细胞学在原发性肺癌诊断中的研究进展

r 小专论r
通讯作者:李 俊,,研究方向:肿瘤细胞学
细胞学在原发性肺癌诊断中的研究进展
谢黎黎综述,李 俊审校
(安徽医科大学第一附属医院肿瘤内科,安徽合肥 230022)
摘要:目前,肺癌的发病率及病死率已跃居全球恶性肿瘤的首位,且早期诊断早期治疗已成为延长患者生存率的关键。

细胞学
检查在肺癌的诊断中占有极其重要的地位,而新兴的细胞学诊断技术及分子生物学的联合检测方法,可提高传统细胞学检查的敏感率,也为肺癌早期诊断的难题提供了可靠的解决途径。

关键词:原发性肺癌;液基细胞学;分子生物学
Recent developm e nt of cytology test i n t he diagnosis
of prim ary lung cancer
X I E L -i l,i LI Jun
(D epart men t of O ncology,The F i r st Aff iliate d H o s p ital of A nhuiM edical Universit y,H efei 230022)
Abstrac t :A t t he present ti m e ,t he m orbi d ity and fata lity rate of l ung cancer i s up t o t he first p l ace of ma li gnant tu m or all over the w orld .
So the diagnosis o f lung cance r i s m ost i m portant as early as possible .C yto l ogy re m a i ns a high pri o rity i n t he d iagno si s o f lung cancer .The assoc i a te techno logy o f developi ng cyto l ogy and m olecu lar b i o l ogy ,w hich advances t he sensiti v ity of cyto l ogy ,offers the settle m ent o f early stage o f lung cancer .K ey word s :pri m a ry l ung cance r ;liquid based cy tology ;m olecu lar b i o l ogy 近年来肺癌的发病率和病死率已跃居全球恶性肿瘤的首位。

尽管现在越来越多新技术的应用,但肺癌的5年生存率仍在14%左右[1],由于肺癌早期症状不明显,且一旦确诊,大部分患者已属中晚期[2]。

因此早期诊断早期治疗室提高肺癌患者生存率的关键。

常规细胞学检查因其简便,创伤小,且特异性较高,已普遍应用于肿瘤的临床诊断,且特异性较高。

但由于受到标本质量,制片染色技术,读片人员经验等多方面的限制,传统细胞学的灵敏性较低,故很多学者在细胞学技术及分子生物学等方面展开研究,以提高细胞学诊断的敏感性和特异性。

1 液基细胞学
液基细胞学检测是90年代发展起来的一项制片技术,已成功应用于妇科肿瘤的筛查和诊断。

目前常用于临床的是液基细胞学膜式制片系统和液基细胞学沉降式制片染色系统。

这两种方法采用/膜式过滤法0分离出采集样本中的杂质,再通过压片技术将细胞制作成涂片。

采用这种使制片总体标本采样量增加,背景清晰,可降低漏诊率及误诊率[3]。

但是由于这两种技术的自身原理限制,无法对送检测的标本细胞进行全面处理。

液基簿层细胞学制片技术是新近出现的一种全新的细胞学检测方法,其核心原理是采用了离心沉淀和细胞粘附技术。

通过梯度离心将粘液和坏死物与有诊断意义的脱落细胞混匀,形成均匀的悬浮液,最后在计算机控制下制成单层薄片。

液基细胞学沉降式制片染色系统可对采集到的标本细胞全部处理,并制片成为有效识别细胞,克服了液基细胞学沉降式制片染色系统和液基细胞学膜式制片系统的最大弱点。

液基簿层细胞学制片技术除了具有液基细胞学膜式制片系统液基细胞学膜式制片系统及液基细胞学沉降式制片染色系统的优点外,其获得的细胞数量更多,核染色鲜明,细胞间
界限分明,更易读片。

