反复自然流产患者甘露聚糖结合凝集素和生殖相关抗体的检测及意义

文章编号:1007-4287(2008)10-1247-03
反复自然流产患者甘露聚糖结合凝集素
和生殖相关抗体的检测及意义
张金蓉1,王艾丽1*,党洁明2
(南京军区南京总医院1 临床中心实验科;2 妇产科,江苏南京210002)
摘要:目的 了解不明原因反复自然流产(RSA)和正常妊娠妇女血清中甘露聚糖结合凝集素(MBL)浓度及与5种生殖相关抗体的关系。

方法 用ELIS A法测定RSA患者及正常早、中、晚妊娠期妇女血清中M B L的含量,同时检测RSA患者血清中抗弓形虫抗体(ATAb)、抗人巨细胞病毒抗体(HC MV IgM)、抗精子抗体(ASAb)、抗子宫内膜抗体(EMAb)和抗心磷脂抗体(ACL)。

结果 RSA组(n=51)、对照组(n=55)、正常早孕(n=32)、中孕(n=34)和晚孕(n=
28)妇女组的血清MB L浓度分别为1.40 0.63mg/L,2.03 0.89mg/L,2.47 0.85mg/L,2.73 1.07mg/L和3 22
1 08mg/L。

RS A组血清MBL浓度显著低于对照组(t=4.15,P<0.01)。

正常妊娠妇女血清MBL浓度随妊娠时间逐渐
增高,浓度显著高于对照组(P<0.05-0.01)。

RSA组血清中4种生殖相关抗体(ATAb、AS A、EMAb和ACL)阳性率显著高于对照组(P<0.01-0.05)。

RSA组MBL浓度<1.0mg/L者27.5%(14/51),抗体总阳性率为85.7%(12/14)显著高于MB L浓度 1.0mg/L患者的抗体阳性率32.4%(12/37)(P<0.01)。

结论 部分RSA患者血清MB L浓度降低与免疫调理功能缺陷和感染率增加有关,这可促使发生RSA。

关键词:甘露聚糖结合凝集素;血清浓度;反复自然流产;抗体;正常妊娠
中图分类号:R714 21文献标识码:A
The detection and significance of m annan binding lectin and antibodies associated with generate in patients with recurrent spontaneous abortion Z HANG Jing r ong,WANG Ai li,Dang Jie ming.(Department o f Medica l Laboratory Science,N an jin g Gen eral H ospital o f P LA,Nanjing210002,China)
Abstract:Objective To investigate the si gni ficance of mannan binding lectin(M B L)concentration and five antibodies of corre lated generation in patients with recurrent spontaneous abortion(RSA)and normal pregnancy woman.Methods The MB L concentra tion and fi ve antibodies including antitoxo plasma(ATAb)antihuman cytomegalo viru(HC MV IgM),antisperm(ASAb),antiendometri um(EMAb)and anticardiolipin(ACL)were detected by sandwich enzyme linked i mmunosorben t assay(ELISA)in RSA patients and woman with different duration of pregnancy.Results The serum concentration of MB L in RSA group(n=51),control group(n=
55),early pregnancy group(n=32),middle pregnancy group(n=34)and late pregnancy group(n=28)were1.40 0.63mg/L,
2 03 0.89mg/L,2.47 0.85mg/L,2.73 1.07mg/L and3.22 1.08mg/L,respectively.M B L concentration in RSA group
were significantly lower than those in con trol subjects(t=4.15,P<0.01).MBL concentration in normal pregnancy woman were found to increase gradually wi th gestation and were si gni ficantly higher than those in control subjects(P<0.01).The posi tive rates of four antibodies(ATAb,ASAb,E MAb and AC L)of correlated generation i n RSA group were si gni ficantly hi gher than those in con trol group(P<0.01-0.05).The five anti bodies percentages i n RSA group were significantly di fferent bewteen MBL concentration of RSA patients(85.7%,12/14)wi th MBL concentration lower than<1.0mg/L and those(32.4%,12/37)with MB L concen tration higher than 1.0mg/L(P<0.01).Conclusion The lower MBL concentration in serum of some RSA patients are related to im munologic regulation deficiency and i ncrease of infection rates.This may be facilitate the development of RSA.
Key words:mannan bi nding lectin;serum concentration;recurrent spontaneous abortion;antibodies;normal pregnancy
(Chin J Lab Diagn,2008,12:1247)
我们检测了反复自然流产(recurrent spontaneous abortion,RSA)、正常妊娠等妇女的血清甘露聚糖结合凝集素(MBL)浓度及相关指标,以探讨临床意义。

