高效液相色谱HPLC简介
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度的检测器。它具有波长固定，波长可变和光二极管阵列三种类型。 特点：选择性检测器、对流量和温度敏感性低、灵敏度较高（10-9g）。 ◆ 折光指数检测器（RID） 原理：监测参比池和测量池中溶液的折射率之差来测量试样浓度的检测器。 特点：通用性检测器，温变化要保持在±0.001℃、灵敏度低（10-6g）。
3、废液流入废液瓶。
遇到复杂的混合物分离（极性范围比较宽）还可用梯度控制器作梯度洗脱。 这和气相色谱的程序升温类似，不同的是气相色谱改变温度，而ＨＰＬＣ改变的是 流动相极性，使样品各组分在最佳条件下得以分离。
• （二）高效液相色谱的分离过程
•
同其他色谱过程一样，ＨＰＬＣ也是溶质在固定相和流动相之间进行的一
高效液相色谱HPLC简介
项目 进样方式 流动相 分离原理 检测器
应用范围
HPLC的特点
高效液相色谱法 样品制成溶液
溶液 吸附、分配、筛析、亲和等
UVD、PDAD、RID等 低、中、高沸点有机化合物
离子型无机化合物 热不稳定化合物 生物活性分子
高效液相色谱HPLC简介
气相色谱法 样品需气化或裂解
惰性气体 吸附和分配 TCD、FID、ECD等
高效液相色谱HPLC简介
紫外吸收检测器有三种类型
固定波长紫外吸收检测器：低压汞灯提供固定254nm或280nm紫外光。 可变多波长检测器：氘灯做光源，光栅分光 光二极管阵列检测器photo－diode－array detector（PDAD，PDA, DAD）： 钨灯和氘灯组合光源，进入检测池的不是单色光，而是一段紫外波长上的光。 PDA 可以辅助定性。
高效液相色谱（HPLC效液相色谱(HPLC)？
• HPLC (High Performance Liquid Chromatography ) —高效液相色谱 法
• 是一种区别于经典液相色谱,基于仪器方法的高效能分离手段: 高性能色谱柱,高精度输液泵,高灵敏度检测器…
• 反相柱------固定相通常是以硅胶为基质，表面键合有极性相对较弱官能团 的键合相。反向色谱所使用的流动相极性较强，通常为水、缓冲液与甲醇、 乙腈等的混合物。样品流出色谱柱的顺序是极性较强的组分最先被冲洗出， 而极性弱的组分会在色谱柱上有更强的保留。 常用的反向填料有：C18（ODS）、C8（MOS）、C4（Butyl）、C6H5（Phenyl） 等。
高效液相色谱HPLC简介
液相色谱分析法的特点
在技术上采用了高压泵、高效固定相和高灵敏度检测器，实现了分析速度快、 分离效率高和操作自动化。兼具分离和分析功能，可以在线检测。
高效液相色谱HPLC简介
高效液相色谱法的主要类型及原理
1、液-液分配色谱 2、液-固吸附色谱 3、离子交换色谱 4、离子对色谱 5、离子色谱 6、排阻色谱 7、亲和色谱(AC)
高效液相色谱HPLC简介
检测器简介（三）
◆ 蒸发光散射检测器（ELSD） 原理：通过检测光散射程度而测定溶质浓度的检测器。
色谱柱后流出物在通向检测器途中，被高速载气 （氮气）喷成雾状液滴，再进入蒸发漂移管中，流 动相不断蒸发，含溶质的雾状液滴形成不挥发的微 小颗粒，被载气载带通过检测器。在检测器中，光 被散射的程度取决于溶质颗粒的大小与数量。 特点：消除了溶剂的干扰，不受温度变化影响，灵敏 度高，是通用型检测器。
高效液相色谱HPLC简介
液相色谱类型
• 正相色谱：固定相为极性，流动相为非极性。 • 反相色谱：固定相为非极性，流动相为极性。用的最多，约占60～70％。
高效液相色谱HPLC简介
色谱柱简介
• 正相柱------固定相通常为硅胶以及其他具有极性官能团胺基团，如（NH2） 和氰基团（CN）的键合相填料。 由于硅胶表面的硅羟基（SiOH）或其他极性基团极性较强，因此，分离 的次序是依据样品中各组分的极性大小，即极性较弱的组份最先被冲洗出色 谱柱。正相色谱使用的流动相极性相对比固定相低，如正已烷，氯仿，二氯 甲烷等。
高效液相色谱HPLC简介
液-液分配色谱
