乙醇法提取水产品中的组胺 共24页PPT资料
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考虑乙醇浓度、乙醇提取时间、乙醇提取温度三个因 素进行了单因素试验，在单因素基础上进行了L9(33)的正 交试验对组胺测定中的组胺提取条件进行优化。
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国标法中样品预处理方法 去除鱼中不可食部分，将其捣碎、混匀，准确称取
10g (精确到0. 01g)样品于50ml小烧杯中，加入20mL三氯 乙酸（10%）作提取剂，在室温下浸提2h-3h，过滤，取 1.0ml滤液于分液漏斗中，用氢氧化钠溶液（250g/L）调 pH9-10。加入3.0ml正戊醇，振摇5min，提取三次。合并 滤液并用正戊醇定容至10.0ml。取1.0ml正戊醇提取液于 分液漏斗中用1mol/L盐酸提取3次，合并盐酸提取液并用 盐酸溶液定容至10.0ml，备用。
10
结果与分析
乙醇溶液对胶体金显色的影响 试验结果表明较高浓度的乙醇溶液（100%、90%、80%、
70%、60%、50%）会使胶体金沉淀，颜色由红变蓝，从而干 扰试验结果。随着选用乙醇浓度的降低，发现45%浓度的乙 醇溶液使胶体金试剂由红变蓝的程度减小，当使用40%浓度 的乙醇溶液与胶体金混合时，胶体金颜色未发生任何反应。 因此，试验中选用40%及以下的乙醇溶液作为提取剂。
2
组胺作为人体内源活性物质，在生物细胞中具有重要 的生理功能，但是当人体摄入过量的组胺时，会引起食物 中毒，严重的还会危及生命。据研究发现当鱼内组胺含量 达到4mg/g 或人体摄入组胺达到1.5mg/kg 体重以上时， 易发生中毒。许多国家的食品卫生标准中建议用组胺含量 作为鱼类和水产品中微生物腐败的指标。我国的食品卫生 标准中也明确规定各类海产品中组胺的允许摄入量为鲐鱼 不得超过100mg/100g，其它不得超过 30mg/100g，其它国 家也有对部分食品中组胺含量做了严格的限量要求。
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测定方法 标准曲线的绘制
分别吸取0.00、0.20、0.40、0.60、0.80、1.00ml组胺 标准使用液于10ml比色管中，再加入1ml1mol/L盐酸溶液。 于各标准管中各加入15%碳酸钠溶液3ml，偶氮试剂3ml，加 水至10.0ml，混匀，放置10min后于480nm处测吸光值，以组 胺含量为横坐标，以吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线，同 时求得的直线回归方程为：
3
目前国内、外用于组胺的测定方法有AOAC 的生物学 法(954. 04)、化学法(957. 07)、荧光法(977. 13) 和国 标法GB/T5009.45-2019。但这些方法需用特殊的仪器设备 ，所用试剂、器较多，操作繁琐、费时。它们都很难达到 现场快速检测的要求。胶体金法检测组胺是一种具有快速 简便等优点的定性方法，其原理是组胺可以使胶体金分子 凝聚沉淀，反应体系由红色变成蓝色，根据反应体系由红 变蓝的程度可快速定性食物被组胺污染的程度，而快速检 测的方法必须有配套快速的样品预处理技术。
Y=0.0192X+0.008 R2=0.9968； X—吸光度；Y—组胺含量（µg）。
9
国标法中样品的测定 准确吸取样品处理液1.0mL于10mL比色管中，再分别
加入3.0mL偶氮试剂和3.0mL碳酸钠溶液，用水定容至10ml， 混匀，静置10min，然后以零管为参比，于480nm波长测定 其吸光值，最后根据标准曲线回归方程计算出组胺的含量。 乙醇提取法中样品的测定
4
国标法中样品预处理是水产品捣碎后用三氯乙酸浸泡一 段时间后，过滤，再用正戊醇萃取滤液中的组胺，最后用盐 酸提取后用分光光度法测定。由于当中所用试剂三氯乙酸、 盐酸等都可以与胶体金试剂反应，生成蓝色沉淀，干扰试验 结果，因此必须建立一种适用于胶体金快速检测的样品预处 理方法。
根据组胺的性质，组胺是容易溶解于乙醇溶液的，因此 本文拟用乙醇法来提取水产品中的组胺，以满足胶体金法快 速检测水产品中组胺的需要。
分别配制浓度为1µg/ml、5µg/ml、10µg/ml的组胺乙 醇溶液和组胺水溶液，按1.2.6.3所述的方法进行组胺的 测定，考查组胺对分光光度法显色体系的影响。
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乙醇提取方法 去除鱼中不可食部分，将其捣碎、混匀，准确称取
10g (精确到0. 01g)样品于50ml小烧杯中，用20ml一定浓 度的乙醇溶液作提取剂，在一定温度和时间下对样品进行 处理，过滤。 乙醇提取条件的探讨
5
方法步骤
乙醇溶液对胶体金显色的影响 用无水乙醇和蒸馏水配制浓度梯度为100%、90%、80%、