1 对象和方法1.1 研究对象 RSA组51例,年龄20-41岁,连续流产3次,均为妊娠早期流产者,排除遗传、内分泌异常,生殖器官器质性病变及全身性疾病;对照组55例,无流产史且已正常分娩的健康女性,年龄26 -43岁;正常妊娠组94例,为早孕(!12周,n=
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中国实验诊断学 2008年10月 第12卷 第10期
的妊娠妇女,年龄23-39岁。

采集清晨空腹静脉血,分离血清后-70#冻存待测。

1.2 血清MBL的测定 采用酶联免疫吸附(ELISA)法[1]。

甘露聚糖(5 g/ml)包被聚苯乙烯反应板,5.0g/L牛血清白蛋白(BSA)PBS封闭,依序加待测血清(1∃100)和不同MB L标准参考品;加辣根过氧化物酶(HRP) 单克隆抗MB L(1∃1500);OPD底物液显色5-10分钟;2mol/L硫酸终止反应。

酶联仪492nm读吸光度(A)值。

以制备的标准曲线计算样本中的MB L浓度。

1.3 血清中抗弓形虫抗体(ATAb)、抗人巨细胞病毒抗体(HC MV Ig M)、抗精子抗体(ASAB)、抗子宫内膜抗体(E MAb)和抗心磷脂抗体(ACL)的检测。

均采用ELISA法[2]。

1.4 统计学处理 用SPSS统计软件,数据以x∀ s 表示,组间比较用t检验和 2检验,P<0.05为有显著性差异。

2 结果2.1 血清MB L测定结果见表1。

表1 各组血清MBL测定结果(x∀ s)
组别例数MBL浓度mg/L P*
RSA组51 1.40 0.63<0.01
正常早孕32 2.47 0.85<0.05
正常中孕34 2.73 1.07<0.01
正常晚孕28 3.22 1.08<0.01
对照组55 2.03 0.89
*为与对照组比较的P值
2.2 ATAb、HCMV IgM、ASAb、EMAb和ACL检测结果 见表2。

RSA患者组血清中5种生殖相关抗体(简述5种抗体),除HC MV IgM(检出率较高,但无统计学意义)外,阳性率显著高于对照组( 2=9.0, 9.0,5.59,4.89,P<0.01或P<0.05)。

其中4种抗体阳性的1例,3种抗体阳性的5例,2种抗体阳性的9例,1种抗体阳性的9例。

RSA患者5种抗体总阳性率为47.1%(24/51)。

表2 RSA组与对照组五种抗体检测结果比较
组别例数
ATAb HCMV IgM ASAb EMAb ACL
阳性例数(%)阳性例数(%)阳性例数(%)阳性例数(%)阳性例数(%)
RS A组5110(19.6)*8(15.7)10(19.6)*9(17.6)*8(15.7)%对照组551(1.8)2(3.6)1(1.8)2(3.6)1(1.8) 与对照组比较*P<0.01;%P<0.05
2.3 RSA血清MB L浓度与5种抗体的关系 RSA 患者组MBL浓度< 1.0mg/L者27.5%(14/51)显著多于对照组5.5%(3/55),其中12人抗体阳性(9人2种抗体阳性)ATAb、HC MV IgM、ASAb、E MAb或AC L阳性率分别为50.0%(7/14),42.9%(6/14), 28.6(4/14),35.7%(5/14)和21.4%(3/14)。