固定相与流动相均为液体（互不相溶）； 基本原理：组分在固定相和流动相上的分配； 流动相：对于亲水性固定液，采用疏水性流动相，即流动相的极性小于固定 液的极性（正相 normal phase），反之，流动相的极性大于固定液的极性 （反相 reverse phase）。正相与反相的出峰顺序相反； 固定相：早期涂渍固定液，固定液流失，较少采用； 化学键合固定相：将各种不同基团通过化学反应键合到硅胶（担体）表面的 游离羟基上。反相键合相色谱柱最常用的就是ODS柱，也就是C18柱。
种连续多次交换过程。它借溶质在两相间分配系数、亲和力、吸附力或分子大小不
同而引起的排阻作用的差别使不高同效溶液相质色得谱以HP分LC离简。介
操作过程图示
高效液相色谱HPLC简介
色谱分离的机理
分离是一个 物理的过程。
固定相(Stationary Phase) 流动相(Mobile Phase) 样品 (溶解于流动相中的溶质)
• 广泛应用于各个领域: 医药,环保,石化,生命科学,食品工业,农业…
• 无论在技术上,理论上,还是在应用上仍处于发展阶段
高效液相色谱HPLC简介
液相色谱分析法
（一）高效液相色谱分析的流程
1、由泵将储液瓶中的溶剂吸入色谱系统，然后输出，经流量与压力测量之后，导 入进样器。
2、被测物由进样器注入，并随流动相通过色谱柱，在柱上进行分离后进入检 测器，检测信号由数据处理设备采集与处理，并记录色谱图。
低沸点有机化合物 永久性气体
高效液相色谱HPLC简介
高效液相色谱仪构造
高效液相色谱HPLC简介
HPLC的仪器配置及流程
色谱泵及控制器
数据处理及控制
色谱柱 检测器
Waters 486
进样器
高效液相色谱HPLC简介
检测器简介（一）
◆ 紫外吸收检测器（UVD） 原理：用特定波长的紫外光照射样品池，通过检测透光率的变化来测定样品浓
高效液相色谱HPLC简介
检测器简介（二）
◆ 电导检测器（ECD） 原理：监测溶液的电导率变化的检测器。 特点：选择性检测器、测量时要求恒温、对流动相的组成变化有明显响应、 灵敏度低（10-3g）。适用于离子型化合物。
◆ 荧光检测器（FLD） 原理：某些溶质在紫外光激发后能发射可见光（荧光）的性质检测。 特点：选择性检测器、灵敏度高（10-12g）、对流量和温度敏感性低。
3、废液流入废液瓶。
遇到复杂的混合物分离（极性范围比较宽）还可用梯度控制器作梯度洗脱。 这和气相色谱的程序升温类似，不同的是气相色谱改变温度，而ＨＰＬＣ改变的是 流动相极性，使样品各组分在最佳条件下得以分离。
• （二）高效液相色谱的分离过程
•
同其他色谱过程一样，ＨＰＬＣ也是溶质在固定相和流动相之间进行的一
高效液相色谱HPLC简介
项目 进样方式 流动相 分离原理 检测器
应用范围
HPLC的特点
高效液相色谱法 样品制成溶液
溶液 吸附、分配、筛析、亲和等
UVD、PDAD、RID等 低、中、高沸点有机化合物
离子型无机化合物 热不稳定化合物 生物活性分子
高效液相色谱HPLC简介
气相色谱法 样品需气化或裂解
惰性气体 吸附和分配 TCD、FID、ECD等
高效液相色谱HPLC简介
紫外吸收检测器有三种类型
固定波长紫外吸收检测器：低压汞灯提供固定254nm或280nm紫外光。 可变多波长检测器：氘灯做光源，光栅分光 光二极管阵列检测器photo－diode－array detector（PDAD，PDA, DAD）： 钨灯和氘灯组合光源，进入检测池的不是单色光，而是一段紫外波长上的光。 PDA 可以辅助定性。
高效液相色谱（HPLC效液相色谱(HPLC)？
• HPLC (High Performance Liquid Chromatography ) —高效液相色谱 法
• 是一种区别于经典液相色谱,基于仪器方法的高效能分离手段: 高性能色谱柱,高精度输液泵,高灵敏度检测器…
• 反相柱------固定相通常是以硅胶为基质，表面键合有极性相对较弱官能团 的键合相。反向色谱所使用的流动相极性较强，通常为水、缓冲液与甲醇、 乙腈等的混合物。样品流出色谱柱的顺序是极性较强的组分最先被冲洗出， 而极性弱的组分会在色谱柱上有更强的保留。 常用的反向填料有：C18（ODS）、C8（MOS）、C4（Butyl）、C6H5（Phenyl） 等。
