转录水平检测甲胎蛋白ppt课件
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医学检验·检查项目：甲种胎儿球蛋白试验_课件模板
医学检验·各论：甲种胎儿球蛋白试验 >>>
临床意义：
出肝癌患者亚临床期复发与转移，提示 AFP对肝癌预后的评价具有一定价值。 (4)AFP增高还可见于转移性肝癌、慢性肝 病、妊娠及生殖腺胚胎源性肿瘤及良性家 族性AFP增高等，但其测定值均不如肝癌 患者高。
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简介： 因位于同一条DNA链上。正常肝细胞不产 生AFP，而合成白蛋白。当肝细胞癌变后， AFP又重新表达。
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临床意义：
(1)肝癌患者血清AFP水平明显增高， 它为目前肝癌最好的早期诊断方法，可在 症状出现前6～12个月作出诊断，其专一 性仅次于病理检查的诊断方法。 (2)AFP 为反映肝癌患者病情变化和治疗效果的敏 感指标，AFP是否降至正常已成为判断是 否为根治性手术的指标之一。 (3)AFP有 助于检
正常值： 放射免疫法：<10μg/L。 ELISA：
<25μg/L。 火箭电泳放射自显影法： <20μg/L。
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相关检查： 肝、胆、胰、脾的MRI检查、肝脏疾病超 声诊断。
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相关症状： 下肢肿胀和乏力、胎儿宫内发育迟缓、胚 胎停止发育、进行性消瘦、消瘦、乏力。
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相关疾病： 老年人原发检验·各论 甲种胎儿球蛋白试验
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AFP的诊断及鉴别诊断PPT
肝性脑病处理
降低血氨水平，给予支链氨基酸、 乳果糖等药物治疗。
并发症预防
加强营养支持
提高患者免疫力，预防感染。
定期监测肝功能
及时发现并处理肝功能异常，预防出血等并发症 。
合理使用药物
避免使用肝毒性药物，减少肝性脑病的发生。
05
AFP的预防与控制
预防措施
接种疫苗
接种针对AFP的疫苗是预防AFP 的最有效方法，包括甲型肝炎 疫苗、乙型肝炎疫苗、戊型肝 炎疫苗等。
饮食卫生
保持食物清洁，避免食用未煮 熟或被污染的食物和水，特别 是生肉、海鲜等。
个人卫生
勤洗手，注意口腔、鼻腔、眼 睛等部位的卫生，避免与他人 共用餐具、毛巾等个人物品。
避免接触传染源
避免接触可能患有AFP的人或 动物，特别是血液、分泌物等
。
控制策略
监测与报告
建立有效的监测和报告系统，及 时发现并控制AFP疫情。
04
AFP的并发症
常见并发症
感染
AFP患者容易感染，尤其 是肺部和泌尿道感染。
出血
由于肝功能受损，患者可 能出现凝血功能障碍，导 致出血。
肝性脑病
严重肝病导致氨代谢紊乱 ，引发神经精神症状。
并发症处理
感染处理
根据感染部位和病原体类型，选 择合适的抗生素进行治疗。
出血处理
补充凝血因子，输注新鲜血浆或血 小板，以纠正凝血障碍。
AFP的诊断及鉴别诊断
目录 CONTENTS
• AFP的定义与特性 • AFP的诊断标准 • AFP的鉴别诊断 • AFP的并发症 • AFP的预防与控制
01
AFP的定义与特性
AFP的定义
AFP的定义
AFP的命名
降低血氨水平，给予支链氨基酸、 乳果糖等药物治疗。
并发症预防
加强营养支持
提高患者免疫力，预防感染。
定期监测肝功能
及时发现并处理肝功能异常，预防出血等并发症 。
合理使用药物
避免使用肝毒性药物，减少肝性脑病的发生。
05
AFP的预防与控制
预防措施
接种疫苗
接种针对AFP的疫苗是预防AFP 的最有效方法，包括甲型肝炎 疫苗、乙型肝炎疫苗、戊型肝 炎疫苗等。
饮食卫生
保持食物清洁，避免食用未煮 熟或被污染的食物和水，特别 是生肉、海鲜等。
个人卫生
勤洗手，注意口腔、鼻腔、眼 睛等部位的卫生，避免与他人 共用餐具、毛巾等个人物品。
避免接触传染源
避免接触可能患有AFP的人或 动物，特别是血液、分泌物等
。
控制策略
监测与报告
建立有效的监测和报告系统，及 时发现并控制AFP疫情。
04
AFP的并发症
常见并发症
感染
AFP患者容易感染，尤其 是肺部和泌尿道感染。
出血
由于肝功能受损，患者可 能出现凝血功能障碍，导 致出血。
肝性脑病
严重肝病导致氨代谢紊乱 ，引发神经精神症状。
并发症处理
感染处理
根据感染部位和病原体类型，选 择合适的抗生素进行治疗。
出血处理
