置5min ，小心移去上层液，取下层，以氯仿为空白，于200-550nm 波长内进行扫描。

2.4
标准曲线的绘制
精密吸取1mg ·mL -1的卵磷脂标准溶
液0.2，0.3，0.4，0.5，0.6，0.7mL ，分别置于试管中，加硫氰铁铵溶液2.0mL ，再补加氯仿，使试管中氯仿的最终体积为2.0mL ，涡旋振荡5min ，静置5min ，小心移去上层液，取下层，以氯仿为空白，在468nm 波长处测定吸光度(A)。

以A 对浓度(C)进行回归分析，得回归方程。

2.5
加样回收率试验
精密吸取0.1mL 不同浓度的卵磷脂
氯仿溶液（1,2,3mg ·mL -1）置于试管中，每个浓度各3份，再加入0.1mL 的2mg ·mL -1卵磷脂标准溶液，再加硫氰铁铵溶液2.0mL ，再补加氯仿，使试管中氯仿的最终体积为2.0mL 。

再按“2.4”项下方法进行操作，并根据标准曲线方程计算加样回收率。

加样回收率=(测定量－已含量)/加入量×100％。

2.6
精密度试验
选用低、中、高不同浓度的卵磷脂样品溶
液(1,2,3mg ·mL -1)，于1d 和1周内重复测定3次，计算日内精密度和日间精密度。

2.7
样品含量测定
精密吸取榄香烯脂质体25μL ，用氯仿
破坏脂质体，加硫氰铁铵溶液2.0mL ，再补加氯仿，使试管中氯仿的最终体积为2.0mL ，按“2.4”项下方法进行操作，通过标准曲线计算磷脂含量。

3
结
果
3.1测定波长的选择波长扫描结果表明，磷脂在400-550nm 有一吸收峰，在468nm 波长处有最大吸收，因此选择468nm 作为测定波长。

（见图1）
图1硫氰铁铵-卵磷脂配合物分光光度仪扫描图谱
3.2标准曲线回归方程为A =10.65C －0.325，r 值为0.9935，
说明在0.10-0.35mg ·mL -1范围内成线性。

3.3加样回收率试验平均加样回收率为113.3%(n=9)，RSD %为7.9%。

其RSD 值较大，超过5%。

（见表1）3.4
精密度试验
日内差异RSD %为2.1%(n=9)，日间差异
RSD %为4.0%(n=9)，其RSD 值超过2%。

见表2-3。

表2
日内精密度
（mg ·mL -1）
时间1234567898∶000.110.100.110.190.200.210.300.280.2912∶000.110.110.110.190.200.190.300.300.3016∶000.110.110.100.210.200.200.280.290.28
表3
日间精密度
（mg ·mL -1）
时间123456789
第1天0.110.100.110.190.200.210.300.280.29第3天0.120.120.110.200.210.210.280.310.32第6天0.120.120.130.190.190.190.300.290.303.5
含量测定结果
检测3批样品（处方相同），每批样品检
测3次，结果见表4。

结果发现，榄香烯脂质体的平均磷脂含量为（19.95±1.76）mg ·mL -1
，
其RSD %为8.8%，大于5%。

表4榄香烯脂质体磷脂含量测定
批号含量（mg ·mL -1）
平均值（mg ·mL -1）
RS D （%）1-116.951-219.2818.54±1.38
7.4
1-319.402-1
22.632-219.1121.40±1.999.3
2-322.463-119.763-220.6519.91±0.68 3.43-319.31
总19.95±1.76
8.8
4
讨
论
作者在实验中发现，当采用文献[3]的方法时，乙醇、氯
表1
加样回收率试验
实验序号123456789样品卵磷脂含量(mg)0.100.100.100.200.200.200.300.300.30加入卵磷脂量(mg)0.200.200.200.200.200.200.200.200.20总检出量(mg)0.320.330.330.450.420.400.520.550.52回收率(%)110.0
115.0
115.0
125.0
110.0100.0
110.0
125.0
110.0
平均回收率(%)
113.3RSD （%）
7.9
55
仿、水会发生混溶，从而难以进行氯仿层的分离，因此，本实验直接采用氯仿破坏脂质体，而不使用乙醇或甲醇。

文献报道[3,4]硫氰铁铵-磷脂配合物的最大吸收波长为488nm或485nm，本实验结果显示配合物的最大吸收波长在468nm左右，这可能是由于试剂制备条件、浓度或仪器差异所致，因此作者选择468nm做为测定波长。

