实验指导(大黄)

实验二 大黄中蒽醌类成分的提取分离和鉴定
（一）概述
大黄记载于《神农本草经》等许多文献中，用于泄下、健胃、清热、解毒等。

自古以来，大黄在植物性泻下药中占有重要位置，是一位很早就被各国药典所收载的世界性生药。

大黄的种类繁多，优质大黄是蓼科植物掌叶大黄（Rheum palmatclm L ），大黄（R. officinale Baill ）及唐古特大黄（R. tangutium Maxim.et Regll ）的根茎及根，大黄中含有多种游离的羟基蒽醌类化合物以及它们与糖所形成的苷。

已经知道的羟基蒽醌主要有下列五种：
O
O H
R 2
O H
R 1
12-H -COOH
大黄酸(Rhein) 黄色针晶 318~320℃ -CH 3 -OH
大黄素(Emodin)
橙色针晶 256~257℃ -H
-CH 2OH 芦荟大黄素
(Aloe-emodin)
橙色细针晶 206~208℃ -CH 3 - 大黄素甲醚(Physcion) 砖红色针晶 207℃ -H
-CH 3
大黄酚(Chyrsophanol)
金色片状结
晶
196℃
大黄中蒽醌苷元，其结构不同，因而酸性强弱也不同。

大黄酸连有-COOH ，酸性最强；大黄素连有β-OH ，酸性第二；芦荟大黄素连有苄醇-OH ，酸性第三；大黄素甲醚和大黄酚均具有1,8-二酚羟基，前者连有-OCH 3和-CH 3，后者只连有-CH 3，因而后者酸性排在第四位。

（二）实验目的和要求
1．熟悉蒽醌类成分的提取分离方法 2．掌握PH 梯度法的原理及操作技术。

3．学习用硅胶柱色谱分离精制大黄素 4．学习羟基蒽醌类化合物鉴定方法。

（三）实验流程图 略
（四）实验步骤
1、酸水解用天平称取大黄粉10g，置500ml烧杯中，加20%硫酸水溶液100ml，直火加热1h，用布氏漏斗抽滤，滤饼水洗后于70度左右干燥。

2、总羟基蒽醌苷元的提取滤饼经干燥后，置索氏提取器中（预习索氏提取器的结构原理和使用方法、注意事项），加入乙醚150ml，回流提取2h，得乙醚提取液。

乙醚提取液经TLC检查有大黄酸、芦荟大黄素、大黄素、大黄素甲醚和大黄酚。

薄层板为硅胶CMC-Na板，展开剂为石油醚-乙酸乙酯，展开后在可见光下可看到四个斑点，Rf=0.9的黄色斑点为大黄酚和大黄素甲醚混合物，在此条件下分不开，其余三个斑点，按Rf值由大到小分别为大黄素（橙色斑点）、芦荟大黄素（黄色斑点）、大黄酸（黄色斑点）。

3、pH梯度萃取分离
（1）大黄酸的分离与精制
将上述乙醚提取液以5%碳酸氢钠溶液振荡萃取，水层呈紫红色。

分出水层，再重复萃取数次，直至不显红色为止。

合并水层萃取液，用盐酸酸化至pH3左右，即得黄色沉淀。

过滤，先用水洗沉淀数次，再用少量冰冷的丙酮洗，以除去有色杂质。

干燥后以冰醋酸或吡啶结晶2-3次，得黄色针状结晶。

经TLC与标准品对照鉴定为大黄酸。

（2）大黄素的分离与精制
碳酸氢钠溶液提取后的乙醚层再以5%碳酸钠溶液振荡萃取数次，水层呈红色，合并水层提取液，加盐酸至酸性，得黄色沉淀，过滤，用水洗沉淀，以冰冷丙酮洗，在冰醋酸或吡啶中结晶数次，得橙色大针状结晶。

经TLC与标准品对照为大黄素。

（3）芦荟大黄素的分离和精制
碳酸钠溶液提取后的乙醚层，再经0.25%氢氧化钠溶液振荡萃取数次，水层呈红色，合并水层，加盐酸至酸性，得橙色沉淀。

过滤后用水洗沉淀，干燥后在冰醋酸或乙酸乙酯中结晶数次，得橙色长针状结晶。

经TLC鉴定为芦荟大黄素。

（4）大黄酚和大黄素甲醚的分离与提纯
上述萃取后的乙醚层用5%氢氧化钠溶液振荡萃取数次，直至无色。

合并深红色的水层溶液，加盐酸至酸性，得黄色沉淀。

过滤水洗，干燥后得大黄酚和大黄素甲醚混合物，将此混合物溶于乙酸乙酯中，用硅胶柱色谱分离，洗脱剂为石油醚-乙酸乙酯（15:1）混合液，先洗脱下的化合物为大黄酚，后洗脱下的化合物为大黄素甲醚，再分别经乙酸乙酯结晶纯化，两者经TLC鉴定皆为纯品。

4、硅胶柱色谱精制大黄素
（1）装柱：取100-200目硅胶约10g，按湿法装住
（2）加样：将大黄素粗提物溶于5ml石油醚-乙酸乙酯（7:3）混合溶剂中，用吸管吸取样品溶液于色谱柱床顶端。

（3）洗脱：用石油醚-乙酸乙酯（7:3）为洗脱剂洗脱，分段收集，每份10ml，用TLC 跟踪检查。

请大家先预习硅胶柱色谱的湿法和干法装柱及上样的相关注意事项
（五）注意事项
1、酸水解过程中加热时间应足够长，以保证水解充分。

2、同一碱液萃取分为数次，以保证萃取充分，可用TLC监测。

3、乙醚总提取物要用保鲜膜封严实，防止乙醚挥发。

（六）实验报告要求
①记录大黄蒽醌的提取方法及其原理。

②比较大黄素、大黄酸、大黄素甲醚的酸性及在TLC中的Rf值（附色谱图）。

3、仪器及试剂。