补充凝血因子，输注新鲜血浆或血 小板，以纠正凝血障碍。
AFP的诊断及鉴别诊断
目录 CONTENTS
• AFP的定义与特性 • AFP的诊断标准 • AFP的鉴别诊断 • AFP的并发症 • AFP的预防与控制
01
AFP的定义与特性
AFP的定义
AFP的定义
AFP的命名
肝癌标志物——甲胎蛋白PPT课件
12
3
新生幼稚肝细胞
肝癌细胞
（未分化完全） （尚未分化的肝细胞）
分泌AFP量很大
4
血清甲胎蛋白增高的原因
随着病情恶化它在
肝癌
血清中的含量会
急剧增加
（阳性率80-90%）
孕妇; 其他肿瘤的肝转移AF Nhomakorabea阳性急性肝炎 慢性肝炎 肝硬化
生殖细胞肿瘤 阳性率50%
5
一过性升高 随着病情的恢复， 血清甲胎蛋白值
You Know, The More Powerful You Will Be
11
结束语
当你尽了自己的最大努力时，失败也是伟大的， 所以不要放弃，坚持就是正确的。
When You Do Your Best, Failure Is Great, So Don'T Give Up, Stick To The End 演讲人：XXXXXX 时 间：XX年XX月XX日
AFP异质体
❖ AFP中存在氨基酸序列相同而糖链或蛋白质等电 点不同的情况。
❖ AFP分子糖链异质性与组织器官来源有关，不同 生理、病理状况可产生不同的糖链结构，并且有 肿瘤特异性。
❖ 检测：凝集素亲和免疫电泳 凝集素亲和免疫印迹法
10
学习总结
经常不断地学习,你就什么都知道。你知道得越多,你就越有力量 Study Constantly, And You Will Know Everything. The More
甲胎蛋白
——原发性肝癌特异性标志物
1
原发性肝癌
80-90%Hcc患者血清AFP增高
肝细胞癌Hcc—90%
肝外胆管细胞癌Hcc—10%
2
AFP
甲种胎儿球蛋白，甲型胎儿蛋白 糖蛋白
3
新生幼稚肝细胞
肝癌细胞
（未分化完全） （尚未分化的肝细胞）
分泌AFP量很大
4
血清甲胎蛋白增高的原因
随着病情恶化它在
肝癌
血清中的含量会
急剧增加
（阳性率80-90%）
孕妇; 其他肿瘤的肝转移AF Nhomakorabea阳性急性肝炎 慢性肝炎 肝硬化
生殖细胞肿瘤 阳性率50%
5
一过性升高 随着病情的恢复， 血清甲胎蛋白值
You Know, The More Powerful You Will Be
11
结束语
当你尽了自己的最大努力时，失败也是伟大的， 所以不要放弃，坚持就是正确的。
When You Do Your Best, Failure Is Great, So Don'T Give Up, Stick To The End 演讲人：XXXXXX 时 间：XX年XX月XX日
AFP异质体
❖ AFP中存在氨基酸序列相同而糖链或蛋白质等电 点不同的情况。
❖ AFP分子糖链异质性与组织器官来源有关，不同 生理、病理状况可产生不同的糖链结构，并且有 肿瘤特异性。
❖ 检测：凝集素亲和免疫电泳 凝集素亲和免疫印迹法
10
学习总结
经常不断地学习,你就什么都知道。你知道得越多,你就越有力量 Study Constantly, And You Will Know Everything. The More
甲胎蛋白
——原发性肝癌特异性标志物
1
原发性肝癌
80-90%Hcc患者血清AFP增高
肝细胞癌Hcc—90%
肝外胆管细胞癌Hcc—10%
2
AFP
甲种胎儿球蛋白，甲型胎儿蛋白 糖蛋白
医学检验·检查项目：羊水甲胎蛋白测定(AFP)_课件模板
谢谢！
医学检验·各论 羊水甲胎蛋白测定（AFP）
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医学检验·各论：羊水甲胎蛋白测定（AFP） >>>
简介： 市洛克1972年首次报道开放性神经管
畸形胎儿的羊水中甲胎蛋白（AFP）高。
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临床意义：
（1）羊水AFP高于均值，见于患无脑 儿或脊柱裂的胎儿；亦见于其他多种畸形， 如先天性肾病、食道或肠闭锁、脐疵、囊 性水瘤、骶尾部畸胎瘤、Rh血型不和、先 天愚型、先天性性腺发育不全等等。 （2） 严重胎儿窘迫或有宫内死亡可能时，羊水 AFP含量亦较正常高数倍。
相关检查： 血清甘氨酰脯氨酰-二肽氨基肽酶 （GPDA）、血清纤维结合蛋白、5＇-核苷 酸酶。
医学检验·各论：羊水甲胎蛋白测定（AFP） >>>
相关症状： 抽筋、肌验·各论：羊水甲胎蛋白测定（AFP） >>>
相关疾病：
新生儿惊厥、脑性瘫痪综合征、婴儿猝死 综合征、出血性休克和脑病综合征、早产 儿、小儿麻痹症、小儿肾小管性酸中毒、 小儿脑瘫、小儿骶尾部畸胎瘤、婴儿手足 搐搦症、小儿多动症、儿童抽动障碍、新 生儿窒息、小儿惊厥、小儿高热、小儿慢 性肾功能衰竭。
