铁皮石斛组培讲义
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（2）原球茎发生型
器官发生型途径：
器官发生型通过外植 体组织培养，使预先存在 的分生组织形成芽(如腋芽) 或不定分生组织(如子叶、 茎段、愈伤组织等)形成不 定芽。
原球茎发生型途径：
指通过石斛适宜外植 体诱导产生胚性愈伤组织 并增殖，随后形成类胚组 织原球茎进而发育成完整 的再生植株。
通常由种子离体培养产生 的胚性组织称原球茎 (protocorm)，而外植体 叶尖、基尖等诱导形成的 胚性组织称为拟原球茎 (protocorm like bodies) 即PLBs。原球茎或拟原球 茎转入不含任何激素或生 长素的培养基(如MS)便可 再生出完整小植株。
石斛试管苗可直接栽在树干或岩石上， 也可以盆栽。在阴凉潮湿、长有苔藓的树干 和岩石上，栽种石斛成活率高。盆栽选用木 屑、吸水石、砂岩、片麻岩等作基质，然后 覆上苔藓或青杠树树皮粉进行栽种，效果较 好。试管苗栽后宜放在荫棚内，荫蔽度要求 60％～80％。石斛喜湿润，怕积水。积水会 使根茎腐烂，叶片脱落而死。当移栽苗根伸 长后，每月用MS大量元素1000倍稀释液喷施 追肥，促进生长发育。
通常铁皮石斛采用种子及茎段为外植体进行组培快繁
•种子外植体培养： 种子胚萌发→愈伤组织诱导→原球茎诱导→原球茎分化→ 发芽等过程 种子诱导出无菌苗的时间在20~35天之间， 种子诱导率一般为75%~90% ， ·茎段外植体培养：
茎段→丛生芽→完整植株 茎段外植体自植入培养基中10天后，其茎节部芽体就出现 突起，并产生丛生芽族，不仅生长快，而且芽体粗壮。 30天后能生成健壮完整的芽体，不需要经历原球茎诱导阶 段 茎段诱导率为90%~98% ；
铁皮石斛的组织培养
（1）铁皮石斛的基本概念 （2）铁皮石斛的药用价值 （3）组培技术
第三小组 小组成员：贾静 周玉兰 郭朝慧 黄晓燕 葛亚琼 平然 付祥龙 陈曦林
一、铁皮石斛的基本概念：
1、概念：
铁皮石斛，为兰科多年生附生草本植 物，石斛属。全世界兰科约有500属， 15000多种，石斛属是兰科中最大的属之 一。生于海拔达1600米的山地半阴湿的 岩石上，喜温暖湿润气候和半阴半阳的 环境，不耐寒。一般均能耐－5℃的低温。 铁皮石斛为石斛之极品，它因表皮呈铁 绿色而得名。铁皮石斛具有独特的药用 价值，以其茎入药，中药名：石斛。
•将已经灭菌地石斛茎段，在无菌条件 下切成至少带有一个茎节地茎段，接 种于事先准备好的诱导芽培养基中诱 导出芽。
• 从茎尖或茎段培养得到的小苗，大多 数是无根小源自文库，需转入1／2MS加马铃 薯进行生根和壮苗培养，才能出管移 栽。
④试管苗移栽
组培出的试管苗，最后移到大田栽培称为放养。 当幼苗在试管中长到3～5cm高时，即可出管。为 使试管苗移栽后适应自然环境，移栽前要先揭开 瓶塞放在室内自然光下炼苗7～10天，以提高小苗 的抗性。出管取苗要小心操作，不能折断根部。 从试管取出的苗须洗净附着在其根部的琼脂，然 后3～5株一丛种植。石斛苗具有群体抗性作用， 丛栽比单株栽培效果好。春季气温逐渐回升，有 利于试管苗适应自然环境，最宜移栽试管苗。