液基细胞学可多次制作出相同效果的超薄涂片,提高了细胞学诊断的可靠性。

何沁[4]报道在体腔积液标本的检测中,液基细胞学技术的应用较传统细胞学技术更容易发现肿瘤细胞。

因此,液基细胞学标本室很好的分子生物学研究平台,较传统涂片更适合于进行免疫组化和聚合酶链反应分析和多种实验性研究,为肺癌细胞学诊断提供了更广阔的视野。

2 分子生物学研究2.1 痰 支气管肺癌的起始部位多为支气管粘膜上皮,癌变后肿瘤表面的癌细胞可脱落并随痰液排除体外。

在传统细胞学检查中,痰细胞学的敏感性较低,在液基细胞学的基础上,加强痰液中脱落上皮细胞的相关分子标志物的检查应该是较好的诊断方法。

有学者研究[5],在肺癌癌前病变阶段,3p14.2(即FH IT 基因)等位基因缺失常见。

并且,F I HT 的3个位点在异型增生中广泛存在。

因此,有研究者认为以液基细胞学为基础,检测痰液脱落细胞FH I T 基因可以作为肺癌早期诊断的新途径,并且采取多位点联合检测可以提高诊断的敏感性和特异性[6]。

T ockman [7]等报告了一种敏感的早期肺癌检测的方法,即采用抗核内不均一核糖核蛋白A2/B1(heteroge -neous nuc l ear ri bonucleoprote i n ,H nRN PA 2/B1)单克隆抗体免疫染色痰脱落细胞,在症状和影像学改变出现前2年,肺癌患者痰中即可检测到抗核内不均一核糖核蛋白A2/B1。

,其敏感性与特异性分别为91%及88%,明显优于痰脱落细胞学检查及胸部X 线平片普查肺癌。

故有学者认为临床上对某些怀疑肺癌但影像学阴性、细胞学阴性的患者,进行H nRN PA 2/B1、H n RNPB l 的检查有助于提高诊断率[8]。

另外,人们开始用聚合酶链反应技术对痰中的脱落细胞进行肺癌相关基因的检测。

已有研究发现[9],p53突变和p16超甲基化可能是有希望的痰液筛查指标。

Som er [10]等报道了在肺腺癌患者中,
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们在传统痰细胞学的基础上,以液基细胞学技术为平台,引入分子生物学检测方法,使痰细胞学检查在肺癌早期诊断的方面向前迈进一步。

2.2胸腔积液的细胞学研究胸水中找到肿瘤细胞是确诊恶性胸水的一种快速、可靠且经济的方法。

但是只有当肿瘤侵犯胸壁并且肿瘤细胞脱落至胸水中,才可能在胸水中找到。

采用常规涂片的胸水细胞学方法时,文献报道高达12%的病例会遇到间皮细胞与肿瘤细胞难以鉴别的状况[11]。

图像细胞光度术是继流式细胞分析术之后又一项重要的细胞分析技术,可用于胸水中肺癌脱落细胞的DNA定性定量分析[12]。

其主要技术是通过能与DNA特异性结合的燃料染色后,利用对其吸光度的测量即可对DNA进行定量。

对肿瘤细胞的良恶性及恶性程度、预后加以判断。

恶性细胞由于其DNA含量与正常不同,则称为非整倍体或异倍体。

有研究者[13]认为图像细胞光度术与流式细胞学技术的相关性很好,在少量癌细胞的评估方面优于流式细胞学技术,可提供客观、准确、可靠的良、恶性病变的重要辅助诊断指标,从而提高检测的阳性率。

Y ang[14]等发现胸水沉淀物中W I F-1启动子区域检测作为非小细胞肺癌细胞学检查的辅助方法,并指出W IF-1启动子区域检测在非小细胞肺癌中敏感性为69.4%,特异性100%,且患者的年龄、性别与W IF-1的检查结果无相关性。

有文献报道[15]D2-40抗体免疫组化检测在肿瘤性间皮细胞和反应性间皮细胞中存在差异,提示D2-40可用于鉴别胸水中转移性腺癌和间皮细胞。

而有些研究者发现H B M E-1标记间皮细胞的敏感度为77.2%,特异度为61.2%[16],HB M E-1是用人上皮型恶性间皮瘤细胞悬液作为免疫原制备的单克隆抗体,与存在于间皮细胞微绒毛表面的抗原起反应。

