同工酶在疾病诊断中的应用综述

同工酶在疾病诊断中的应用

1342905 徐俊超

摘要：同工酶是指能催化相同的化学反应、但酶蛋白的分子组成、分子结构和理化性质乃至免疫学性质和电泳行为都不相同的一组酶,是生命在长期进化过程中基因分化的产物。本文主要分析同工酶在骨骼、肿瘤、心血管疾病等方面的诊断作用,并阐述其医学意义。

Abstract: Isozyme refers to a set of enzyme catalyzing the same chemical re action, whose composition of zymoprotein molecule , molecular structure and phy sicochemical properties and immunological properties and electrophoretic behavi or are not the same , which is a product during the long evolution in the proce ss of genetic differentiation of life.This paper mainly analyzes the isozyme in such aspects as bone, tumor, cardiovascular disease diagnosis, and explains it s medical significance.

1.同工酶在骨骼疾病诊断中的应用

1.1同工酶在骨质疏松诊断中的应用

1.1.1代表同工酶：骨碱性磷酸同工酶（BAP）

1.1.2诊断方法及原理：

先通过亲和层析法将BAP分离出来,再通过显色反应测定。骨质疏松患者由于骨量缺失,成骨细胞活性代偿性升高,而BAP是由成骨细胞分泌的酶,因此患者的BPA活性会相应地增高,能反应成骨细胞的活性,即BAP对骨质疏松的诊断阳性率最高,从而帮助诊断骨质疏松症。

1.1.3医学意义：

①骨密度测量在疾病阶段上有局限性且花费昂贵。②骨活检对人体有直接损伤。③BAP的检测相比所受影响因素较多的钙、磷更能有效及时且稳定地反应骨形成率。④与广泛寻在于人体各组织器官中的ALP相比,BAP更具有特异性。⑤BAP对长时间的冰冻储存和反复冻融的活性丢失少,在4℃、37 ℃和- 40 ℃能分别保存16天、1天和10个月。[1]

1.2同工酶在佝偻病诊断中的应用

1.2.1代表同工酶：骨碱性磷酸同工酶（BALP）

1.2.2诊断方法及原理：

取患儿末梢循环全血一滴,约30 μl,进行BALP检测,采用骨碱性磷酸酶( BALP) 试剂盒,依据

标准色板检验结果。正常参考值为≤ 200 U /L, 200 ～250 U /L 为可疑病例, ≥ 250 U /L 为诊断佝偻病的临界值。佝偻病患者体内缺乏维生素D,造成骨样骨细胞钙盐沉积不足,骨矿化减弱,使BALP异常升高。

1.2.3医学意义：

①佝偻病早期症状体征多缺乏特异性,易造成漏诊。②X射线摄片在激期之后才比较有意义,即在骨矿含量降至30% ～40% 以下时才能发现异常,且X射线对婴幼儿伤害较大,家长较为抗拒。③BALP 检测操作简便快捷、特异性高、可减少漏诊率,是临床一个准确可靠的生化指标,对佝偻病早期诊断具有重要的指导价值,值得基层医院推广。[2]

2.同工酶在肿瘤、癌症诊断中的应用

2.1同工酶在肿瘤诊断中的应用

2.1.1代表同工酶：碱性磷酸酶(A LP)同工酶

2.1.2诊断方法及原理：

收集患者血清,先经ALP活性测定以及热失活的初步处理,然后用神经氨酸苷酶处理标本,最后用琼脂糖等电聚焦法进行各区带等电点的测定。神经氨酸苷酶可切割A LP 侧链的唾液酸残基, 使分子所带负电荷减少, 从而使区带向阳极泳动速度减慢, 用神经氨酸苷酶处理血清以后, 再进行琼脂糖等电聚焦, 能将混在一起的肝和骨ALP 同工酶分成等电点不同的区带。

2.1.3医学意义：

①琼脂糖等电聚焦可以提高了灵敏度和分辨率,优化了分离,解除了早先琼脂糖电泳法、琼脂电泳法等难以分离肝和骨同工酶等限制。②肿瘤患者的血清中存在有特殊区带,等电点为6.2的区带对诊断肿瘤具有参考价值。[3]

2.2同工酶在肝癌和肝癌骨转移诊断中的应用

2.2.1代表同工酶：碱性磷酸酶(A LP)同工酶

2.2.2诊断方法及原理：

采集患者的非抗凝空腹血3ML,分离血清,用神经氨酸苷酶处理标本,再进行热失活,接着等电聚焦法（IEF）检测,测定肝脏疾病患者血清中的ALP同工酶,在肝癌患者中pI6.5的检出率明显较高,在肝癌骨转移者中PI6.1的检出率也有显著增高。

2.2.3医学意义：

①ALP总活性升高无法判断其来源是肝还是骨ALP,而IEF可分离出4种亚型。②经改良

的琼脂糖等电聚焦法相对现有分离ALP同工酶的方法操作更简便,价格更低廉,灵敏度更高,无需特殊的仪器设备,尤其适合于实验室诊断。③pI6.5亚型可作为肝癌鉴别诊断指标,PI6.1亚型可作为肝癌骨转移鉴别诊断的指标。[4]

3.同工酶在心血管系统疾病中的应用

3.1肌酸激酶同工酶在小儿心肌炎诊断中的应用

3.1.1代表同工酶：肌酸激酶同工酶（CK-MB）

3.1.2诊断方法及原理：

采集心肌炎小儿患者静脉血3 mL ,进行肝素钠抗凝后,联合超敏肌钙蛋白Ｔ（hs-cTnT）进行定量检测。hs-cTnT的正常参考范围：12.4～24.9pg/mL；CK-MB的正常参考范围：0.1～4.9pg/ mL,两者指标均超上界则可诊断为疑似心肌损伤。

3.1.3医学意义：

①单独进行hs-cTnT测定,因释放入血所需时间较长而导致其灵敏度不佳,作为诊断指标效果欠佳。②当前小儿心肌炎诊断方法,如心电图、超声心动图等有效反馈有限。③病毒学检查病毒或血清抗体,需分离病毒,并检测病毒核酸,此方法特异性高但过程复杂；活体组织检查时间长、取材困难、风险高。④hs-cTnT与CK-MB两指标相结合,能对患儿情况是否病及心脏进行及时且准确的评估,可作出早期诊断,赢得治疗时间。[5]

3.2肌酸激酶同工酶在急性心肌梗死诊断中的应用

3.2.1代表同工酶：肌酸激酶同工酶（CK-MB）

3.2.2诊断方法及原理：

采集患者静脉血分离血清,用乳胶增强免疫比浊定量测定法测定cTnI、MB,用免疫抑制-酶动力法检测CK-MB。

3.2.3医学意义：

①心肌梗死在临床上常见、多发,且病死率高,除此之外有一部分患者早期没有典型的临床症状或缺乏心电图的特异性。②常规心肌酶生化参数如天门冬氨酸氨基转移酶、乳酸脱氢酶在反映心肌损伤的特异性方面具有一定的局限性。③联合测定有较高的敏感度和特异性,还可预示患者的预后,有临床推广的价值。[6]

4.同工酶在其他疾病诊断中的应用

4.1同工酶在胰外消化系统疾病诊断中的应用