本实验结果发现，用硫氰铁铵显色分光光度法测定磷脂含量，其标准曲线满足要求，但加样回收率、精密度和含量测定的RSD%超过2%或5%，因此，该方法快速、灵敏，但尚不够精确，适用于榄香烯脂质体磷脂含量的快速粗略分析。

参考文献
[1]陈晓,魏福祥,瞿延辉.莪术中有效成分——
—榄香烯的研究进展[J].河北化工，2003,(6):9-13
[2]姚淑娟,刘伯阳,吕丽艳.榄香烯提高肿瘤化疗药物疗效及
抗免疫抑制作用的研究[J].中医药学刊,2006,24(3):456-457
[3]吴道澄,席晓莉,胡佳蕙.分光光度法测定阿霉素脂质体中
的磷脂含量[J].解放军药学学报,1999,15(3):48-50
[4]林筱琦,王建华,温浩.阿苯达唑脂质体中磷脂含量测定[J].
新疆医科大学学报,2002,25(2):119-120
（收稿日期：2009-09-10编辑：朱民）
酸枣仁汤组分配方
对高架十字迷宫小鼠行为学及β-内啡肽的影响
王守勇1，谢鸣2
（1.济宁医学院附属医院，山东济宁272029；2.北京中医药大学，北京100029）
[摘要]目的：观察酸枣仁汤组分配方SZRT1、SZRT6对高架十字迷宫小鼠行为学及脑组织和血浆β-EP的影响，探讨其抗焦虑作用的机理及物质基础。

方法：采用国际上通用的高架十字迷宫焦虑动物模型，观察酸枣仁汤组分配方对小鼠行为学的影响，用放射免疫法测定小鼠脑组织及血浆β-EP的含量。

结果：与对照组比较，组分配方SZRT1、SZRT6组小鼠进入开放臂次数比（OE%）和在开放臂停留时间比（OT%）均显著升高（P<0.05），小鼠脑组织β-EP的含量亦显著升高（P<0.05），而血浆中的β-EP含量差异无统计学意义。

结论：升高小鼠脑内β-EP的含量可能是组分配方SZRT1、SZRT6发挥抗焦虑作用的机制之一。

其所含的多糖和黄酮类成分可能是升高脑组织β-EP含量的物质基础。

[关键词]酸枣仁汤；高架十字迷宫；组分配方；焦虑；行为学；β-内啡肽
[中图分类号]R285.5[文献标识码]A[文章编号]1672-951X（2009）11-0056-03
The Effect of Suanzaoren Decoction's Component Compatibilities on Behavior
andβ-endorphin of Mice in the Elevated Plus-maze
WANG Shou-yong1，XIE Ming2
1.Affliated Hospital of Jining Medical College，Jining Shandong China272029；
2.Beijing University of Traditional Chinese Medicine，Beijing，China100029
[Abstract]Objective：To investigate the effect of Suanzaoren Decoction's component compatibilities SZRT1、SZRT6on be－havior andβ-endorphin in brain and plasma of mice in the elevated plus-maze，and to discuss the mechanism and the sub－stance basis of anti-anxiety.Methods:Adopting the intemational common-used anxiety animal model with the elevated plus-maze test，the effects of SZRT1、SZRT6on behavior of mice were observed.And the levels ofβ-endorphin in brain and plasma were measured by radioimmunoassay.Results:Compared with the control group，percentage of open arm entries(OE%)and of times spent in the open arms(OT%)of SZRT1and SZRT6group mice were both higher（P<0.05）,andβ-endorphin concen－tration in SZRT1and SZRT6group in mice brain increased significantly(P<0.05),while there was no significant difference in plasma.Conclusion:Improvement ofβ-endorphin in the brain of mice may one of the mechanisms of anti-anxiety.Polysac－charide and flavonoids of Suanzaoren Decoction are probably the substance basis of improvingβ-endorphin.
[Key words]Suanzaoren decoction；Elevated plus-maze；Component compatibilities；Anxiety；Behavior；β-endorphin
酸枣仁汤（Suanzaoren Tang，SZRT）是临床治疗肝血不足、虚热内扰之“虚劳虚烦不得眠”的著名古方[1]，其水提物具有显著的抗焦虑作用[2]。

在SZRT水提物分离出组分的基础上，本文采用国际上通用的焦虑动物模型——
—高架十字迷宫模
56。