故研究者提出可将D2-40和H B M E-1联合检测,可增加肺癌胸水敏感性。

M OC-31即人类全癌上皮相关糖蛋白-2(hun m an pan-carc i no m a-associated epitheli a l g lycopro te i n-2)。

M OC-31在肺癌、结肠癌等多种上皮源性肿瘤组织中有过度表达,而在间皮源性组织中则不表达或低表达。

因此,有研究者将这一特点应用于胸水中肺癌细胞和反应性间皮细胞的鉴别工作中。

U eda[17]采用M OC-31标记了5例肺腺癌性胸水,其敏感性为100%,而4例反应性间皮性胸水均为阴性表达,特异性为100%,故M OC-31是鉴别肺癌细胞与反应性间皮细胞的重要的肿瘤标志物。

2.3支气管肺泡灌洗液细胞学传统支气管肺泡灌洗液细胞学是利用纤支镜将无菌盐水注入肺泡内,并检测该灌洗液中是否可见肿瘤细胞。

但该方法的敏感性较低,研究者利用分子生物学的方法,检测支气管肺泡灌洗液细胞学中肿瘤细胞基因的改变,从而提高肺癌的诊断率。

F ieldi ng[18]等对23例痰细胞学证实为肺癌的支气管肺泡灌洗液样本中,测定抗核内不均一核糖核蛋白A2/B1基因,其中有22例免疫组化染色阳性。

有研究显示利用PCR技术对支气管肺泡灌洗液中的K-ras,p53基因[19],发现其诊断的特异性高达100%,且与癌组织中K-ras,p53基因的检测比较,并不存在显著差异性,故可考虑将支气管肺泡灌洗液细胞学中基因突变的检查方法代替组织中的检测,以提高肺癌患者接受检查的顺应性。

有学者认为p16基因甲基化是肺癌发生时的最早期事件,而其他基因家族的发生较晚一些。

并有研究发现在无创检测方法中,支气管灌洗液中p16阳性率最[20],可最为无创检查方测定端粒酶活性的研究逐渐兴起,有学者报道[21]其对60支气管肺泡灌洗液中的端粒酶活性进行了测定,检出率为80. 5%,与5例肺癌组织中活性测定率80.0%相近(P>0.05),且解剖起源不同的肺癌支气管肺泡灌洗液端粒酶活性阳性率相近(P>0.05),提示在支气管肺泡灌洗液中检测端粒酶活性可提高肺癌的早期诊断率。

自1930年以来,肺癌细胞学检查已成为肺癌早期诊断及筛查的重要手段。

其特异性高,敏感性低。

为提高其诊断的敏感性,研究者在检查技术和检查方法上进行了一系列的创新及联合。

但是肺癌的诊断并不是任何单纯一种方法即可解决的,就目前来看,肺癌的细胞学诊断联合分子生物学、影像学及内镜技术等多种互补,将有可能解决肺癌早期诊断的难题。

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(收稿日期:2009-12-02)
中医药治疗乳腺增生病的临床应用进展
姜怡,陈进
(安徽省合肥市第二人民医院,安徽合肥230011)
关键词:乳腺增生病;进展;中医药
乳腺增生病(erythroplasia of m a mm aryg l and,E M G)是以乳腺腺泡、导管的上皮组织细胞及结缔组织增生为基本病理变化的一类疾病的总称,是一种既非肿瘤又非炎症的乳腺病变。

乳腺增生病多见于25~45岁女性,其发病率约占育龄妇女的40%左右,占乳房疾病的75%,是最常见的乳房疾病[1],并有一定的癌变倾向。

乳腺增生病的本质上是一种生理增生与复旧不全造成的乳腺正常结构的紊乱,世界卫生组织(WHO)统称良性乳腺结构不良[2]。

近年来各种乳腺疾病发病率都有明显上升趋势,除了严重的危害妇女健康的乳腺癌发病率增高外,女性乳腺良性疾病亦有增加的趋势,如乳腺增生症、乳腺纤维腺瘤、乳管内乳头状瘤等。