二、铁皮石斛的药用价值：
（1）增强免疫功能 （2）促进消化 （3）护肝利胆 （4）抗风湿 （5）降低血糖血脂降低血胆固醇和甘油三脂。 （6）抗肿瘤 （7）保护视力 （8）滋养肌肤
（9）抗衰老
三、铁皮石斛的组培培养：
•组织培养获得石斛再生植物株的途径 （1）器官发生型：
无菌短枝型(又称节培法） 芽增殖型 器官发生型
2、形态特征：
茎直立，圆柱形，长9-35厘米，粗2-4毫米，不分枝， 具多节，节间长1-3-1.7厘米，常在中部以上互生3-5枚叶； 叶二列，长圆状披针形，基部下延为抱茎的鞘，边缘和中 肋常带淡紫色；叶鞘常具紫斑，老时其上缘与茎松离而张 开，并且与节留下1个环状铁青的间隙。总状花序常从落 了叶的老茎上部发出，具2-3朵花；浅白色，卵形，萼片 和花瓣黄绿色，唇盘密布细乳突状的毛，并且在中部以上 具1个紫红色斑块；蕊柱黄绿色，长约3毫米，花期3-6月。
培养条件
石斛组培常用的温度为(26±1) ℃
光强1 600～2 000 lx
日照光8~12h/d
（1）组培苗在光照度为2000lx ，温度以22 ℃ 为宜。 (2) 在20 一22 ℃ 时丛生芽增殖较好，温度超过 25 ℃ 丛生芽就开始分化成苗。
实验步骤：
①原材料清洗
选择生长旺盛、无病害的铁皮石斛健康植株， 每2 节为一段放入500ml 的烧杯中，加入少量 洗衣粉，用纱布单层棚扎杯口，然后用工程线 扎紧，放在自来水龙头下冲洗30min，冲水量调 整到能使铁皮石斛茎段在水中漂动为好。
石斛原球茎极易增殖。在我们 试验中，把一小块原球茎放在1／ 2MS培养基上培养1个月，就能产 生许多新的原球茎，增殖率为4倍 以上。原球茎必须定时转接，继 代培养时间过长，会白化而死。 当继代次数较多，原球茎个体变 小时，应进行原球茎复状工作。 用1／2MS加马铃薯培养基代培养 1～2次，可达到复状目的。在较 低温度时(20℃以下)原球茎增殖 缓慢，可用低温方式保存原球茎。 石斛原球茎可以不断分割，不断 增殖，如此重复可达到大量繁殖 的效果。
主要作用是洗去外表尘土和大颗粒菌落、 菌丝等。
②材料二次消毒灭菌
将上述完成后的材料带到无菌室超净工作 台上，进行二次消毒灭菌: 将茎段腋芽的苞叶 拨去。
70% 的酒精速浸25s，
用0.1%的升汞
溶液浸泡10min，
用无菌水冲洗5 次，
灭菌过程中不断摇动烧杯使灭菌更加彻底，以
去掉表面药物残留。
③接种
谢谢！
实验材料
石斛材料：选取1 年生铁皮石斛植株上生长 健壮的茎段，摘去叶片和膜质叶鞘，剪成约 2 cm长带节的小段。 培养基：常用的培养基为MS。 （1）芽增殖培养基：MS＋NAA0.1～0.5毫 克／升＋BA0.5～2.0毫克／升； （2）壮苗培养基：MS无激素培养基； （3）生根培养基：1/2MS+IBA0.1毫克／升
培养基附加物：
（1）天然添加物
在基本培养基中加人香蕉汁、马铃薯汁、绿豆芽汁、 苹果汁仁、椰子乳等能促进铁皮石斛幼苗的生长和根系 的发育，香蕉汁的促进作用最为显著。
（2）炭源
铁皮石斛在生根培养时加入活性炭有利于试管苗的 生长，能使根系长得更加粗壮闭。唐桂香等认为在培养 基中添加活性炭有助于提高试管苗的成活率，但对苗的 根数和根长影响小。
