HPLC测定甘草提取物中甘草酸的含量

HPLC 测定甘草提取物中甘草酸的含量

徐树芸,王海宁　(贵州省药品检验所,贵州贵阳550004)

摘要　[目的]建立甘草提取物中甘草酸的含量测定方法。[方法]采用高效液相色谱法测定甘草提取物中甘草酸的含量。使用C 18柱,以甲醇-0.2m ol/L 醋酸铵溶液-冰醋酸(61∶39∶1)为流动相,检测波长为250nm 。[结果]线性关系良好,平均回收率为99.52%,RSD 为2.4%。[结论]该方法精密度高,分离度良好,可用甘草提取物的质量控制。关键词　甘草提取物;甘草酸;高效液相色谱法中图分类号　O657.7+2 文献标识码　A 文章编号　0517-6611(2008)24-10297-01

作者简介　徐树芸(1954-),女,贵州贵阳人,主管药师,从事药品检

验监督工作。

收稿日期　2008202219

甘草提取物为健阳胶囊处方组成之一,制法为取甘草粉碎成粗粉,按照流浸膏与浸膏剂项下的渗漉法,先用水将药材均匀湿润后,再用5%氨水浸渍24h ,用水作溶剂,缓缓渗漉,收集渗漉液,渗漉液赶氨后浓缩至相对密度为1.09～

1.11的清膏。真空干燥,粉碎成细粉,备用。由于原标准中

仅有制法而并无甘草提取物质量控制方法,在申报品种保护时,国家药监局保护办提出建立甘草提取物的含量测定要求。液相色谱法操作简便、精密度好、稳定、结果可靠。因此,笔者采用高效液相色谱法测定甘草提取物中甘草酸的含量,旨在为提高药品质量标准,控制甘草提取物的质量提供依据。

1　材料与方法

1.1　材料　仪器:LC 210A 型高效液相色谱仪(日本岛津公

司);SPD 210A 检测器;威马龙色谱工作站。试验药品:甘草提取物样品由健兴药业提供;甘草酸对照品由中国药品生物制品鉴定所提供;甲醇为色谱纯;水为二次重蒸馏水;醋酸铵溶液、冰醋酸为分析纯。

1.2　方法

1.2.1　色谱条件。色谱柱为Diam onsil (钻石)C 18(250m m ×4.6m m ),粒度5μm ,流动相:甲醇-0.2m ol/L 醋酸铵溶液-冰醋酸(61∶39∶1),柱温:25℃,流速:1m l/m in ,检测波长:250nm 。1.2.2　对照品溶液的制备。精密称取甘草酸单铵盐对照品

适量,加流动相制成每1m l 含0.2mg 的溶液(折合甘草酸为

0.1959mg ),即得。

1.2.3　供试品溶液的制备。取甘草提取物样品0.1g ,精密

称定,置具塞锥形瓶中,精密加入流动相25m l ,称定重量,超声处理20m in ,取出,放冷,再称定重量,用流动相补足减失重量,摇匀,滤过,即得。

1.2.4　标准曲线的制备。精密吸取甘草酸单铵盐对照品液(0.2172mg/m l )2、6、10、14、18μl 分别注入液相色谱仪,记录

色谱,以峰面积(A )对质量数(C )进行线性回归计算。

1.2.5　精密度试验。分别精密吸取供试品溶液10μl ,重复进样5次,按正文所述色谱条件测定,记录色谱,计算。

1.2.6　重现性试验。取样品按供试品溶液制备方法制备5

份供试品溶液,分别精密吸取供试品溶液10μl 进样,记录色谱,计算。

1.2.7　加样回收率试验。准确称取已知含量的样品0.05g

各5份,精密加入甘草酸单铵盐适量(约相当于样品0.025g 所含甘草酸单铵盐的量),按供试品溶液制备法制备,分别进

样

10μl ,计算回收率。

图1

　对照品溶液H P LC 色谱图

图2

　供试品溶液H P LC 色谱图

图3　阴性样品溶液H P LC 色谱图

1.2.8　空白试验。按处方比例及生产制备方法,按供试品

溶液制备项下制备阴性溶液,进样10μl ,记录色谱图。

1.2.9　测定法。分别精密量取对照品溶液与供试品溶液各10μl ,注入液相色谱仪,测定,即得。2　结果与分析

线性回归方程:A =152054.9033C -12271.45,r =

0.9999。结果表明,甘草酸在0.4344～3.9096μg 范围内线性关系良好。精密度试验RSD 为1.1%。重现性试验RSD 为2.0%。加样回收率试验中5份样品平均回收率为