医学检验·各论：羊水甲胎蛋白测定（AFP） >>>
正常值：
正常胎儿羊水中AFP值，在妊娠13周 已达高峰，均值为26.303μg／L （26303ng／ml）；妊娠19周下降最快， 至足月妊娠时，均值为1.266μg／L （1266ng／ml）。
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转录水平检测甲胎蛋白
转录水平检测甲胎蛋白
汇转录水平检测甲胎蛋白的 原理
02
转录水平检测甲胎蛋白的 应用
03
转录水平检测甲胎蛋白的 优缺点
04
转录水平检测甲胎蛋白的 发展前景
05
添加章节标题
转录水平检测甲 胎蛋白的原理
转录水平检测甲胎蛋白的方法
实时荧光定量PCR法
反转录PCR法
基因芯片法
转录水平检测甲胎蛋白的意义
评估肝细胞癌的恶性程度和预后
辅助诊断肝细胞癌和其他肝脏疾病
添加标题
添加标题
监测治疗效果和复发情况
添加标题
添加标题
为临床治疗提供指导如手术切除、 药物治疗等
转录水平检测甲 胎蛋白的应用
转录水平检测甲胎蛋白在肝癌诊断中的应用
转录水平检测甲胎蛋白的原理
转录水平检测甲胎蛋白在肝癌 诊断中的意义
其他癌症：除了肝癌、胎儿神经管缺 陷和卵巢癌甲胎蛋白的转录水平还可 能在其他癌症的诊断中发挥作用例如 胰腺癌、肺癌等。
转录水平检测甲 胎蛋白的优缺点
转录水平检测甲胎蛋白的优点
灵敏度高：能够检测出低浓度的甲胎蛋白有助于早期发现肿瘤。 特异性好：不会受到其他干扰因素的影响准确性较高。 操作简便：检测方法相对简单容易实现自动化检测。 适用于大规模筛查：可用于大量人群的筛查提高肿瘤的早期发现率。
转录水平检测甲胎蛋白在肝癌诊断中的应用将更加广泛 随着基因组学和生物信息学的发展转录水平检测甲胎蛋白将更加精准和可靠 转录水平检测甲胎蛋白将与其他检测方法相结合提高肝癌诊断的准确性和可靠性 随着技术的进步转录水平检测甲胎蛋白的成本将降低使其更加普及和可及
感谢您的观看
汇报人：
无法区分不同转录本的表达：同一基因 可能存在不同的转录本转录水平检测无 法区分不同转录本的表达情况。
汇转录水平检测甲胎蛋白的 原理
02
转录水平检测甲胎蛋白的 应用
03
转录水平检测甲胎蛋白的 优缺点
04
转录水平检测甲胎蛋白的 发展前景
05
添加章节标题
转录水平检测甲 胎蛋白的原理
转录水平检测甲胎蛋白的方法
实时荧光定量PCR法
反转录PCR法
基因芯片法
转录水平检测甲胎蛋白的意义
评估肝细胞癌的恶性程度和预后
辅助诊断肝细胞癌和其他肝脏疾病
添加标题
添加标题
监测治疗效果和复发情况
添加标题
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为临床治疗提供指导如手术切除、 药物治疗等
转录水平检测甲 胎蛋白的应用
转录水平检测甲胎蛋白在肝癌诊断中的应用
转录水平检测甲胎蛋白的原理
转录水平检测甲胎蛋白在肝癌 诊断中的意义
其他癌症：除了肝癌、胎儿神经管缺 陷和卵巢癌甲胎蛋白的转录水平还可 能在其他癌症的诊断中发挥作用例如 胰腺癌、肺癌等。
转录水平检测甲 胎蛋白的优缺点
转录水平检测甲胎蛋白的优点
灵敏度高：能够检测出低浓度的甲胎蛋白有助于早期发现肿瘤。 特异性好：不会受到其他干扰因素的影响准确性较高。 操作简便：检测方法相对简单容易实现自动化检测。 适用于大规模筛查：可用于大量人群的筛查提高肿瘤的早期发现率。
转录水平检测甲胎蛋白在肝癌诊断中的应用将更加广泛 随着基因组学和生物信息学的发展转录水平检测甲胎蛋白将更加精准和可靠 转录水平检测甲胎蛋白将与其他检测方法相结合提高肝癌诊断的准确性和可靠性 随着技术的进步转录水平检测甲胎蛋白的成本将降低使其更加普及和可及
感谢您的观看
汇报人：
无法区分不同转录本的表达：同一基因 可能存在不同的转录本转录水平检测无 法区分不同转录本的表达情况。
AFP临床应用及其检测ppt课件
AFP在临床中的应用小结 1、在产检及儿科疾病中的应用；
2、原发性肝癌敏感的血清学标志物； 3、AFP在肿瘤治疗中的应用
4、作为急性肝功能衰竭患者预后的标志
5、在其他肿瘤中的应用；
1、AFP在产检及儿科疾病中的应用
AFP在胚胎发育期由胎儿卵黄囊和肝脏大量合成, 至妊娠12 wk左右, 卵黄囊退化, 胎儿肝脏成为合成的主要场所.胎儿时, 其血清浓度很高(1-10 g/L), 出生后12-18 W，AFP浓度逐渐降至10 μg/L以下. AFP可用作筛查神经管缺陷、非整倍体的实 验室标志物。在神经管缺损、脊柱裂、无脑儿等病理情况下, AFP可由开放的神 经管进入羊水, 导致其在羊水中含量显著升高。先兆子痫、妇婴输血、宫内发育 迟缓、胎儿死亡, AFP均有所升高。如果新生儿AFP明显升高, 提示新生儿肝炎、 先天性胆道闭锁或有能分泌AFP的胚胎性恶性肿瘤等.
