肺炎支原体IgM说明书

明存在污染。
精密度差
原因⁄错误
解决方法
1、液体处理设备未正 检查移液器设备的校准。
确校准。
2、由于污染了清洗头 定期清洗清洗头的尖端。 尖端不能正常洗涤。
3、洗涤后反应板放置 严格遵循试剂盒说明。 的时间太长（干燥反应
板）。
4、反应板加热不均匀。 维修使用的恒温箱
所有吸光度值均很低 原因⁄错误 1、孵育温度太低。
10X）用酶免级用水进行 10 倍稀释，（1+9）
(二) 试验操作
1.将样本用样本稀释液进行 1：101 稀释（5ul 样本
+500ul 样本稀释液）。
2.吸取 100ul 样本稀释液（2 号瓶）作为试剂空白
3.吸取 50ul 的 IgG 去除试剂（2a 瓶）加入到每个
样本孔中，然后在样本孔中加入 50ul 的稀释好的样
感染、感染已愈或持续感染。
C. 疑难解答
空白太高
原因⁄错误
解决方法
1、污染，其它孔有溢出 避免污染。
液。
2、没有正确稀释浓缩洗 应该按 1∶10（1＋
涤液。
9）稀释。
3、洗涤效果差。
检查洗板机。
4、试剂槽中的 TMB 底物 保留剩余底物溶液
溶液被污染。
直到完成试验。检
查试剂槽中的底物
是否变蓝。变蓝表
原发急性感染时，第一份血清标本中已经可能检测
到 IgM 反应。再感染时 IgM 可能保持阴性。Ani
Labsystems 肺炎支原体 IgA 和 IgG 酶免检测为诊断
急性肺炎支原体感染提供了辅助信息。
非急性传染：阴性结果
稳定或降低的IgG和⁄或IgA水平加上阴性或疑似的
IgM表明可能存在以下一种感染：既往感染、近期
菌技术以避免污染。每一份样本在吸取时都要使 用新的吸头。将 4 所需的样本稀释液、酶结合物、 TMB 底物液加入 5 次性的试剂槽中（试剂盒内提供 6 个） 将未用完的液体丢弃，不要将其倒回原瓶内。 当加底物时，加样器头部要与微孔壁接触。 3.洗涤时可以手工操作或者用洗板机进行。在洗 涤后，将微孔板在纸巾上将水拍干。 4.在 450nm 处以空气调零，参考波长是 620nm （590-690nm）。大多数的微孔板读数仪可以自动 地扣除试剂空白。样本的吸光值可以自动地扣除 试剂空白。然而，试剂空白的吸光值应该在指控 范围内。 注意：所有的肺炎支原体、肺炎衣原体、百日咳杆 菌的IgG、IgA、IgM抗体可以用相同的稀释样本来 进行检测，这样在实验开始时用肺炎支原体或百日 咳杆菌检测试剂盒内的样本稀释液对样本进行稀释 是非常重要的。详细的情况看试剂盒的说明。 【参考值范围】 结果计算 结果以吸光值 ⁄ 临界值（S⁄CO）单位表示。 用下列公式计算：
可能产生错误结果。 长期保存血清（冷冻超过一年）可能导致形成脂质 聚集物。这些聚集物可能引起非特异性结果。 【检验方法】 A.实验前的控制与操作 在实验开始前，将试剂和微孔板平衡至室温（+20 ℃~25℃）。 并将孵育器预热至 37℃。 B.实验设计 样品分配方案如下所示：
微孔板
1
234567891 1 1
洗去多余的患者标本，加入与辣根过氧化物酶结合
的羊抗人IgM抗体。洗去未结合的酶结合物，加入
含有色原（TMB）的无色酶底物（H2O2）。酶与色 原反应生成有色终产物。加入酸（H2SO4）终止显 色反应。颜色强度与患者标本中的肺炎支原体抗体
浓度成正比。
【主要组成成分】
A.主要组成成分： 1.微孔板，12×8孔 包被好的微孔板。 2.样本稀释液，140毫升 磷酸盐缓冲液，含有专利商品添加剂、蓝色显色剂 和0.05％Bronidox®作为防腐剂。 2a.肺炎支原体IgG去除剂，15毫升 抗人IgG，溶于含有添加剂和 0.05％Bronidox®作为
6 个月﹡）
样本稀释液
即用型
6 个月﹡）
肺炎支原体 IgG 即用型 去除剂
对照品
即用型
酶结合物
即用型
TMB 底物溶液 即用型
终ຫໍສະໝຸດ Baidu液
即用型
6 个月﹡）
6 个月﹡）
6 个月﹡）
6 个月﹡） 丢弃试剂槽中未 使用的试剂。底 物中出现深蓝色 表明溶液已被污 染，必须丢弃 6 个月﹡）
浓缩洗涤液 （10X）
用蒸馏水 1+9 稀 释 （1：10）
