高效液相色谱

一、高效液相色谱法的主要类型 （一） 吸附色谱法 （二） 液-液分配色谱 （三） 离子交换色谱 （四） 排阻色谱色谱 （五） 亲和色谱
二、化学键合相色谱法
化学键合固定相：
将各种不同基团通过化学反应键合到载体表面 （如：硅胶的游离羟基上），形成均一、牢固的 单分子薄层而构成。
（一）正相键合相色谱法 固定相：极性键合相 流动相：非极性或弱极性溶剂 应用：中等极性或极性较强可溶于有机溶剂的 分子型化合物 （二）反相键合相色谱法 固定相：非极性键合相 流动相：极性（水-甲醇、水-乙腈） 应用：非极性或中等极性溶剂分子型化合物
阴离子分离：常采用烷基铵类，如氢氧化四丁 基铵或氢氧化十六烷基三甲铵作为对离子；
阳离子分离：常采用烷基磺酸类，如己烷磺酸 钠作为对离子；
常用的反相离子对色谱：非极性的疏水固定相， 含有对离子X- 的甲醇-水或乙腈-水作为流动 相，试样离子Y+进入流动相后，生成疏水性离 子对Y+ X -后；在两相间分配。
（三） 反相离子对色谱法
• 原理： 将一种（或多种）与溶质离子电荷相反的 离子（对离子或反离子）加到流动相中使 其与溶质离子结合形成疏水性离子对化合 物，使其能够在两相之间进行分配；
Q+ + X- = QX流动相 = QX固定相
•适用：酸、碱；易电离的有机化合物（核酸、 核苷、儿茶酚胺、生物碱、药物）
• 固定相： 载体和配 基构成
• 流动相： 适当pH、 离子强度和化学组 成一定的平衡缓冲 溶液。
返回
第三节 高效液相色谱仪
•输液系统、进样系统、色谱柱、检测器、 组分收集、数据处理
•等度洗脱：流动相组成配比不变 •梯度洗脱：洗脱过程中连续或阶段地改变 流动相的组成
•检测器：紫外可见光检测器、示差折光率 检测器、荧光检测器、电化学检测器、电 导检测器
第十八章 高效液相色谱法
第一节 高效液相色谱法的主要类型和原理 第二节 固定相和流动相及其选择（略） 第三节 高效液相色谱仪
流动相：液体 固定相：液体、固体 •特点： 高效理论塔板数高达104-105数量级 高速：高压泵、梯度洗脱、柱后直接检测 高灵敏度 高度自动化
第一节 高效液相色谱法的主要类型 和原理
返回
三、其他高效液相色谱法
离子交换色谱法 分子排阻色谱法 手性色谱法 亲和色谱法
（四） 排阻色谱色谱
1 固定相： 凝胶(具有一定大小孔隙分布) 不具有吸附、分配和离子交换作用的化学 惰性多孔物质。
ห้องสมุดไป่ตู้
亲和色谱
1 原理：利用生物大分子和固定相表面存在 的某种特异性亲和力，进行选择性分离。
先在载体表面键合上一种具有一般反应性能 的所谓间隔臂(环氧、联胺等)，再连接上配 基(酶、抗原等)，这种固载化的配基将只能 和具有亲和力特性吸附的生物大分子作用而 被保留。改变淋洗液后洗脱。