医学ppt--抗肿瘤药效评价

动物移植性肿瘤实验法
大多数肿瘤化疗药物都是经过动物移植 性肿瘤试验而被发现的，因此动物移植性肿 瘤实验法是筛选新药中最通用的方法。
其优点是 • 肿瘤生长均匀，个体差异小。 • 接种成功率高，可达100％。 • 对宿主的影响也类似，易于客观判断
疗效。 • 动物移植性肿瘤可在同种或同品系动
物中连续移植，长期保留，以供实验 用。实验周期较短。
2. 生物反应调节剂的药效学评价
生物反应调节剂(biological response modifiers，BRM)是一类能单独或与化疗 药物同时应用，有助于提高化疗效果，减 低化疗药毒副反应的药物。这类药物主要 出自植物和微生物，其作用机理大多是调 节机体的免疫功能。
生物反应调节剂动物实验的特点： • 生物反应调节剂以口服剂型为主。 • 用药时间长。凡经口服给药者，服药期一般
集落形成法的基本原理： 克隆原细胞具有持续增殖能力，当
单个细胞分裂6代或6代以上时，其后代 所组成的群体(集落)便含50个以上细胞。 通过集落计数可对克隆原细胞作定量分 析。它反映了单个细胞的增殖潜力，故 能较灵敏地测定抗癌药的活性，日前被 认为是一种较理想的检测方法。常用的 集落形成法可分为贴壁法及半固体培养 法两种。
×100％ 以同一样品的不同浓度对肿瘤细胞生长抑制
率作图可得到剂量反应曲线，从中求出样品的 半数杀伤浓度IC50。合成化合物或植物提取纯 品的IC50＜10 μg／m1或植物粗提物的IC50＜20 μg／m1时，则判断样品在体外对肿瘤细胞有杀 伤作用。
染料排斥试验的基本原理： 活细胞有排斥某些染料如伊红、台盼蓝、
缺点： • 假阳性问题：由于动物瘤株恶性度高，生
长迅速，对药物的敏感性比人类自发的肿 瘤高得多，且动物肿瘤的生物学特点与人 癌有较大的差距，因此对动物肿瘤生长有 抑制作用的药物对人癌不一定有效。 • 假阴性问题：一种药物未必对各种类型的 动物移植性肿瘤都有效，选择某一瘤株供 筛选都可能漏筛药物。
对于假阳性问题，现在 有用人的实体瘤细胞接种在 裸鼠上，进行实验来加以克 服。
SRB法的基本原理： SRB(sulforhodamine B)是一种蛋白质结合 染料，粉红色，可溶于水。 SRB可与生物 大分子中的碱性氨基酸结合。其在515nm 波长的OD读数与细胞数呈良好的线性关 系。故可用作细胞数的定量。MTT法的一 个缺点是OD值可随放置时间而变，而 SRB法无此现象。因此更适用于进行大规 模的试验。
为15~30d。 • 对实验动物的要求也较高，多推荐使用近交
系小鼠。 • 本类药物毒性大多较低，LD50常不能求出，
选用MTD并参考临床用量为给药剂量的依据。
几种常用的动物移植性肿瘤
• 小鼠白血病L1210 • 大鼠Walker-256瘤 • Lewis肺癌
白血病L1210是在1948年用甲基胆蒽 DBA/2小鼠诱发所得，它是一种能在 DBA/2小鼠及其杂交一代BDF1和CDF1 小鼠上生长的淋巴性白血病，是动物实 验治疗中最为常用的一种肿瘤模型，在 小鼠白血病1210的实验治疗中，将1× 105个腹水细胞接种在BDFl或CDFl小鼠 腹腔内。在接种后24h开始给药治疗，实 验结束后比较对照组与实验组的小鼠平 均存活时间，即可判断药物的疗效。
苯胺黑等Fra Baidu bibliotek能力，而死细胞由于膜完整性的 破坏，可被着色。因此培养的肿瘤细胞中加 入这些染料，一定时间后，对着色和未着色 的细胞进行计数，即可算出被杀死的细胞比 例。
生长曲线法的基本原理： 在最适条件下，肿瘤细胞在培养液中呈
指数生长，如取细胞数的对数与培养时间作 图可得一条直线，故称此时为对数生长期。 随着细胞密度不断增高，由于代谢产物的积 聚及营养物的消耗，细胞生长逐渐减慢以致 停止，此时称高坪期或稳定期。因此药物对 细胞生长的影响可通过生长曲线反映出来。
抗肿瘤药的药效学研究
MTT法的基本原理： 四氮唑[MTT,3-(4,5-
dimethylibiazol-2-yl)-2,5-diphenyl-tetrazolium bromide]是一种能接受氢原子的染料。活细胞 线粒体中与NADP相关的脱氢酶在细胞内可将 黄色的MTT转化成不溶性的蓝紫色的甲[月替] (formazan)，而死的细胞则无此功能。用二甲 基亚讽(DMSO)溶解甲[月替]后，在一定波长下 用酶标仪测定光密度值，即可定量测出细胞的 存活率。
Walker—256瘤是1928年在一个怀孕大白 鼠的乳腺部位自发产生。接种在皮下或肌肉 内成为实体瘤，接种在腹腔则成为腹水瘤。 在接种后第3d开始给药治疗，实验结束后比 较对照组与实验组的瘤重或大鼠平均存活时 间，即可判断药物的疗效。
Lewis肺癌是1951年在一个C57BL／6小鼠上 发现的自发性肺内的未分化的上皮样癌。该瘤在 传代中生长迅速，很快见有出血，并在同系小鼠 移植时有很高的成活率(约98％)。且恶性程度较 高，皮下、肌肉接种对药物的敏感性较低，但可 向肺转移，特别是静脉接种时。可在肺形成瘤集 落，此模型也可用于抗转移的实验研究在接种后 第l天开始结药治疗。实验结束后比较对照组与实 验组的瘤重，即可判断药物的疗效。
操作步骤: 1．选用对数生长期的贴壁肿瘤细胞，用胰
酶消化后，用含10％小牛血清的RPMI l640 培养基配成5000个／ml的细胞悬液，接种在 96孔培养板中，每孔接种200μl，37℃，5％ CO2 培养24h
2. 实验组换新的含不同浓度被测样品的培 养基，对照组则换含等体积溶剂的培养基， 每组设3~5平行孔，37℃，5％CO2 培养4~5 d
3．弃去上清液，每孔加入200 μl新鲜配制 的含0.2mg／ml MTT的无血清培养 基．37℃继续培养4h。小心弃上清，并加 入200 μl DMSO，用微型超声振荡器混匀 后，在酶标仪上以试验波长为570nm，参 比波长为450nm测定光密度值。
结果评定: 按下式计算药物对肿瘤细胞生长的抑制率： 肿瘤细胞生长抑制率％＝(1-OD实验/OD对照)