磁珠分选原理及应用

人类干细胞分选微珠与试剂盒
• CD34微珠及多选微珠：用于从骨髓、外周血、脐带血中分选 造血干细胞、内皮前体细胞 • CD133微珠：用于从骨髓、外周血、脐带血中分选 造血干细胞、内皮前体细胞、多能成体干细胞（MAPC） • CD117微珠：用于从骨髓、外周血、脐带血中分选 造血干细胞、骨髓间充质细胞 • CD45/GlyA去除分选试剂盒：用于从骨髓中阴选分选 多能成体干细胞（MAPC） • CD105微珠：用于从骨髓中分选间充质细胞 • 抗成纤维细胞微珠：用于从骨髓中分选间充质细胞 多能成体干细胞（MAPC） • MSC分选工具（CD271）new：用于从骨髓中分选间充质细胞
MD0044.02
主要卖点
干细胞产品：人类：CD133、CD34、MSC试剂盒（CD271） 小鼠：系别阴性试剂盒、CD117微珠 定向分化培养基 DC产品： 人类：BDCA-1、BDCA-2/4 小鼠：CD11c NK产品： 人类：NK细胞阴选试剂盒、CD3/CD56 T细胞产品： CD4+CD25+调节性T细胞（人和小鼠） CSA系列 CD4、CD8微珠及阴选试剂盒 B细胞产品： CD19微珠及阴选试剂盒 肿瘤细胞分选：癌细胞富集试剂盒、HEA微珠、CD45阴选 单核细胞分选：CD14微珠及阴选试剂盒 间标微珠 死细胞去除试剂盒 预选滤器、FCR阻断剂、T细胞活化与扩增试剂盒 流式细胞仪抗体（价廉、包装量大、优质）
CD11c CD4
MACS® 技术分选与分析大鼠DC细胞
New
Anti-DC(OX62) 微珠 • 用于从大鼠外周血、淋巴和非淋巴组织中分选或者去 除OX62+DC。 • 单克隆抗体OX62识别表达于大部分大鼠DC上的整合 素αE2亚单位（分子量150kDa）。 • 两个主要的树突状细胞亚群：CD4/OX41双阳性和 CD4/OX41双阴性亚群。 • 该抗原也表达于表皮TCRα/β+或γ/δ+的T细胞亚群和垂 体前叶星状滤泡样（S100+）细胞的一个亚群，但在朗 格罕氏细胞和巨噬细胞上不表达。
抗原特异性 再刺激
•
捕获试剂 标记
•
细胞因子 分泌阶段
•
荧光标记和 磁性分选
•
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MACS® 细胞因子分泌细胞分析与分选 New
分选前 分选后
刺激组
未刺激组
*百分比均为占CD4＋细胞百分比
MD0420.02
MACS® 细胞因子分泌细胞分析New
刺激组
未刺激组
使用PE- CMVpp65/HLA/A2- tetramers 和IFN-g Secretion Assay - Detection Kit (APC) or IL-2 Secretion Assay - Detection Kit (APC)检测 HLA/A2 CMV+ 患者PBMC。 *百分比均为占CD8＋细胞百分比
MD0044.02
去除后再阳性分选CD4+CD25+双阳性细胞
1. 去除非CD4+ T 细胞。 用生物素化抗体混合物和抗生物素微珠间接磁性标 记非CD4+ T 细胞 磁性分选去除标记细胞
先行流出为 CD4+ T 细胞
2. CD25微珠直接磁性标记CD25+细胞
阳性分选靶细胞
CD4+ CD25+ 调节性T滞留在分选柱上，离开磁场后 洗脱下来
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去除分选
磁性标记
分选未磁性标记细胞
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MACS细胞分选策略
3、去除分选后再阳性分选：
• 即先去除非目的细胞，再进行阳性分选。
• 适用范围：
》非目的细胞也表达用来阳性选择目的细胞的抗原。 》要分选非常稀有细胞，先去除非目的细胞再行阳性分选， 可获得高纯度的目的细胞。
MD0197.02
MACS技术原理
MACS(Magnetic Activated Cell Sorting)： =免疫学+细胞生物学+磁力学
• 基于抗体对抗原的特异性识别 • 磁性微珠直接或者间接偶联在抗体上，从而与细胞相连 • 在高强度、梯度磁场中达到细胞磁性分离的目的
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MACS® 磁性分选
IFN-r IL-2 IL-4 IL-10 TNF-a
