第二章 基因工程主要技术原理-基因定点诱变 ppt课件
合集下载
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
ppt课件
2
精品资料
基因工程
第二章 基因工程技术原理
• 你怎么称呼老师？ • 如果老师最后没有总结一节课的重点的难点，你
是否会认为老师的教学方法需要改进？ • 你所经历的课堂，是讲座式还是讨论式？ • 教师的教鞭 • “不怕太阳晒，也不怕那风雨狂，只怕先生骂我
笨，没有学问无颜见爹娘 ……” • “太阳当空照，花儿对我笑，小鸟说早早早……”
(1) 重组PCR定点诱 变:克服寡核苷酸引 物诱变能力仅限于5’ 端.
特点:经3轮PCR反 应,一对互补的带有 突变碱基的内侧引 物和2个外侧引物
ppt课件
8
(2) 大引物诱变:核心 是第一轮PCR产物为 第二轮PCR引物
ppt课件
9
返回目录
返回第二章
ppt课件
10
返回目录
第四节 基因定点诱变
2.4.1 盒式诱变
利用一段人工合成 的具有突变序列的 寡核苷酸片段取代 野生型基因中的相 应序列.
返回第二章
ppt课件
1
2.4.2 寡核苷酸引物诱变
使用化学合成的含有突变碱基 的寡核苷酸片段作引物,启动 单链DNA分子进行复制，随 后这段寡核苷酸引物便成为了 新合成DNA子链的一个组成 部分。
寡核苷酸引物诱变过程
正链DNA合成 突变引物合成 异源双链DNA分子制备 闭环异源双链DNA分子富集 转化 突变体筛选
寡核苷酸引物诱变法的局限性
异源双链DNA分子并非真正异源
突变体子代中突变碱基被错配修
复体系修复
ppt课件
5
提高寡核苷酸引物诱变突变效率的方法
(1) Kunkel 定点诱变法: 1985年由 T.A.Kunkel发明
ung:尿嘧啶脱糖苷酶
pptHale Waihona Puke Baidu件
6
(2) 硫代磷酸诱变法: 已知有些限制 酶不能切割硫代磷酸DNA分 子．在异源双链DNA分子制备 时，加入硫代核苷酸，使之掺 入突变链中．然后用前述酶切 割，并用外切酶局部消化后， 进行聚合反应，从而产生具有 定点突变的异源双链DNA
ppt课件
7
2.4.３ ＰＣＲ诱变