70%、60%、50%、45%、40%的乙醇溶液，用移液枪准确吸 取各浓度的乙醇溶液20μ l与等体积的胶体金在1.5mlBaidu Nhomakorabea应 管中均匀混合，静置3min后观察反应现象。 乙醇溶液对分光光度法测定的影响
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提取时间对组胺测定结果的影响
由图2可知，随着提取时 间的增加，组胺的测定结果 随着增加，在50min时，测量 结果最大；延长提取时间， 测量的结果变化不明显，可 能是样品中的组胺已经基本 溶出，因此为了节约时间， 提取时间初步定为50min。
准确吸取样品处理液1.0mL于10mL比色管中，再分别 加入1ml盐酸溶液（1mol/L）、3.0mL偶氮试剂和3.0mL碳 酸钠溶液，再用水定容至10ml，混匀，静置10min，以零 管为参比，于480nm波长测定其吸光值，最后根据标准曲 线回归方程计算出组胺的含量。 统计方法
利用SAS和Excel软件进行统计分析和数据处理
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乙醇溶液对分光光度法测定的影响
由表1可看出，乙醇体系和水体系中组胺测定的结 果没有显著差异，因此乙醇溶液对分光光度法测定组胺 没有显著影响。可在一定浓度的乙醇体系下用分光光度 法测定样品中组胺含量。
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单因素试验结果
乙醇的浓度对组胺测定结果的影响 由图1可知，乙醇的浓
度从0%到40%，随着浓度的 增加，测量结果有较快的 增加，可能是随着乙醇的 浓度的增大，组胺的溶解 度增加，组胺的提取率随 着提高，因此乙醇浓度40% 为佳。
乙醇法提取水产品中的组胺
食品科学与工程： 指导教师：
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前言
组胺（Histamine, HA）的化学名4（5）—（2-氨乙 基）咪唑，属于生物胺。组氨酸遇到富含组氨酸脱羧酶 的细菌(如摩根氏变形杆菌、组胺无色杆菌、埃希氏大肠 杆菌、链球菌、葡萄球菌等)污染后可使鱼肉中的游离组 氨酸发生氨基酸脱羧反应产生组胺，反应如下：
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国标法中样品预处理方法 去除鱼中不可食部分，将其捣碎、混匀，准确称取
10g (精确到0. 01g)样品于50ml小烧杯中，加入20mL三氯 乙酸（10%）作提取剂，在室温下浸提2h-3h，过滤，取 1.0ml滤液于分液漏斗中，用氢氧化钠溶液（250g/L）调 pH9-10。加入3.0ml正戊醇，振摇5min，提取三次。合并 滤液并用正戊醇定容至10.0ml。取1.0ml正戊醇提取液于 分液漏斗中用1mol/L盐酸提取3次，合并盐酸提取液并用 盐酸溶液定容至10.0ml，备用。
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结果与分析
乙醇溶液对胶体金显色的影响 试验结果表明较高浓度的乙醇溶液（100%、90%、80%、
70%、60%、50%）会使胶体金沉淀，颜色由红变蓝，从而干 扰试验结果。随着选用乙醇浓度的降低，发现45%浓度的乙 醇溶液使胶体金试剂由红变蓝的程度减小，当使用40%浓度 的乙醇溶液与胶体金混合时，胶体金颜色未发生任何反应。 因此，试验中选用40%及以下的乙醇溶液作为提取剂。
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组胺作为人体内源活性物质，在生物细胞中具有重要 的生理功能，但是当人体摄入过量的组胺时，会引起食物 中毒，严重的还会危及生命。据研究发现当鱼内组胺含量 达到4mg/g 或人体摄入组胺达到1.5mg/kg 体重以上时， 易发生中毒。许多国家的食品卫生标准中建议用组胺含量 作为鱼类和水产品中微生物腐败的指标。我国的食品卫生 标准中也明确规定各类海产品中组胺的允许摄入量为鲐鱼 不得超过100mg/100g，其它不得超过 30mg/100g，其它国 家也有对部分食品中组胺含量做了严格的限量要求。
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测定方法 标准曲线的绘制
分别吸取0.00、0.20、0.40、0.60、0.80、1.00ml组胺 标准使用液于10ml比色管中，再加入1ml1mol/L盐酸溶液。 于各标准管中各加入15%碳酸钠溶液3ml，偶氮试剂3ml，加 水至10.0ml，混匀，放置10min后于480nm处测吸光值，以组 胺含量为横坐标，以吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线，同 时求得的直线回归方程为：
