β-榄香烯聚合物胶束的制备工艺研究

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Chin J Mod Appl Pharm, 2016 October, Vol.33 No.10
中国现代应用药学 2016 年 10 月第 33 卷第 10 期
香烯经精馏后，去除 γ、δ-榄香烯异构体，得到的 抗癌单体有效成分具有免疫增强作用、高选择性 等优点 。为进一步提高 β-ELE 抗脑胶质瘤的脑 靶向治疗作用，增加药物透过血脑屏障的透过性， 本研究采用二硬脂酰磷脂酰乙醇胺聚-乙二醇 (DSPE-PEG2000)为载体材料，采用薄膜水化法结 合包封率，对其纳米聚合物胶束的制备工艺进行 优化， 为将其开发成新型脑靶向制剂提供科学依据。 1 仪器与试剂 Agilent 1100 高 效 液 相 色 谱 仪 ； JEOL JEM-1200EX 透射电镜 ( 日本电子公司 ) ； Nicomp 380ZLS 型激光粒度仪 ( 美国 PSS 粒度分析仪公 司 ) ； RE-52A 型旋转蒸发器 ( 上海亚荣生化仪器 厂)；CENCO 型涡旋仪(荷兰 Breda 公司)。 β-ELE 原料药 ( 大连远大制药有限公司，含 量 >98%，批号： 20150825)； β-ELE 对照品 (中国 药品生物制品检定所，批号：100268-200401，供 含量测定用)；DSPE-PEG2000(二硬脂酰磷脂酰乙 醇胺-聚乙二醇 2000，上海艾韦特医药科技有限公 司，批号：20150922)；甲醇为色谱纯，其余均为 分析纯。 2 2.1 方法与结果 β-ELE 纳米聚合物胶束的制备 采用薄膜水化法制备。精密称取处方量的 DSPE-PEG2000 载体材料与 β-ELE 原料药，置于 茄形瓶中，加 10 mL 甲醇溶解，摇匀，于 35 ˚C 旋 转蒸发真空干燥除去甲醇，在茄形瓶底部及内壁 形成一层均匀的脂膜，加入一定体积的 PBS 缓冲 液，在 40 ˚C 水浴中水化一定时间，冷却至室温， 经 0.2 µm 的聚碳酸酯膜滤过，即得透明的 β-ELE 纳米聚合物胶束(β-ELE-DSPE-PEG2000-PMs)[7-8]。 2.2 2.2.1 包封率的测定 色谱条件 色 谱 柱 为 Diamonsil
榄香烯是临床常用的中药广谱抗肿瘤药物， 以 β-榄香烯(β-elemene，β-ELE)计算，含 β-、γ-、δ榄香烯之和不得 <85.0%。榄香烯及其脂质体注射
基金项目： 辽宁省科学技术计划项目(2015020703) 作者简介： 袁子民，男，博士，副教授
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液和口服乳制剂[1-2]，在脑胶质瘤治疗方面，主要 通过抗增殖和诱导凋亡作用，取得了较好的治疗 效果，但也存在一定的不良反应[3-5]。β-ELE 由榄
116600, China; 2.School of Pharmacy, Jinzhou Medical University, Jinzhou 121001, China) ABSTRACT: OBJECTIVE To optimize the preparation technology of β-elemene-loaded nano polymeric micelles. METHODS With poly(ethylene glycol-2000)-grafted distearoy lphosphosphatidylethanolamine(DSPE-PEG2000) as the carrier materials, thin film hydration method was used to prepare β-elemene-loaded nano polymeric micelles; With entrapment efficiency of β-elemene as index, orthogonal design was adopted to optimize effects of the ratio of β-elemene and DSPE-PEG2000, volumn and time of hydration, pH of PBS. RESULTS In the optimal conditions, the mass ratio of β-elemene and DSPE-PEG2000 of 1∶10, hydration volume of 5 mL, hydration time of 30 min, PBS buffer pH of 7.4, the prepared nanoparticles were round and regular in shape without adhesions, the average of particle size was 56 nm, the average of entrapment efficiency was 88.83%. CONCLUSION The preparation established in this optimization method is stable and feasible, and it could be used for the preparation of β-elemene-loaded nano polymeric micelles. KEY WORDS: β-elemene; nano polymeric micelles; thin film hydration method
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Chem, 2010, 48(7): 256-260. LI Q, CHEN Y Z, XIN H L. Research progress of Shancigu on chemical composition and pharmacological effects [J]. J Pharm Pract(药学实践杂志), 2014, 32(4): 250-253, 260. [10] DONG H L, WANG C L, GUO S X, et al. New bibenzyl derivatives from the tubers of Pleione yunnanensis. [J]. Chem Pharm Bull (Tokyo), 2009, 57(5): 513-515. [11] ZHANG D, LIU G T, SHI J G, et al. Effects of Coeloglossum viride var. bracteatum extract on memmory deficits and pathological changes in senescent mice [J]. Basic Clin Pharmacol Toxicol, 2006, 98(1): 55-60. [12] ZHANG D, LIU G, SHI J, et al. Coeloglossum viride var.