MD0044.02
MACS® 细胞因子分泌细胞分析与分选 New
Catch Reagent
secreted cytokine
Anti-PE MicroBeads Detection Antibody
cytokine secreting cell
• 专利产品 • 将磁场扩大1000－10000倍 ——高纯度，高回收率
在MS柱中产生的强大磁场
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MACS技术
设备与试剂
• MACS分选柱：
MACS技术
设备与试剂
• MACS分选器：从手动到自动，从实验室到临床
MACS技术
设备与试剂
• MACS分选器
autoMACS分选仪
• 9种程序，一机完成所有细胞分选 • 成本低，两个可重复使用的分选 柱（2周内100次） • 快速（3－10分钟） •重复性好 • 全自动分选，仪器操作简单 • 适用范围广：从少量标本（105） 到大量标本（4X109），进样量 0.5ml-50ml • 8种全血微珠，可以做常见细胞的 全血分选，省去了费时的提取单个 核细胞过程
Miltenyi Biotec: 免疫磁珠分选技术及应用
德国美天旎生物技术有限公司
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内容
• MACS技术原理 • MACS技术设备及分选策略 • 几种特殊的MACS分选
分选和分析DC细胞 分选各种T细胞 分选和分析细胞因子分泌细胞 分选造血干细胞 分选人类肿瘤细胞 分选和分析凋亡和死亡细胞 分选转染细胞 分子生物学和蛋白生化的分选
MD0420.02
MACS® 细胞因子分泌细胞分析与分选
New
人类细胞因子分泌细胞 分选与检测试剂盒 • IFN-g 分泌细胞 • IL-2分泌细胞 • IL-4分泌细胞 • IL-10分泌细胞 • TNF-分泌细胞 小鼠细胞因子分泌细胞分 选与检测试剂盒 • IFN-g 分泌细胞 • IL-2分泌细胞 • IL-4分泌细胞 • IL-5分泌细胞 • IL-10分泌细胞
MD0044.02
识别DC和DC亚群 New
DC 亚群特异性标志: Blood Dendritic Cell Antigens
Lineage- (CD3, CD14, CD16, CD19, CD20, CD56) HLA-DR+ CD11c+ CD123low/-
BDCA-2/4+ BDCA-1+ BDCA-3+
MACS微珠进行 磁性标记
洗脱阳性分 选的细胞
未标记的细胞 先行流出
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分选前标本制备：过滤
MACS预选滤器： 30m
MD0197.02
MACS 技术
设备与试剂
» MACS微珠 » MACS分选柱
» MACS 分选器
» 详细分选方案*
MD0197.02
MACS技术
设备与试剂
• MACS微珠：
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MACS® 细胞分选策略
• 阳性分选
• 去除分选 • 去除分选后再阳性分选
• 多重分选
MD0044.02
MACS细胞分选策略
1、阳性分选：
• 根据特异性标志分选细胞: 阳性分选是指目的细胞磁性标记
后，作为阳性的标记组分直接分选出来。
• 优点：
》高纯度，尤其是富集稀有的细胞 》高回收率 》操作简便、迅速
MACS细胞分选策略
4、多选微珠：
多选微珠标记 终止解离反应
MACS 分选
根据第二标志 进行磁珠标记
磁性颗粒的酶解离
MACS 分选
MD0652.01
MACS畅销机器与分选柱
• MiniMACS starting kit：1个分选架、1个MiniMACS分选器、1盒MS 分选柱、1支价值7500元试剂（15088元）：可做阳性分选、小量标本、间标去 除分选、分子生物学分选 • Mini&MidiMACS starting kit：1个分选架、1个MiniMACS分选器、 1 个MidiMACS分选器、1盒MS分选柱、 1盒LS/LD分选柱、1支价值7500元试剂 （27838元）：可做阳性分选和去除分选 • MS分选柱：1盒25个，2763元 • LS分选柱：1盒25个，4356元 • LD分选柱：1盒25个，5100元