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目前国内、外用于组胺的测定方法有AOAC 的生物学 法(954. 04)、化学法(957. 07)、荧光法(977. 13) 和国 标法GB/T5009.45-2019。但这些方法需用特殊的仪器设备 ，所用试剂、器较多，操作繁琐、费时。它们都很难达到 现场快速检测的要求。胶体金法检测组胺是一种具有快速 简便等优点的定性方法，其原理是组胺可以使胶体金分子 凝聚沉淀，反应体系由红色变成蓝色，根据反应体系由红 变蓝的程度可快速定性食物被组胺污染的程度，而快速检 测的方法必须有配套快速的样品预处理技术。
Y=0.0192X+0.008 R2=0.9968； X—吸光度；Y—组胺含量（µg）。
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国标法中样品的测定 准确吸取样品处理液1.0mL于10mL比色管中，再分别
加入3.0mL偶氮试剂和3.0mL碳酸钠溶液，用水定容至10ml， 混匀，静置10min，然后以零管为参比，于480nm波长测定 其吸光值，最后根据标准曲线回归方程计算出组胺的含量。 乙醇提取法中样品的测定
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国标法中样品预处理是水产品捣碎后用三氯乙酸浸泡一 段时间后，过滤，再用正戊醇萃取滤液中的组胺，最后用盐 酸提取后用分光光度法测定。由于当中所用试剂三氯乙酸、 盐酸等都可以与胶体金试剂反应，生成蓝色沉淀，干扰试验 结果，因此必须建立一种适用于胶体金快速检测的样品预处 理方法。
根据组胺的性质，组胺是容易溶解于乙醇溶液的，因此 本文拟用乙醇法来提取水产品中的组胺，以满足胶体金法快 速检测水产品中组胺的需要。
分别配制浓度为1µg/ml、5µg/ml、10µg/ml的组胺乙 醇溶液和组胺水溶液，按1.2.6.3所述的方法进行组胺的 测定，考查组胺对分光光度法显色体系的影响。
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乙醇提取方法 去除鱼中不可食部分，将其捣碎、混匀，准确称取
10g (精确到0. 01g)样品于50ml小烧杯中，用20ml一定浓 度的乙醇溶液作提取剂，在一定温度和时间下对样品进行 处理，过滤。 乙醇提取条件的探讨
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方法步骤
乙醇溶液对胶体金显色的影响 用无水乙醇和蒸馏水配制浓度梯度为100%、90%、80%、
70%、60%、50%、45%、40%的乙醇溶液，用移液枪准确吸 取各浓度的乙醇溶液20μ l与等体积的胶体金在1.5mlBaidu Nhomakorabea应 管中均匀混合，静置3min后观察反应现象。 乙醇溶液对分光光度法测定的影响
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提取时间对组胺测定结果的影响
由图2可知，随着提取时 间的增加，组胺的测定结果 随着增加，在50min时，测量 结果最大；延长提取时间， 测量的结果变化不明显，可 能是样品中的组胺已经基本 溶出，因此为了节约时间， 提取时间初步定为50min。
准确吸取样品处理液1.0mL于10mL比色管中，再分别 加入1ml盐酸溶液（1mol/L）、3.0mL偶氮试剂和3.0mL碳 酸钠溶液，再用水定容至10ml，混匀，静置10min，以零 管为参比，于480nm波长测定其吸光值，最后根据标准曲 线回归方程计算出组胺的含量。 统计方法
利用SAS和Excel软件进行统计分析和数据处理
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乙醇溶液对分光光度法测定的影响
由表1可看出，乙醇体系和水体系中组胺测定的结 果没有显著差异，因此乙醇溶液对分光光度法测定组胺 没有显著影响。可在一定浓度的乙醇体系下用分光光度 法测定样品中组胺含量。
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单因素试验结果
乙醇的浓度对组胺测定结果的影响 由图1可知，乙醇的浓
度从0%到40%，随着浓度的 增加，测量结果有较快的 增加，可能是随着乙醇的 浓度的增大，组胺的溶解 度增加，组胺的提取率随 着提高，因此乙醇浓度40% 为佳。
乙醇法提取水产品中的组胺
食品科学与工程： 指导教师：
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前言
组胺（Histamine, HA）的化学名4（5）—（2-氨乙 基）咪唑，属于生物胺。组氨酸遇到富含组氨酸脱羧酶 的细菌(如摩根氏变形杆菌、组胺无色杆菌、埃希氏大肠 杆菌、链球菌、葡萄球菌等)污染后可使鱼肉中的游离组 氨酸发生氨基酸脱羧反应产生组胺，反应如下：