其中尤以乳腺增生症发病率更明显增高,已成为女性的常见病和多发病。

乳腺增生病的病因与发病机理目前尚未完全弄清。

但其发病主要是由于内分泌激素失调的观点已为大多数学者所公认。

主要为雌激素水平显著增高,而孕激素水平偏低。

这种雌孕激素平衡的失调,使雌激素长期刺激乳腺组织而无孕激素的节制和保护作用。

故而导致乳腺增生,同时也影响女性的月经及生殖生理,伴月经不调、不孕的发生[3]。

另外与精神因素[4]、药物因素、遗传因素、社会因素及饮食习惯也有密切的关系。

乳腺增生病属中医学/乳癖0/乳痞0/乳中结核0的范畴。

目前多认为情志不畅、忧郁忿怒、饮食内伤、禀赋不足、七情劳倦等是乳腺增生病的致病因素。

病性属本虚标实,冲任失调为发病之本,肝气郁结、痰凝血瘀为发病之标,病位在肝、脾、肾。

肝失疏泄、脾失健运、肾精亏损,以致痰气互结、血瘀成块、冲任失调,阻于乳络而成乳癖。

张定学[5]认为,其病多因恼怒、忧郁、思虑过度而致肝郁气滞、痰凝血瘀而发。

苗萌[6]认为肝郁气滞、冲任不调、痰瘀凝结是本病之因。

郝兰枝[7]认为在该病的形成中,肝郁失疏是其发病基础,痰瘀互结是其病理结果。

郭云玲等[8]认为肝郁气滞是本病的主要病机,从女性生理结构和性情上讲,女子易情绪波动或素有情怀不悦而极易致肝气郁结。

陆德铭[9]认为乳癖之为病,当责之于冲任失调、气滞血瘀,二者互为因果,相互影响。

综上所述:肾虚亏损,气血不足,冲任失调,为发病之本;肝气郁结,气滞血瘀痰凝,为发病之标。

中医中药是目前治疗乳腺增生病的最佳治疗手段之一。

具有改善症状、消除肿块及整体调节的功能。

此外,中药止痛效果好,有效率高,副作用小。

据统计治疗中医治疗乳腺增生病平均有效率为(93.50?6.45)%[10]。

/情志内伤,肝郁气滞;肝肾不足,冲任失调;痰瘀凝结,乳络受阻;阳明胃热,热伤血络0是本病的病机特点。

中医治疗本病一辨证论治为主,辅以其他治疗方法。

1中医药外治
1.1药物外治武巷安[11]将患者随机分为两组,治疗组用中药桃仁、红花、川芎、当归、赤芍、沉香、白芷、三棱、莪术、冰片、皂刺、穿山甲等粉碎成超微细粉,制成的外用膜剂,贴敷于乳房患处,再以TDP灯照射30~40m i n。

对照组根据辨证论治,将150例患者分成肝气郁滞型55例,治以清肝解郁汤;肝郁脾虚型35例,治以柴胡白芍逍遥散;肾虚冲任失调型,治以四物汤和六味地黄汤加减;气血痰凝型,治以桃红四物汤加三棱、莪术、栝楼、海藻等。

两组均治3个月后显示,治疗组效果优于对照组(P<0.05)。

杨小清等[12]外用乳康酊涂擦患处,治疗56例,每日3次,每次5m,l结果治愈23例,有效28例,总有效率91.07%,并与服用复方芦笋胶囊组作对照,疗效明显优于对照组(P<0.05)。

1.2针灸治疗吕美珍等[13]应用电针夹脊穴配合针刺人迎穴治疗乳腺增生病60例,共观察2个月经周期,并与常规针刺乳根、膻中、足三里组作对照,结果治疗组治愈19例,显效17例,有效12例,总有效率96.7%,疗效优于对照组(P<0.
05)。

蔡志红等[14]用火针治疗本病300例,结果治愈240例,好转58例,总有效率99.3%,其疗效明显优于使用传统针刺
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