2、酶结合物被溅出的 人血清污染
解决方法
在 37℃±1℃下孵育。 不同恒温箱的加热效 率差异很大。最好使 用加热效率高且加热 均匀的恒温箱。 所有的吸光值均低。
只要少量的血清就足
以阻断其活性，要特
别注意防止污染。
3、溅出的人血清污染 了微孔
只有少数几个孔的吸 光值非常低，要特别 注意防止污染。
4、试剂变质。 ﹡由于污染或酶结合 物中的辣根过氧化物 酶变质所致。 ﹡由于储藏不当所致。
S⁄CO标本＝（A标本‐A空白）⁄（A临界‐A空白） 其中A标本＝标本的吸光度
A空白＝空白孔的平均吸光度 A临界＝临界对照品的平均吸光度
S/Co
结果
<0.5
阴性
0.5- 1.1
灰区
> 1.1
阳性
【检测结果的解释】
A. 判断标准
当满足以下条件时，测定的结果可被接受：
吸光值
空白
≤0.100
阴性对照 临界值对照
肺炎支原体 IgM 抗体检测试剂盒 （酶联免疫法）
本试剂盒用于人血清或血浆 中肺炎支原体 IgM 抗体的定 性检测。 注册证号：国食药监械（进） 字 2010 第 3401015 号
【产品名称】 通用名称：肺炎支原体 IgM 抗体检测试剂盒
（酶联免疫法） 英文名称：Mycoplasma Pneumoniae IgM EIA 【包装规格】：96 人份/盒 【预期用途】 A.预期用途 肺炎支原体 IgM 抗体检测试剂盒用于定性检测人血 清或血浆中肺炎支原体特异性的 IgM 抗体。 阳性结果可辅助诊断急性肺炎支原体感染。 B.背景介绍 肺炎支原体是最小最简单的自我复制微生物，它完 全没有细胞壁。肺炎支原体是引起无症状性、轻度 或少数严重上呼吸道和下呼吸道感染的常见人类病 原体。已经发现肺炎支原体感染占所有肺炎病例的 15‐20％[1]。肺炎支原体感染通常是地方性的，可 是每隔几年也会见到小规模的流行高峰[1]。肺炎支 原体的传染性较弱，主要感染儿童、青少年和免疫 抑制的成年人[2]。 由于肺炎支原体没有细胞壁，因此常用的β‐内酰胺 类抗生素对它没有作用。因此，正确诊断是调整治 疗方法以缩短病程的基础。血清学被广泛用于常规 检验科检查。如果在间隔大约2‐3周采集的标本中 检测到IgG和或IgA类抗体水平显著变化，或在其中 一个标本中检测到阳性IgM类抗体，即可诊断为急 性肺炎支原体感染。 表面暴露的P1或168‐kDa蛋白是肺炎支原体的主 要致病因子[3-5]。它是一种粘附素蛋白，感染时可 引发免疫应答。相反地，在带菌阶段通常观察不到 此蛋白的抗体[4]。 Ani Labsystems 肺炎支原体 IgG、IgA 和 IgM 酶联免 疫检测使用了带有 P1 片段的抗原凝集技术以保证 高度敏感性和特异性[5]。 建议与 Ani Labsystems 肺炎支原体 IgG 和 IgA 酶免 检测联合使用进行检测。 【检验原理】 Ani Labsystems肺炎支原体IgM酶联免疫检测试剂 盒的原理基于以辣根过氧化物酶作为标记酶的间接 固相酶联免疫测定。根据下列反应进行测定。 病人标本中的肺炎支原体IgM抗体与包被在微孔板 聚苯乙烯表面上的肺炎支原体抗原结合。用洗涤液
20~200ul、100~1000ul和多道50~300ul）。
纸巾或吸水纸。
定时器，至少可测60分钟。
微孔板恒温孵育箱。
酶标仪。
洗板机。
次氯酸钠溶液，游离有效氯为50‐500 mg/l。 一次性手套。
C.实验中各组份的准备
试剂
准备
打开/稀释后试 剂的稳定性
（+2-8℃）
包 被 好 的 微 孔 即用型 板
8.用封口箔封上后在 37℃下孵育 60 分钟。
9.洗板。每孔加入 300-400ul 洗液，洗 5 次，每次
间浸泡 15-30 秒。
10.每孔中加入 100ulTMB 底物溶液，室温下（+20
℃~25℃）避光孵育 30 分钟。
11.每孔中加入 100ul 硫酸终止液。
12.在 450nm（主波长）和 620nm（副波长）处读取 吸光度值。 注意： 为了提高效率和精密度，建议使用 8 通道加样器。 1.用样本稀释液对样本进行 1：101 稀释（5ul 的样 本加入到 500ul 样本稀释液中），混合均匀。临界值 对照须加两个样本孔。稀释后的样本在 4℃下至少 可以稳定 1 周。对照品不要进行稀释。不要向对照 品孔和空白孔内加入除 IgG 试剂。 2.避免污染：当从试剂瓶中吸取液体时，要运用无