MD0044.02
MACS® 技术分选与分析功能性T细胞
T细胞分选
T细胞亚群
T细胞功能亚群
抗原特异性 T细胞
Th细胞（ CD4） Tc细胞（ CD8） 调节性 T细胞 (CD4+CD25+) TCRr/d 细胞 (TCRr/d微珠 ) NK/T细胞 (CD56多选微珠＋ CD3微珠 )
NaiveT细胞 (CD45RO阴选 ) 活化 T细胞（ CD69、 CD25、 CD30） 效应 T细胞（ CD27） 记忆 T细胞（ CD45RA阴选、 CD45RO阳选） Th2细胞 (anti-CRTH2)
MACS 微珠是与高度特异性单克隆抗体相偶联的超顺 磁化微粒，可用于目的细胞的磁性标记。
• 特性：
50nm大小 对细胞没有毒性 可生物降解 不影响细胞特性
MACS技术分选的CD8+ T 细胞
微珠
MD0057.03
MACS微珠
直标微珠
多选微珠
间标微珠
பைடு நூலகம்
MACS技术
设备与试剂
• MACS分选柱：
》填充有不同规格的铁珠。 》铁珠表面有亲水包被，不损伤细胞。 》无菌包装。 》可用于分选多种细胞及亚细胞物质、 细菌、病毒、mRNA和蛋白质。
MACS技术主要优势
• 小磁珠: 50 nm（快速、不活化细胞、不沉淀）
• 保留细胞功能（直接进行后续实验；无毒性；氧化 铁和多聚糖组成，可生物降解）
• 与流式细胞仪兼容（不影响细胞光学特性、不影响荧 光抗体标记、与流式细胞仪分选联合使用可以缩短流 式分选时间） • 快速、简便、无菌
• 适用范围广（磁珠种类多、从少量到大量、适用于分 选各种细胞、亚细胞物质）
MD0044.02
主要竞争对手分析
Dynal：大磁珠 主要市场：CD4、CD8等高频细胞， 优势：价格 劣势：回收率低（不能做低频细胞、弱表达细胞分选） 磁珠必需剪切（耗时——细胞状态不佳） 大磁珠（活化细胞）
我们的优势：纯度高、回收率高、细胞活性好 不活化细胞，不改变细胞功能 省时、省细胞 产品品种最多，有专利产品 有手动、自动、临床级产品 有强大的技术支持队伍 很好的声誉，市场占有率最高
• uMACS与u或者M分选柱：分子生物学分选
• VarioMACS分选仪
• autoMACS自动分选仪、CliniMACS分选仪
MD0044.02
MACS几种畅销磁珠与抗体
• 专利产品：CD133、CD303、CD304 • 特殊产品：人类DC系列：BDCA-1(CD1c)、BDCA-2(CD303)、 BDCA-3(CD141)、BDCA-4(CD304) 小鼠DC系列：mPDCA微珠与抗体 干细胞产品： CD133、CD271微珠与抗体 细胞因子分泌细胞：CSA分选与分析 TH2细胞： CD294(CRTH)微珠与抗体 分选人类肿瘤细胞：上皮肿瘤：CK、HEA 非血液肿瘤：CD45去除 死亡细胞去除试剂盒 分选转染细胞 分选HIV病毒、mRNA、cDNA • top ten：CD133、CD34、人CD4+CD25+、小鼠CD4+CD25+ CD303/CD304、人类NK、小鼠CD11c、anti-PE 微珠 小鼠干细胞试剂盒（系别阴性＋CD117）、CD4/CD8
New
CD11c
CD11c+ B220+ Gr-1 (Ly-6C/G)+ DC
Conventional DC
Plasmacytoid DC (PDC)
CD11c B220 Gr-1
CD8+ DC
(―lymphoid― DC)
CD4+ DC
(―myeloid― DC)
mPDCA-1
CD11c CD8a
CD11c- CD123+
PDC BDCA-2(CD303)+ BDCA-4(CD304)+
MDC
CD123low CD123-
MDC1 BDCA-1(CD1c)+
MDC2 BDCA-3(CD141)+ +
MACS® 技术分选与分析小鼠DC细胞
PE FITC APC
CD11c+ B220- DC CD11c+ DC
MD0044.02
阳性分选策略
MACS® 微珠磁性 标记
将分选柱移 出磁场，洗 脱阳性分选 细胞
未标记细胞先行流出
MD016102
MACS细胞分选策略
2、去除分选：
• 去除分选是磁性标记非目的细胞，并将其从细胞混合物中去
除，即未磁性标记的细胞为目的细胞。
• 去除分选策略适用范围：
》去除不需要的细胞 》缺乏针对目的细胞的特异性抗体（如肿瘤细胞） 》不需要抗体和目的细胞结合 》需进一步通过阳性选择分选细胞亚群