这些患者抗体总阳性率为85.7%(12/14)显著高于MB L 浓度 1.0mg/L患者的抗体阳性率32.4%(12/37) ( 2=11.57,P<0.01)。

3 讨论
MBL是非酶非抗体类的急性相蛋白,广泛存在于血液及多种体液中,在儿童及成人免疫反应早期,尤其是特异性抗体产生前的抗感染及清除异物的免疫反应中起重要作用。

有作者发现羊水中MB L水平随孕期增加,推测MB L可能对保护胎儿起作用。

本文检测结果表明,RSA患者血清中MB L浓度显著低于对照组(P<0.05),正常妊娠妇女的血清MB L 浓度随妊娠时间呈增高趋势,不同孕期妇女血清道相符[3,4]。

Malhotra等认为羊水中存在MBL与妊娠期母亲或胎儿肝脏产生的MB L分泌至血清进入羊膜腔有关。

实验亦证实羊膜上皮细胞表达的凝集素受体可与MBL结合,MBL增高有利于母 胎局部组织的抗感染、抗炎症和清除异物作用[5]。

RSA的发生机制涉及多种因素,其中部分病人反复流产的主要原因与易反复感染和免疫功能紊乱有关。

本实验检测RSA患者血清MB L浓度的同时检测了五种生殖相关抗体。

这些抗体对应的抗原分别为:弓形虫、人巨细胞病毒、精子、子宫内膜和心磷脂。

弓形虫是一种引起人畜共患病的寄生虫; HC MV存在于潜在感染的人群中,这两种病原体在感染母体免疫功能降低的情况下可通过胎盘感染胎儿,引起流产、早产或死胎。

ASAb、E MAb和ACL是对异体或自体抗原产生的病理性抗体,在体内与相应靶抗原结合后产生的局部组织或细胞变化,可导致RSA。

本组RSA患者五种抗体中4种抗体(ATAb、ASAb、E MAb和ACL)的阳性率及总阳性率都
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为62.5%;MB L 浓度<1.0mg/L RSA 患者的抗体阳性率显著高于MB L 浓度 1.0mg/L 患者的抗体阳性率,且多数呈2种或2种以上抗体阳性,2种病原体抗体阳性率达40%-50%。

这些结果表明,部分RSA 患者血清MB L 浓度缺乏提示存在免疫调理功能缺陷,这可能导致患者易感染或清除炎性物质能力紊乱,发生RSA 的危险性增加。

MBL 血清浓度改变也与患者自身的免疫遗传因素密切相关,MB L 基因变异引起的血清浓度降低和功能异常与自身免疫反应密切有关[6]。

妊娠时MB L 增高反映了机体具有正常急性相保护的能力。

作者简介:张金蓉(1965-),女,副主任技师,大学本科,从事临床检验及研究工作。

参考文献:
[1]王艾丽,张 颖,李保仝,等.抗人甘露聚糖结合凝集素单抗的制备、鉴定及应用[J].临床检验杂志,2001,19(6):325.
[2]王毓三,武建国.临床检验操作规程[M ].南京:东南大学出版社,2005:149-195
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[6]Tsuts umi A,Takahas hi R,Sumida T.Mannose bindi ng lectin:genetics and autoimmune di seas e[J].Autoimmun Rev,2005,4(6):364.
(收稿日期:2008-01-30)
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tively.C onclusion the method of IIF under normal circumstances could be used for testing ANCA in clinical rou tine screening test,the method of ELISA can be used as specific ANC A confi rmatory tes t.But ELISA is mandatory when vasculi tis is present,ANCA i s likely to be missed i f ANCA is detected only by the method of bination of the two method s can increase the detection rate and reduce the misdiagnosi s rate of ANCA
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