本（最后稀释比为 1：202）。混匀
4.向对照品孔内加入即用型的对照品 100ul（3a、
3b 和 3c 瓶）。一式两份
5.用封口箔封好微孔板，在 37℃孵育 60 分钟。
6.洗板。每孔加入 300-400ul 洗液，洗 5 次，每次
间浸泡 15-30 秒。
7.除空白孔外，每孔加入 100ul 的酶结合物。
避免不必要的光照，主要是预防试剂受光影响，因
为酶结合物及 TMB 底物溶液都是光敏感试剂。 不同试剂盒中的以下成分可以通用：
洗液、TMB 底物溶液、终止液
B.需要但未提供的材料
蒸馏水或去离子水，最好是无菌的。
用于稀释试剂的刻度量筒。
保存稀释试剂的试剂瓶。
精密加样器（比如：单道量程为0.5‐10ul、5~50ul、
≤0.150 *) ≥0.250*)
阳性对照
0.850-2.000*)
﹡）已经从这些值中减去了空白孔吸光度。
B. 结果解释 灰区 根据对大约500名芬兰献血者血清和血浆标本进行 分析以及 计算S⁄CO值的分 布 参数，疑 似区 间为 0.5‐1.1。换句话说，得出结果为0.5‐1.1 S⁄CO的 标本被认为是可疑的，应当用成对标本定时地重新 测定以监测IgM抗体的动态。 急性传染：阳性结果
+4℃下一个月， 室温下一个星期
﹡）由铝箔包装的微孔板在打开后，应该和干燥剂 一起密封保存在+2--8 ℃，下，将其开口密封好。开 封试剂只有在+2--8 ℃，正确的保存条件下，它们才 可保持好的稳定性，高的环境温度和污染可降低试 剂的稳定性。 【储存条件及有效期】 本试剂盒储存于+2--8 ℃，有效期 18 个月。 【适用仪器】 A.该试剂盒适用于各种酶标仪 【样本要求】 血清和血浆标本采集后应冷藏（＋4℃），如果不能 在一周内进行试验，标本应冷冻（‐20℃或‐70℃ 中各适合的温度下）。标本不应反复冻融。 由于叠氮化钠可使辣根过氧化物酶失活，因此不要 使用叠氮化钠作为防腐剂。 血清或血浆的热灭活（＋56℃，30分钟）可能引起 非特异性结果。 如果被微生物污染、严重溶血或高脂的血清和血浆，
012
A BLK S1
B BLK S2
C NC S3
D NC S4
E CO S5
F CO S6
G PC S7
H PC S8
图例：BLK＝空白 NC＝阴性对照 PC＝阳性对照
CO=临界值对照
S＝样品
C.检测方法步骤
(一) 试验准备：
1.试剂盒取出后在室温下放置 20-30 分钟，使其恢
复到室温。
2.配制洗涤液：浓缩洗液（WASHING SOLUTION
5、在开始之前未将试 剂恢复至室温。
从试剂瓶移取试剂时 应使用无菌操作以避 免污染，否则可能得 出错误结果。 防止试剂过度光照。 保存在＋4℃下。 开始测定时应当为 ＋20℃‐＋25℃。
防腐剂的磷酸盐缓冲液。 3a.阴性对照品，2.0毫升 肺炎支原体抗体阴性的稀释人血清，含有作为防腐
剂的 0.05％Bronidox®和红色显色剂。 3b.临界值对照品，2.0毫升 肺炎支原体 IgM 抗体处于临界值的稀释后人血清，
含有作为防腐剂的 0.05％Bronidox 和红色显色剂。 3c.阳性对照品，2.0毫升 含有0.05％Bronidox®作为防腐剂和红色显色试剂的 人稀释血清。 4.酶结合物，30毫升 缓冲盐溶液，含有专利商品添加剂、红色显色剂、 与辣根过氧化物酶结合的抗人IgM（羊）和作为防腐 剂的0.1％N‐甲基异噻唑酮。 5.TMB底物溶液，即用型, 18毫升 含有专用商品添加剂和0.01％凯松作为防腐剂的 3,3',5,5'‐四甲基联苯胺和过氧化氢柠檬酸缓冲 液。 6.终止液，25毫升 0.45 M H2SO4 7.洗涤液，100毫升 浓缩的柠檬酸缓冲盐水、含有专有添加剂和作为防 腐剂的0.05％Bronidox®。 微孔板贴膜 2个 试剂槽 6 个 注：试剂应保存在+2℃~+8℃下。 每个组分的标签及包装上均印有效期。