99.52%,RSD 为2.4%。

(下转第10300页)

安徽农业科学,Journal of Anhui Agri.Sci.2008,36(24):10297,10300 责任编辑　王淼　责任校对　卢瑶

腺癌tsFT210细胞的细胞周期抑制在G2/M期,并诱发ts2 FT210细胞发生凋亡[6]。

该植物各器官的挥发油主要成分中,(Z,Z)29,122十八碳二烯酸为茎、花、根、果仁和果皮所共有,分别占挥发油总量的4.90%、13.82%、12.81%、19.26%和9.85%。亚油酸的摄入,可以促进大脑发育,抑制血栓形成,降低血脂和胆固醇,增强免疫力,抑制人体肝癌细胞的生长[7-8]。

邻羟基苯甲酸甲酯具有局部刺激作用,可促进局部血液循环,具有消肿、消炎、镇痛、止痒的作用,临床上用于治疗扭伤、挫伤、腰痛、肌肉痛、神经痛、皮肤搔痒等症,其在茎挥发油中占总含量的3.33%。蝴蝶果茎、叶挥发油还含有叶绿醇,它是合成维生素E和维生素K的原料,在人体内易代谢,且具有降低胆固醇的作用,能够阻碍动物性胆固醇被人体吸收[9]。四氢异喹啉类化合物具有抗真菌活性,其在叶挥发油中也少量存在。

蝴蝶果为油料植物,其茎的挥发油中脂肪酸酯含量较高,达44.15%。蝴蝶果叶和根挥发油中还含有较多的工业原料,如含有较多的增塑剂邻苯二甲酸酯类,叶中含量达总油量的22.21%,根中含量达总油量的7.87%。叶挥发油还含有二丁基羟基甲苯(BHT),它是常用的食品抗氧化剂,此外还含有防腐剂苯甲酸及其酯类。3　结论与讨论

蝴蝶果各部位的挥发油含有丰富的工业原料和活性成分,其虽为稀有植物,物种资源量较少,但具有生长快、产果量高、适应性广等特点[10],具有应用开发的潜力,应重视对该植物其他成分进行深入研究,以发挥稀有植物对人类的贡献。

参考文献

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(4):70.

(上接第10297页)

对照品溶液HP LC色谱图见图1,供试品溶液HP LC色谱图见图2,阴性样品溶液HP LC色谱图见图3,图3表明阴性样品溶液在甘草酸出峰处没有干扰峰。取样品按样品溶液制备操作,分别吸取对照品溶液与样品溶液各10μl进样,按上述色谱条件测定,记录色谱,计算,结果见表1。结果表明,在此色谱条件下采用高效液相色谱法测定甘草酸含量,方法简便,快速,重现性好。

表1　样品含量测定结果

T ab le1　Detection resu lt o f samp le content

批次Batch 含量∥m g/g C ontent

12

平均含量

m g/g

Average

总平均含

量∥m g/g

T otal average

20060401 5.66 5.68 5.67 6.087 20060402 6.76 6.75 6.76

20060403 6.12 6.14 6.13

20060601 6.32 6.33 6.32

20060602 5.96 5.92 5.94

20060603 6.01 5.98 6.00

20060801 5.67 5.67 5.67

20060802 5.87 5.89 5.88

20060803 6.14 6.12 6.13

20061001 6.32 6.42 6.373　结论与讨论

在样品溶液的制备中,曾采用甲醇[1-2]、乙醇、甲醇-0.2m ol/L醋酸铵溶液-冰醋酸(61∶39∶1)提取,结果甲醇、甲醇-0.2m ol/L醋酸铵溶液-冰醋酸(61∶39∶1)作为提取溶剂时,甘草酸单铵盐的含量基本一致,为了方便提取,故采用甲醇-0.2m ol/L醋酸铵溶液2冰醋酸(61∶39∶1)作为提取溶剂。流动相[3-4]曾采用甲醇2水(35∶65)、乙腈2水(44∶56)、乙氰2四氢呋喃-0.05m ol/L磷酸二氢钾(140∶40∶820)、甲醇-0.2 m ol/L醋酸铵溶液-冰醋酸(61∶39∶1),在其他条件相同时,采用甲醇-0.2m ol/L醋酸铵溶液-冰醋酸(61∶39∶1)为流动相,分离效果较好。在此色谱条件下采用高效液相色谱法测定甘草提取物中甘草酸的含量,方法简便、快速、重现性好。参考文献

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00301 安徽农业科学 2008年