SDS-PAGE所有详细试剂配方

SDS-PAGE
30%聚丙烯酰胺溶液-----30%（w/v ）Acrylamide 【组分浓度】
【配制方法】
将29克丙烯酰胺和1克N,N’
-亚甲丙烯酰胺溶于总体积为60ml 温热（37℃左右）的去离子水中，充分搅拌溶解，补加水至终体积为100ml 。

µm 微孔滤膜过滤除菌和杂质，储于棕色瓶，4℃避光（用铝箔纸包扎起来）保存。

严格核实PH 不得超过，因可以发生脱氨基反应是光催化或碱催化的。

使用期不得超过两个月，隔几个月须重新配制。

如有沉淀，可以过滤。

【保存条件】
4℃避光（用铝箔纸包扎起来）保存
【注意事项】
丙烯酰胺具有很强的神经毒性并可通过皮肤吸收，其作用具有累积性。

称量丙烯酰胺和N,N’-亚甲丙烯酰胺时应戴手套和面具。

可认为聚丙烯酰胺无毒，但也应谨慎操作，因为它还可能含有少量未聚合材料。

1MTris-HCL （）(浓缩胶buffer) 【组分浓度】1MTris-HCL
【配制方法】
称量碱溶于800mL的去离子水，充分搅拌溶解，加>的浓HCL调节所需要的pH值（大约，大约，大约），将溶液定容至1L，高温高压灭菌后，室温保存。

应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH 值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低个单位。

【保存条件】
室温保存。

【注意事项】
对人体有刺激性，请注意适当防护。

（）(分离胶buffer)
【组分浓度】
【配制方法】1L
称量碱溶于800mL的去离子水，充分搅拌溶解，加浓HCL调节所需要的pH值=，将溶液定容至1L，高温高压灭菌后，室温保存。

（LTris-HCL:和48ml1mol/LHCL混合，加水稀释到100ml终体积。

过滤后40C 保存。

）
【保存条件】
室温保存
【注意事项】
应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低个单位。

10%十二烷基硫酸钠SDS溶液-----10%(w/v)SDS
【组分浓度】10%(w/v)SDS
【配制方法】
称取2g高纯度的SDS置于100~200ml烧杯中，加入约16ml的去离子水，68℃加热溶解，滴加浓盐酸调节PH至，定容至20ml后，室温保存
【保存条件】
室温保存
【注意事项】
对人体有害，请注意防护。

10%过硫酸铵溶液-----10%(w/v)AP
【组分浓度】10%(w/v) 过硫酸铵
【配制方法】
称取过硫酸铵置于离心管，加1mL去离子水吹打溶解，4℃保存
【保存条件】
4℃保存
【注意事项】
10%过硫酸铵溶液在4℃保存时，可使用2周左右，超过期限会失去催化作用
5×Tris-甘氨酸电泳缓冲液----- 5×Tris-Glycine buffer （SDS-PAGE电泳缓冲液）
【组分浓度】
【配制方法】
称取，甘氨酸（glycine），，用800ml蒸馏水或去离子水溶解，充分搅拌溶解，定容至1000ml，室温保存。

得L L甘氨酸电极缓冲液。

临用前稀释5倍。

【保存条件】
室温保存，两年有效。

【注意事项】
配制好的电泳液使用时间不宜超过两周。

电泳缓冲液可以回收，回收后可再使用1-2次，但为了取得最佳的电泳效果，应使用新电泳液。

5×SDS-PAGE加样缓冲液----- 5×SDS-PAGE Loading Buffer
【组分浓度】；
10%(W/V)SDS；
%(W/V) BPB(溴酚蓝)；
50%(V/V) 甘油；
5%(W/V)β-巯基乙醇(2-ME)
【配制方法】
量取 1MTris-HCL（）， SDS，25mg BPB，甘油，置于10mL塑料离心管中，加去离子水溶解后，定容至5mL，小份（份）分装，于室温保存。

使用前将25μL的2-ME加入到每小份中。

加入2-ME的Loading Buffer 可在室温下保存一个月左右。

【保存条件】
-20℃保存，至少一年有效。

【注意事项】
SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(5X)中含少量DTT和巯基乙醇，有轻微刺激性气味，必须完全溶解后再使用。

摘自Takara 商品目录--实验室常规试剂配制方法
TEMED原液直接使用
考马斯亮蓝R-250染色液
【组分浓度】%(w/v)考马斯亮蓝R-250，25%(v/v)异丙醇，10%(v/v)冰醋酸
考马斯亮蓝染色脱色液
【组分浓度】10%(v/v)醋酸，5%(v/v)乙醇。