器官发生型途径：
器官发生型通过外植 体组织培养，使预先存在 的分生组织形成芽(如腋芽) 或不定分生组织(如子叶、 茎段、愈伤组织等)形成不 定芽。
原球茎发生型途径：
指通过石斛适宜外植 体诱导产生胚性愈伤组织 并增殖，随后形成类胚组 织原球茎进而发育成完整 的再生植株。
通常由种子离体培养产生 的胚性组织称原球茎 (protocorm)，而外植体 叶尖、基尖等诱导形成的 胚性组织称为拟原球茎 (protocorm like bodies) 即PLBs。原球茎或拟原球 茎转入不含任何激素或生 长素的培养基(如MS)便可 再生出完整小植株。
石斛试管苗可直接栽在树干或岩石上， 也可以盆栽。在阴凉潮湿、长有苔藓的树干 和岩石上，栽种石斛成活率高。盆栽选用木 屑、吸水石、砂岩、片麻岩等作基质，然后 覆上苔藓或青杠树树皮粉进行栽种，效果较 好。试管苗栽后宜放在荫棚内，荫蔽度要求 60％～80％。石斛喜湿润，怕积水。积水会 使根茎腐烂，叶片脱落而死。当移栽苗根伸 长后，每月用MS大量元素1000倍稀释液喷施 追肥，促进生长发育。
通常铁皮石斛采用种子及茎段为外植体进行组培快繁
•种子外植体培养： 种子胚萌发→愈伤组织诱导→原球茎诱导→原球茎分化→ 发芽等过程 种子诱导出无菌苗的时间在20~35天之间， 种子诱导率一般为75%~90% ， ·茎段外植体培养：
茎段→丛生芽→完整植株 茎段外植体自植入培养基中10天后，其茎节部芽体就出现 突起，并产生丛生芽族，不仅生长快，而且芽体粗壮。 30天后能生成健壮完整的芽体，不需要经历原球茎诱导阶 段 茎段诱导率为90%~98% ；
铁皮石斛的组织培养
（1）铁皮石斛的基本概念 （2）铁皮石斛的药用价值 （3）组培技术
第三小组 小组成员：贾静 周玉兰 郭朝慧 黄晓燕 葛亚琼 平然 付祥龙 陈曦林
一、铁皮石斛的基本概念：
1、概念：
铁皮石斛，为兰科多年生附生草本植 物，石斛属。全世界兰科约有500属， 15000多种，石斛属是兰科中最大的属之 一。生于海拔达1600米的山地半阴湿的 岩石上，喜温暖湿润气候和半阴半阳的 环境，不耐寒。一般均能耐－5℃的低温。 铁皮石斛为石斛之极品，它因表皮呈铁 绿色而得名。铁皮石斛具有独特的药用 价值，以其茎入药，中药名：石斛。
•将已经灭菌地石斛茎段，在无菌条件 下切成至少带有一个茎节地茎段，接 种于事先准备好的诱导芽培养基中诱 导出芽。
• 从茎尖或茎段培养得到的小苗，大多 数是无根小源自文库，需转入1／2MS加马铃 薯进行生根和壮苗培养，才能出管移 栽。
④试管苗移栽
组培出的试管苗，最后移到大田栽培称为放养。 当幼苗在试管中长到3～5cm高时，即可出管。为 使试管苗移栽后适应自然环境，移栽前要先揭开 瓶塞放在室内自然光下炼苗7～10天，以提高小苗 的抗性。出管取苗要小心操作，不能折断根部。 从试管取出的苗须洗净附着在其根部的琼脂，然 后3～5株一丛种植。石斛苗具有群体抗性作用， 丛栽比单株栽培效果好。春季气温逐渐回升，有 利于试管苗适应自然环境，最宜移栽试管苗。
二、铁皮石斛的药用价值：