高效液相色谱HPLC简介
液相色谱分析法的特点
在技术上采用了高压泵、高效固定相和高灵敏度检测器，实现了分析速度快、 分离效率高和操作自动化。兼具分离和分析功能，可以在线检测。
高效液相色谱HPLC简介
高效液相色谱法的主要类型及原理
1、液-液分配色谱 2、液-固吸附色谱 3、离子交换色谱 4、离子对色谱 5、离子色谱 6、排阻色谱 7、亲和色谱(AC)
高效液相色谱HPLC简介
检测器简介（三）
◆ 蒸发光散射检测器（ELSD） 原理：通过检测光散射程度而测定溶质浓度的检测器。
色谱柱后流出物在通向检测器途中，被高速载气 （氮气）喷成雾状液滴，再进入蒸发漂移管中，流 动相不断蒸发，含溶质的雾状液滴形成不挥发的微 小颗粒，被载气载带通过检测器。在检测器中，光 被散射的程度取决于溶质颗粒的大小与数量。 特点：消除了溶剂的干扰，不受温度变化影响，灵敏 度高，是通用型检测器。
高效液相色谱HPLC简介
液相色谱类型
• 正相色谱：固定相为极性，流动相为非极性。 • 反相色谱：固定相为非极性，流动相为极性。用的最多，约占60～70％。
高效液相色谱HPLC简介
色谱柱简介
• 正相柱------固定相通常为硅胶以及其他具有极性官能团胺基团，如（NH2） 和氰基团（CN）的键合相填料。 由于硅胶表面的硅羟基（SiOH）或其他极性基团极性较强，因此，分离 的次序是依据样品中各组分的极性大小，即极性较弱的组份最先被冲洗出色 谱柱。正相色谱使用的流动相极性相对比固定相低，如正已烷，氯仿，二氯 甲烷等。
高效液相色谱HPLC简介
液-液分配色谱
固定相与流动相均为液体（互不相溶）； 基本原理：组分在固定相和流动相上的分配； 流动相：对于亲水性固定液，采用疏水性流动相，即流动相的极性小于固定 液的极性（正相 normal phase），反之，流动相的极性大于固定液的极性 （反相 reverse phase）。正相与反相的出峰顺序相反； 固定相：早期涂渍固定液，固定液流失，较少采用； 化学键合固定相：将各种不同基团通过化学反应键合到硅胶（担体）表面的 游离羟基上。反相键合相色谱柱最常用的就是ODS柱，也就是C18柱。
种连续多次交换过程。它借溶质在两相间分配系数、亲和力、吸附力或分子大小不
同而引起的排阻作用的差别使不高同效溶液相质色得谱以HP分LC离简。介
操作过程图示
高效液相色谱HPLC简介
色谱分离的机理
分离是一个 物理的过程。
固定相(Stationary Phase) 流动相(Mobile Phase) 样品 (溶解于流动相中的溶质)
• 广泛应用于各个领域: 医药,环保,石化,生命科学,食品工业,农业…
• 无论在技术上,理论上,还是在应用上仍处于发展阶段
高效液相色谱HPLC简介
液相色谱分析法
（一）高效液相色谱分析的流程
1、由泵将储液瓶中的溶剂吸入色谱系统，然后输出，经流量与压力测量之后，导 入进样器。
2、被测物由进样器注入，并随流动相通过色谱柱，在柱上进行分离后进入检 测器，检测信号由数据处理设备采集与处理，并记录色谱图。
低沸点有机化合物 永久性气体
高效液相色谱HPLC简介
高效液相色谱仪构造
高效液相色谱HPLC简介
HPLC的仪器配置及流程
色谱泵及控制器
数据处理及控制
色谱柱 检测器
Waters 486
进样器
高效液相色谱HPLC简介
检测器简介（一）
◆ 紫外吸收检测器（UVD） 原理：用特定波长的紫外光照射样品池，通过检测透光率的变化来测定样品浓
高效液相色谱HPLC简介
检测器简介（二）
◆ 电导检测器（ECD） 原理：监测溶液的电导率变化的检测器。 特点：选择性检测器、测量时要求恒温、对流动相的组成变化有明显响应、 灵敏度低（10-3g）。适用于离子型化合物。
◆ 荧光检测器（FLD） 原理：某些溶质在紫外光激发后能发射可见光（荧光）的性质检测。 特点：选择性检测器、灵敏度高（10-12g）、对流量和温度敏感性低。