β-榄香烯聚合物胶束的制备工艺研究

袁子民 1，高春华 2，王静 1，李学涛 1(1.辽宁中医药大学药学院，辽宁
摘要：目的 优化 β-榄香烯纳米聚合物胶束的制备工艺。方法
大连 116600；2.锦州医科大学药学院，辽宁 锦州 121001)
以二硬脂酰磷脂酰乙醇胺聚-乙二醇(DSPE-PEG2000)为 在 β-ELE 与 DSPE-PEG2000 的质量比为
纳米聚合物胶束的载体材料，采用薄膜水化法，以包封率为考察指标，通过正交试验考察 β-榄香烯与 DSPE-PEG2000 的 质量比、水化时间、水化体积、PBS 缓冲液的 pH 值对制备工艺的影响。结果 大小较为均匀，平均粒径为 56 nm，平均包封率为 88.83%。结论 米聚合物胶束的制备。 关键词：β-榄香烯；纳米聚合物胶束；薄膜水化法 中图分类号：R943 文献标志码：B DOI: 10.13748/j.cnki.issn1007-7693.2016.10.014 文章编号：1007-7693(2016)10-1280-04 1∶10，水化体积为 5 mL，水化时间为 30 min，所用 PBS 缓冲液的 pH 值为 7.4 时，所制得的纳米聚合物胶束形态规则， 该制备工艺稳定可行，重复性好，可用于 β-榄香烯纳
bracteatum extract attenuates D-galactose and NaNO2 induced memory impairment in mice [J]. J Ethnopharmacol, 2006, 104(1/2): 250-256. [13] LIU X Q. Studies on the chemical constituents and their anti-tumor activity of Pleione bulbocodioides [D]. Tianjin. Tianjin University, 2007. [14] ZHANG R P, HE Y, SHI S L, et al. Evaluation of Tripterygium wilfordii Hook. f. from different habitats bywk.baidu.comHPLC fingerprint and principal component analysis [J]. Chin J Mod Appl Pharm( 中 国 现 代 应 用 药 学 ), 2014, 38(11): 1338-1344. 收稿日期：2016-02-14
TM [6]
过 0.45 μm 微孔滤膜， 测定胶束中总的药物量(W1)。 另精密量取 β-ELE-DSPE-PEG2000-PMs 1 mL 于 5 mL 离心管中，加入石油醚(30~60 ˚C)3 mL，摇 匀，涡旋 3 min，静置，待分层后，弃去石油醚层， 同法再重复萃取 1 次，除去未包封游离的 β-ELE。 将下层胶束加入适量甲醇溶解，转移至 25 mL 量 瓶中， 并稀释至刻度， 摇匀， 过 0.45 μm 微孔滤膜， 测定石油醚萃后包封的 β-ELE 药物量(W2)，计算 包封率(EE)：EE=W2/W1×100%[7-8]。 2.2.4 稳定性试验 分别在 0，2，4，6，8 h，精 密吸取同一供试品溶液， 进样 10 μL， 测定峰面积， 结果 β-ELE 在 8 h 内稳定，RSD 为 1.53%。 2.2.5 仪器精密度试验 分别精密吸取同一对照 品溶液 10 μL，连续进样 6 次，记录峰面积，RSD 为 1.62%，结果表明仪器的精密度良好。 2.2.6 重复性试验 取同一载药胶束样品 (β-ELEDSPE-PEG2000-PMs)6 份，按“2.2.3”项下方法制 备供试品溶液，各精密吸取 10 μL，分别注入液相 色 谱 仪 测 定 。 结 果 显 示 ， β-ELE 平 均 含 量 为 1.82 mg·mL1， RSD 为 2.02%，表明方法重复性 良好。 2.2.7 回收率试验 分别精密量取 6 份已知含量 β-ELE-DSPE-PEG2000-PMs 溶 液 (1.82 mg·mL1) 0.5 mL，置 25 mL 量瓶中，分别精密加入 1.0 mL β-ELE 对照品溶液(0.83 mg·mL1)，按“2.2.3”项 下方法制备胶束供试品溶液，按“ 2.2.1 ”项下色 谱条件测定并计算回收率，结果平均回收率为 97.5%，RSD 为 1.86，符合相关规定。 2.3 处方及制备工艺优化 在预试验、 单因素考察及文献[9-10]研究的基础 上，选取 β-ELE 与 DSPE-PEG2000 的质量比(A)、 水化体积(B)、水化时间(C)、PBS 缓冲液的 pH 值 (D)因素，以包封率为考察指标，投药量为 10 mg， 按正交设计试验 L9(34)表进行实验， 因素水平见表 1，试验设计及结果见表 2。
Preparation of β-elemene-loaded Nano Polymeric Micelles GAO Chunhua2， WANG Jing1， LI Xuetao1(1.School of Pharmacy, Liaoning University of TCM, Dalian YUAN Zimin1，