神经管畸形
脊柱裂
先兆子痫
胎儿死亡
新生儿肝炎
先天性胆道闭锁
恶性葡萄胎
AFP水平下降表明存在染色体异常(非整倍体), 如三体, 以及Turner's综合征、脑 积水、胎儿生长受限等。
唐氏综合症
脑积水
2、AFP作为原发性肝癌血清标记物
肝癌（liver cancer）是指发生于肝脏的恶性肿瘤，死亡率较高，由肝脏内的细 胞所引发的癌病，称之为“原发性肝癌”，由身体其他器官的癌症转移到肝脏 而形成的肝脏恶性肿瘤，称为继发性肝癌，也称“转移性肝癌”。
AFP理化性质和生理作用 理化性质
甲胎蛋白( Alpha-Fetal Protein，AFP) 是一种糖蛋白，分子是单一多肽链， 属于白蛋白家族，其主要在胎儿时期的卵黄囊和肝脏细胞中合成，分子量约为6 800 D。AFP 中蛋白质占96%，碳水化合物占4%。
医学检验·检查项目：血清甲胎蛋白(AFP)_课件模板
医学检验·各论 血清甲胎蛋白(AFP)
内容课件模板
医学检验·各论：血清甲胎蛋白(AFP) >>>
别名： 甲胎蛋白,AFP。
医学检验·各论：血清甲胎蛋白(AFP) >>>
简：
甲胎蛋白是一种酸性糖蛋白，存在胎 儿发育的早期肝脏和卵黄囊中，胎儿出生 后不久即逐渐消失。正常人含量极低，当 含量明显升高时，有助于原发性肝癌的诊 断。目前常用于原发性肝癌的普查和早期 诊断，也可用于提示肝癌手术切除的疗效 (即是否彻底或复发)。
谢谢！
医学检验·各论：血清甲胎蛋白(AFP) >>>
临床意义：
癌患者AFP>1000ng/mL。 4.孕妇血清AFP 异常升高，应考虑胎儿脊柱裂、无脑儿、 脑积水、肾变性、胎儿宫内窒息、先兆流 产等。
医学检验·各论：血清甲胎蛋白(AFP) >>>
正常值：
定性：阴性。 定量：放射免疫法 <25ng/mL ；化学发光法 <5Iu/mL。 妊娠 3个月后孕妇血清中的AFP会升高，7-8个 月达最高峰，一般 <400ng/mL，分娩后3 周恢复正常。
医学检验·各论：血清甲胎蛋白(AFP) >>>
相关疾病：
脑积水、睾丸肿瘤、胰腺癌、大肠类癌、 大肠癌、结肠癌、胃癌、新生儿迁延性胆 汁淤积性黄疸、新生儿先天性胆道闭锁、 新生儿失血性贫血、新生儿肝脾肿大、小 儿鞍上生殖细胞瘤、小儿神经皮肤综合征、 肝上皮样血管内皮细胞瘤、病毒性肝炎、 原发性肝癌、流产、卵巢癌、脊柱裂、恶 性黑色素瘤。
医学检验·各论：血清甲胎蛋白(AFP) >>>
临床意义：
升高： 1.主要见于原发性肝癌、恶 性畸胎癌、卵巢胚胎性肿瘤，胃癌肝转移、 病毒性肝炎、肝硬化等。 2.另外，还可 见于胃癌、胰腺癌、结肠癌、胆道细胞癌、 畸胎瘤、卵巢癌、睾丸肿瘤等。 3.急性 肝炎、肝硬化者大多AFP<300ng/mL；60% 的肝细胞癌、睾丸癌、非精原细胞的生殖 细胞
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别名： 甲胎蛋白,AFP。
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简：
甲胎蛋白是一种酸性糖蛋白，存在胎 儿发育的早期肝脏和卵黄囊中，胎儿出生 后不久即逐渐消失。正常人含量极低，当 含量明显升高时，有助于原发性肝癌的诊 断。目前常用于原发性肝癌的普查和早期 诊断，也可用于提示肝癌手术切除的疗效 (即是否彻底或复发)。
谢谢！
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临床意义：
癌患者AFP>1000ng/mL。 4.孕妇血清AFP 异常升高，应考虑胎儿脊柱裂、无脑儿、 脑积水、肾变性、胎儿宫内窒息、先兆流 产等。
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正常值：
定性：阴性。 定量：放射免疫法 <25ng/mL ；化学发光法 <5Iu/mL。 妊娠 3个月后孕妇血清中的AFP会升高，7-8个 月达最高峰，一般 <400ng/mL，分娩后3 周恢复正常。
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相关疾病：
脑积水、睾丸肿瘤、胰腺癌、大肠类癌、 大肠癌、结肠癌、胃癌、新生儿迁延性胆 汁淤积性黄疸、新生儿先天性胆道闭锁、 新生儿失血性贫血、新生儿肝脾肿大、小 儿鞍上生殖细胞瘤、小儿神经皮肤综合征、 肝上皮样血管内皮细胞瘤、病毒性肝炎、 原发性肝癌、流产、卵巢癌、脊柱裂、恶 性黑色素瘤。
医学检验·各论：血清甲胎蛋白(AFP) >>>
临床意义：
升高： 1.主要见于原发性肝癌、恶 性畸胎癌、卵巢胚胎性肿瘤，胃癌肝转移、 病毒性肝炎、肝硬化等。 2.另外，还可 见于胃癌、胰腺癌、结肠癌、胆道细胞癌、 畸胎瘤、卵巢癌、睾丸肿瘤等。 3.急性 肝炎、肝硬化者大多AFP<300ng/mL；60% 的肝细胞癌、睾丸癌、非精原细胞的生殖 细胞
羊水查甲胎球蛋白水平的护理PPT课件
保持良好的生活习惯， 保证充足的睡眠和营养
摄入
羊水查甲胎球蛋白水平的 注意事项
检查前准备
空腹：检查前8小时禁 食
避免剧烈运动：检查 前24小时内避免剧烈
运动
保持情绪稳定：检查 前保持情绪稳定，避
免紧张和焦虑
避免感染：检查前避 免感染，如感冒、发
烧等
避免刺激性食物：检 查前24小时内避免刺