（1）增强免疫功能 （2）促进消化 （3）护肝利胆 （4）抗风湿 （5）降低血糖血脂降低血胆固醇和甘油三脂。 （6）抗肿瘤 （7）保护视力 （8）滋养肌肤
（9）抗衰老
三、铁皮石斛的组培培养：
•组织培养获得石斛再生植物株的途径 （1）器官发生型：
无菌短枝型(又称节培法） 芽增殖型 器官发生型
2、形态特征：
茎直立，圆柱形，长9-35厘米，粗2-4毫米，不分枝， 具多节，节间长1-3-1.7厘米，常在中部以上互生3-5枚叶； 叶二列，长圆状披针形，基部下延为抱茎的鞘，边缘和中 肋常带淡紫色；叶鞘常具紫斑，老时其上缘与茎松离而张 开，并且与节留下1个环状铁青的间隙。总状花序常从落 了叶的老茎上部发出，具2-3朵花；浅白色，卵形，萼片 和花瓣黄绿色，唇盘密布细乳突状的毛，并且在中部以上 具1个紫红色斑块；蕊柱黄绿色，长约3毫米，花期3-6月。
培养条件
石斛组培常用的温度为(26±1) ℃
光强1 600～2 000 lx
日照光8~12h/d
（1）组培苗在光照度为2000lx ，温度以22 ℃ 为宜。 (2) 在20 一22 ℃ 时丛生芽增殖较好，温度超过 25 ℃ 丛生芽就开始分化成苗。
实验步骤：
①原材料清洗
选择生长旺盛、无病害的铁皮石斛健康植株， 每2 节为一段放入500ml 的烧杯中，加入少量 洗衣粉，用纱布单层棚扎杯口，然后用工程线 扎紧，放在自来水龙头下冲洗30min，冲水量调 整到能使铁皮石斛茎段在水中漂动为好。
石斛原球茎极易增殖。在我们 试验中，把一小块原球茎放在1／ 2MS培养基上培养1个月，就能产 生许多新的原球茎，增殖率为4倍 以上。原球茎必须定时转接，继 代培养时间过长，会白化而死。 当继代次数较多，原球茎个体变 小时，应进行原球茎复状工作。 用1／2MS加马铃薯培养基代培养 1～2次，可达到复状目的。在较 低温度时(20℃以下)原球茎增殖 缓慢，可用低温方式保存原球茎。 石斛原球茎可以不断分割，不断 增殖，如此重复可达到大量繁殖 的效果。
主要作用是洗去外表尘土和大颗粒菌落、 菌丝等。
②材料二次消毒灭菌
将上述完成后的材料带到无菌室超净工作 台上，进行二次消毒灭菌: 将茎段腋芽的苞叶 拨去。
70% 的酒精速浸25s，
用0.1%的升汞
溶液浸泡10min，
用无菌水冲洗5 次，
灭菌过程中不断摇动烧杯使灭菌更加彻底，以
去掉表面药物残留。
③接种
谢谢！
实验材料
石斛材料：选取1 年生铁皮石斛植株上生长 健壮的茎段，摘去叶片和膜质叶鞘，剪成约 2 cm长带节的小段。 培养基：常用的培养基为MS。 （1）芽增殖培养基：MS＋NAA0.1～0.5毫 克／升＋BA0.5～2.0毫克／升； （2）壮苗培养基：MS无激素培养基； （3）生根培养基：1/2MS+IBA0.1毫克／升
培养基附加物：
（1）天然添加物
在基本培养基中加人香蕉汁、马铃薯汁、绿豆芽汁、 苹果汁仁、椰子乳等能促进铁皮石斛幼苗的生长和根系 的发育，香蕉汁的促进作用最为显著。
（2）炭源
铁皮石斛在生根培养时加入活性炭有利于试管苗的 生长，能使根系长得更加粗壮闭。唐桂香等认为在培养 基中添加活性炭有助于提高试管苗的成活率，但对苗的 根数和根长影响小。