激性食物
04
避免烟酒：避 免烟酒对胎儿 发育造成不良 影响
孕期运动建议
适度运动：根据孕 妇身体状况，选择 合适的运动方式， 如散步、瑜伽等
01
运动时间：每天进 行适量的运动，每 次运动时间控制在 30-60分钟
03
运动环境：选择空 气清新、温度适宜、 安全的运动环境， 避免在炎热、潮湿、 人多的地方进行运 动
指导孕期护理措施
✓ 定期产检：监测胎儿发 育情况，及时发现异常
✓ 避免感染：注意个人卫 生，避免接触感染源， 降低感染风险
✓ 饮食调整：增加蛋白质、 维生素等营养摄入，提 高胎儿免疫力
12 34
✓ 保持良好心态：保持心情 愉悦，避免焦虑和紧张情 绪，有利于胎儿发育
羊水查甲胎球蛋白水平的 方法
羊水穿刺检查
羊水查甲胎球蛋白水平 的护理PPT课件
刀客特万
目录
01 羊水查甲胎球蛋白水平的意义 02 羊水查甲胎球蛋白水平的方法 03 羊水查甲胎球蛋白水平的护理措施 04 羊水查甲胎球蛋白水平的注意事项
羊水查甲胎球蛋白水平的 意义
了解胎儿发育情况
2018
甲胎球蛋白水平 异常可能提示胎
儿发育异常
2020
甲胎球蛋白水 平可辅助诊断
胎儿疾病
2022
转录水平检测甲胎蛋白课件
3）采用对数期分析，摒弃终点数据，定量准确。
4）定量范围宽，可达到10个数量级。
5）计算机同步跟踪，数据化自动处理，在线实时监测，结果直观，避免人为判 断。
6）效率高，可用多种商品画荧光物质，如TET、FAM、HEX、JOE等作为报告 荧光（3’端的猝灭基团常用TAMRA），实现一管双检或多检。
7）操作安全快速 8）利与自动化和联网管理
AFP是啮齿类动物胚胎期和人胚胎期血清中的主要蛋白成 分。人类胚胎在宫内发育的第六周左右用双向扩散法即能 测出AFP，到第13周左右可达到高峰，第16周后AFP的 浓度迅速下降而白蛋白浓度上升。在人类胚胎中AFP最高 浓度可达3—4mg/ml，但新生儿期其血清浓度约为10－ 50ug/ml，出生后第1周末用双向扩散法即不再能测出， 然而用敏感的方法测定，证明AFP可持续存在于正常成人 的血清中。
一般将 PCR反应前 15个循环的荧光信号作为荧光本 底信号（本底信号是指没有进样时检测器的信号值，与检 测器的类型有关，是无论如何也去不掉的值。测试的结果 是在本底值之上增加多少的），荧光域值是PCR3—15个 循环荧光信号标准差的10倍，荧光域值设定在 PCR扩增 的指数期。
C代表循环数、t代表域值。Ct值的含义是：每个反应 管内的荧光信号到达设定的域值时所经历的循环数，而所 涉阈值都很低。Ct值分析实际上就是低浓度的荧光值分析。 由于是低浓度，影响因素小，误差没有被放大，所以具有 良好的重现性。
医学分子生物学
RT-PCR扩增AFP mRNA
用上述提取的的总RNA , 进行逆转录PCR。 反应体系:主要包含上下游引物、各种酶、底物、模板和Mg2+5种 物质。现在以TaKaRa One Step SYBR QRT-PCR试剂盒为例作 为整个反应体系。 反应条件:针对不同的引物，设定最佳的退火温度是QRT-PCR反 应顺利进行的关键。 具体反应程序包括反转录、预变性、变形、退火、延伸等。所有 过程的反应温度和作用时间均应经过筛选确定最佳反应条件。具 体反应条件的参考值见表1，可在参考值范围内加减选择最佳条 件。 根据扩增片段长度, 扩增产物用不同浓度的琼脂糖凝胶进行电泳, 在紫外灯下割取特异性的条带, 用QIAquick Gel Extraction Kit(德国Qiagen公司)试剂盒（用于纯化DNA）进行纯化。
4）定量范围宽，可达到10个数量级。
5）计算机同步跟踪，数据化自动处理，在线实时监测，结果直观，避免人为判 断。
6）效率高，可用多种商品画荧光物质，如TET、FAM、HEX、JOE等作为报告 荧光（3’端的猝灭基团常用TAMRA），实现一管双检或多检。
7）操作安全快速 8）利与自动化和联网管理
AFP是啮齿类动物胚胎期和人胚胎期血清中的主要蛋白成 分。人类胚胎在宫内发育的第六周左右用双向扩散法即能 测出AFP，到第13周左右可达到高峰，第16周后AFP的 浓度迅速下降而白蛋白浓度上升。在人类胚胎中AFP最高 浓度可达3—4mg/ml，但新生儿期其血清浓度约为10－ 50ug/ml，出生后第1周末用双向扩散法即不再能测出， 然而用敏感的方法测定，证明AFP可持续存在于正常成人 的血清中。
一般将 PCR反应前 15个循环的荧光信号作为荧光本 底信号（本底信号是指没有进样时检测器的信号值，与检 测器的类型有关，是无论如何也去不掉的值。测试的结果 是在本底值之上增加多少的），荧光域值是PCR3—15个 循环荧光信号标准差的10倍，荧光域值设定在 PCR扩增 的指数期。
C代表循环数、t代表域值。Ct值的含义是：每个反应 管内的荧光信号到达设定的域值时所经历的循环数，而所 涉阈值都很低。Ct值分析实际上就是低浓度的荧光值分析。 由于是低浓度，影响因素小，误差没有被放大，所以具有 良好的重现性。
医学分子生物学
RT-PCR扩增AFP mRNA
用上述提取的的总RNA , 进行逆转录PCR。 反应体系:主要包含上下游引物、各种酶、底物、模板和Mg2+5种 物质。现在以TaKaRa One Step SYBR QRT-PCR试剂盒为例作 为整个反应体系。 反应条件:针对不同的引物，设定最佳的退火温度是QRT-PCR反 应顺利进行的关键。 具体反应程序包括反转录、预变性、变形、退火、延伸等。所有 过程的反应温度和作用时间均应经过筛选确定最佳反应条件。具 体反应条件的参考值见表1，可在参考值范围内加减选择最佳条 件。 根据扩增片段长度, 扩增产物用不同浓度的琼脂糖凝胶进行电泳, 在紫外灯下割取特异性的条带, 用QIAquick Gel Extraction Kit(德国Qiagen公司)试剂盒（用于纯化DNA）进行纯化。
肿瘤标志物检测详细PPT课件
（二）前列腺特异抗原（PSA）检测
1、来源：前列腺分泌 2、 60%～90%的前列腺癌患者PSA增高
（1）前列腺癌首选肿瘤标志物 （2）对前列腺肿瘤诊断有特异性
3、引起PSA增高的其他因素
肛门指检、膀胱镜检查、前列腺按摩或手术
第5页/共14页
一、蛋白类肿瘤标志物ห้องสมุดไป่ตู้测
（二）前列腺特异抗原（PSA）检测
第9页/共14页
三、糖脂（类）肿瘤标志物检测
（三）检测
癌抗原（CA）
癌胚抗原（CEA）检测 1、 来源于胎儿早期的胃肠道及某些组织 2、是广谱性肿瘤标志物（特异性低） 3、 CEA增高提示的肿瘤：
胰腺癌、直肠癌、乳腺癌
1、CA50----肿瘤相关抗原：广泛性、 缺乏特异性
2、CA72-4-----胃肠道和卵巢肿瘤（缺乏特异性）
2存在血液细胞组织体液中一蛋白类肿瘤标志物检测甲胎球蛋白afp原发性肝癌首选肿瘤标志物前列腺特异抗原psa前列腺癌首选肿瘤标志物癌胚抗原cea广谱性肿瘤标志物特异性低胰腺癌直肠癌乳腺癌一甲胎球蛋白afp测定3678744的原发性肝癌患者afp增高50为300gl18不高是目前诊断原发性肝癌最具特异性和主要指标
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思考题：
1、肿瘤标志物的概念及种类？ 2、AFP诊断原发性肝癌的标准？
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谢 谢！
第13页/共14页
感谢您的观看！
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【小结】
肿瘤标志物是肿瘤细胞自身合成、释放；或机体对 肿瘤细胞反应而产生或升高的物质。有蛋白质类、糖类 和酶类三大类。大多缺乏（器官、肿瘤）特异性，主要 用于特定高危人群筛查， 监测肿瘤治疗疗效和复发、判 断预后。
1、来源：前列腺分泌 2、 60%～90%的前列腺癌患者PSA增高
（1）前列腺癌首选肿瘤标志物 （2）对前列腺肿瘤诊断有特异性
3、引起PSA增高的其他因素
肛门指检、膀胱镜检查、前列腺按摩或手术
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一、蛋白类肿瘤标志物ห้องสมุดไป่ตู้测
（二）前列腺特异抗原（PSA）检测
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三、糖脂（类）肿瘤标志物检测
（三）检测
癌抗原（CA）
癌胚抗原（CEA）检测 1、 来源于胎儿早期的胃肠道及某些组织 2、是广谱性肿瘤标志物（特异性低） 3、 CEA增高提示的肿瘤：
胰腺癌、直肠癌、乳腺癌
1、CA50----肿瘤相关抗原：广泛性、 缺乏特异性
2、CA72-4-----胃肠道和卵巢肿瘤（缺乏特异性）
2存在血液细胞组织体液中一蛋白类肿瘤标志物检测甲胎球蛋白afp原发性肝癌首选肿瘤标志物前列腺特异抗原psa前列腺癌首选肿瘤标志物癌胚抗原cea广谱性肿瘤标志物特异性低胰腺癌直肠癌乳腺癌一甲胎球蛋白afp测定3678744的原发性肝癌患者afp增高50为300gl18不高是目前诊断原发性肝癌最具特异性和主要指标
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思考题：
1、肿瘤标志物的概念及种类？ 2、AFP诊断原发性肝癌的标准？
第12页/共14页
谢 谢！
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【小结】
肿瘤标志物是肿瘤细胞自身合成、释放；或机体对 肿瘤细胞反应而产生或升高的物质。有蛋白质类、糖类 和酶类三大类。大多缺乏（器官、肿瘤）特异性，主要 用于特定高危人群筛查， 监测肿瘤治疗疗效和复发、判 断预后。
2024年甲胎蛋白异常诊断与治疗PPT
药物选择：根据病情和患者情况选择合适的药物 药物剂量：根据病情和患者情况确定药物剂量 药物疗程：根据病情和患者情况确定药物疗程 药物副作用：注意药物的副作用，及时调整药物剂量或更换药物
手术适应症： 甲胎蛋白异常 升高，且影像 学检查发现肿
瘤
手术方式：腹 腔镜手术、开
腹手术等
手术风险：出 血、感染、术
甲胎蛋白（AFP） 检测：通过血液 检测AFP水平， 正常值为020ng/ml
超声检查：通过 超声检查肝脏、 胆囊等器官，观 察有无异常肿块 或病变
肝功能检查：通 过血液检测肝功 能指标，如转氨 酶、胆红素等， 判断肝脏功能是 否正常
病理检查：通肿瘤或病变。
患者基本信 息：年龄、 性别、病史 等
甲胎蛋白异 常情况：检 测结果、异 常原因等
治疗方案： 药物治疗、 手术治疗等
治疗效果： 治疗后甲胎 蛋白恢复正 常、患者恢 复健康等
案例启示： 早期发现、 早期治疗、 定期复查等
诊断方法：血液检查、影像学检查、病理学检查等 治疗方法：手术治疗、药物治疗、放疗、化疗等 预后：根据病情和治疗方法不同，预后效果也不同
正常范围： 甲胎蛋白水 平在正常范 围内
轻度升高： 甲胎蛋白水 平轻度升高， 但未超过正 常范围
中度升高： 甲胎蛋白水 平中度升高， 超过正常范 围
重度升高： 甲胎蛋白水 平重度升高， 超过正常范 围较多
异常降低： 甲胎蛋白水 平异常降低， 低于正常范 围
血液检查：检测甲胎蛋白水平，判断是否异常 影像学检查：如B超、CT等，观察肝脏、胆囊等器官是否有异常 病理学检查：如肝穿刺活检，观察肝脏组织是否有病变 基因检测：检测基因突变，判断是否与甲胎蛋白异常有关
汇报人：
甲胎蛋白的应用ppt课件
肝癌病人血清 AFP 含量或阳性率与各地区原发性肝癌的 类型 、 临床特点 、 病期 、所用检测方法的灵敏度和 检测条件等不同而有差异 。
2
原发性与转移性肝癌的鉴别诊断
原发性肝癌AFP 升高,转移癌 AFP 下降, 癌胚抗 原( CEA) 阳性率为 90%。
3
预后
Tand等报道，原发性肝癌血清AFP水平与预后有关。 <5000者术后5年生存率明显高于>5000者。在存活 5年以上的16例病例中，15例<1000，而术前>1000 者，87.5%，1年内死于肝癌复发。据报道，高浓 度、中浓度和低浓度持续升高者，1年后存活率分 别为51.3%，75%和100%，肝癌切除后AFP能否正常 或上升是判断预后的关键因素。
9
卵巢和睾丸的内胚窦囊瘤
内胚窦囊瘤又称卵黄囊瘤, 即过去所谓的胚胎瘤 。 用免疫荧光染色法等证明内胚窦瘤可以合成 AFP , 所以血清 AFP 检测也是诊断内胚胎瘤的特异性指 标 。首都医院报道10例卵巢内胚胎瘤, 术前血清 AFP( 0. 14 ～ 20)×10 5 ng/ml, 手术切除后 AFP 下降, 复发时 AFP 又升高。
6
活动性肝病
急慢性肝炎和肝硬化 AFP 升高较为常见 , 血清 AFP 升 高机率较高的是肝大量坏死、 急性病毒性肝炎、肝硬化 和慢性活动性肝炎 , 而急性酒精或药物中毒性肝炎只有 个别病例 AFP 轻微升高 ,胆汁性肝硬化和血色素沉着病 则未见 AFP升高。活动性肝病 AFP 升高幅度通常较大 , 多在800 ng/ml 以下 , 少数在1 000 ng/ml左右 , 个别 达3 000 ng/ml 。肝癌与活动性肝病的鉴别主要依靠AFP 动态观察, 活动性肝病是肝细胞出现再生而AFP 升高为一 过性 , 且常常与血清 ALT 的活性变化相平行 。随血清 ALT 活性升高出现 AFP 的一过性升高 ,随病情好转而下 降。
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原发性与转移性肝癌的鉴别诊断
原发性肝癌AFP 升高,转移癌 AFP 下降, 癌胚抗 原( CEA) 阳性率为 90%。
3
预后
Tand等报道，原发性肝癌血清AFP水平与预后有关。 <5000者术后5年生存率明显高于>5000者。在存活 5年以上的16例病例中，15例<1000，而术前>1000 者，87.5%，1年内死于肝癌复发。据报道，高浓 度、中浓度和低浓度持续升高者，1年后存活率分 别为51.3%，75%和100%，肝癌切除后AFP能否正常 或上升是判断预后的关键因素。
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卵巢和睾丸的内胚窦囊瘤
内胚窦囊瘤又称卵黄囊瘤, 即过去所谓的胚胎瘤 。 用免疫荧光染色法等证明内胚窦瘤可以合成 AFP , 所以血清 AFP 检测也是诊断内胚胎瘤的特异性指 标 。首都医院报道10例卵巢内胚胎瘤, 术前血清 AFP( 0. 14 ～ 20)×10 5 ng/ml, 手术切除后 AFP 下降, 复发时 AFP 又升高。
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活动性肝病
急慢性肝炎和肝硬化 AFP 升高较为常见 , 血清 AFP 升 高机率较高的是肝大量坏死、 急性病毒性肝炎、肝硬化 和慢性活动性肝炎 , 而急性酒精或药物中毒性肝炎只有 个别病例 AFP 轻微升高 ,胆汁性肝硬化和血色素沉着病 则未见 AFP升高。活动性肝病 AFP 升高幅度通常较大 , 多在800 ng/ml 以下 , 少数在1 000 ng/ml左右 , 个别 达3 000 ng/ml 。肝癌与活动性肝病的鉴别主要依靠AFP 动态观察, 活动性肝病是肝细胞出现再生而AFP 升高为一 过性 , 且常常与血清 ALT 的活性变化相平行 。随血清 ALT 活性升高出现 AFP 的一过性升高 ,随病情好转而下 降。
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血清AFP升高，还可出现于畸胎瘤、睾丸和卵巢肿瘤等。
急性肝炎和肝硬化的鉴别诊断
肝细胞再生时期，AFP在血液中呈阳性，急、慢性肝炎、肝硬化时会有肝细胞再生，因而
AFP在血液中的浓度升高。一般急性肝病，可随ห้องสมุดไป่ตู้情好转AFP含量下降或正常，肝硬化可呈
下降或持续低水平，肝癌则逐渐上升。
·
11
先天性疾病的诊断
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5
1、提取mRNA 3、PCR扩增 5、结果显示
2、反转录ｃDNA链 4、凝胶电泳
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6
1、若有AFP基因表达，则在与其反转录cDNA链分子量平行处应有检 测信号。 2、若AFP基因未表达，则在与其反转录cDNA链分子量平行处没有检 测信号。
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7
Northern印迹杂交是指将RNA变性及电泳分离后，将其转 移到固相支持物上，然后利用杂交反应来鉴定其中特定mRNA 分子的含量及其大小的过程。RNA印迹技术正好与DNA相对应， 故被称为Northern印迹杂交，与此原理相似的蛋白质印迹技 术则被称为Western blot。
母体血中AFP升高还可见于异常妊娠，如：胎儿有脊柱裂、无脑儿、脑积水、十二 脂肠和食道闭锁、肾变性、胎儿宫内窒息、先兆流产和双胎等。
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12
谢谢！
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13
LOREM IPSUM DOLOR
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1
甲胎蛋白基因(alpha-fetoprotein，AFP) (GenBank 登 录号: NM_001134.1)的异常表达与肝癌、前列腺癌等恶性 肿瘤有关，请根据基因表达的检测方法，设计实验方案从转 录水平检测AFP的表达情况。实验方案包括：实验目的、实 验方法及原理、技术路线、可能的结果分析及应用等。
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8
1、若出现明显杂交带，则表明细胞组织内有AFP基因的表达， 则会有患肝癌的风险。 2、若没有出现明显杂交带，则表明细胞组织内基因未表达。
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9
Northern印迹杂交技术检测mRNA表达水平的敏感性较 PCR技术低，但其特异性强，假阳性率低，因此被认为是 最可靠的mRNA和miRNA定量分析方法之一。RT-PCR使 RNA检测的灵敏性提高了几个数量级，使一些极为微量 RNA样品分析成为可能。
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2
甲胎蛋白是人胚胎期血清中的主要蛋白成分。甲胎蛋白是一种糖蛋 白，正常情况下，这种蛋白主要来自胚胎的肝细胞，在胎儿13周AFP 含量占血浆蛋白总量的1/3，胎儿出生后约两周甲胎蛋白从血液中消失。 在妊娠30周达最高峰，以后逐渐下降，出生时血浆中浓度为高峰期的 1%左右，约40mg/L，在周岁时接近成人水平。正常人血清中甲胎蛋 白的含量尚不到20微克/升，如在成人血清中含量过高，则提示有肝癌 的可能。
先天性疾病的诊断：检测羊水中AFP含量的意义已引起注意，Rendle用放射免疫法 检测，发现无脑儿羊水中含量显着升高。正常妊娠12～16周羊水AFP含量为 21.1±1.2mg/L，以后逐月下降，足月时为0.5±0.2mg/L。无脑儿患者在妊娠26～ 31周为95.7±19.3mg/L，32-38周为25.7±5.9mg/L。先天性肾病及脊柱裂也有类 似报道。因此用放免法检测羊水中AFP含量，有助于某些先天性疾病的出生前诊断。
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3
1、掌握RT－PCR技术、northern印记杂交的原理和方法 2、了解实验的操作方法和步骤
3、判断基因在转录水平的表达情况
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4
使用细胞RNA提取技术，然后通过逆转录合成cDNA，PCR扩增，利用琼 脂糖凝胶电泳技术，测定AFPmRNA的表达。
逆转录PCR，是将RNA的反转录（RT）和cDNA的聚合酶链式扩增 （PCR）相结合的技术。首先提取组织或细胞中的总RNA，以其中的 mRNA作为模板经反转录酶或随机引物的作用从RNA合成 cDNA，再以 cDNA为模板，扩增合成目的片段检测基因表达。
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10
诊断原发性肝癌。
检测AFP的含量是诊断原发性肝癌的重要手段之一，由于肝癌的癌细胞能合成或分泌较多的 AFP释放入血的缘故。正因为如此，医生们就把检测人体血液中的AFP作为诊断肝癌的重要 依据，并把AFP称为“肝癌标志物”。检测AFP是诊断肝癌的一种简便、灵敏、快捷的方法， 现认为它在发现早期肝癌方面有独一无二的价值，用AFP诊断肝癌的“专一性”仅次于病理 学检查。