细说细胞培养中的的支原体污染以及生长曲线测定

细说细胞培养中的的支原体污染以及生长曲线测定
-麒盟生物
1、问：测定细胞生长曲线的意义是什么？
答：细胞生长曲线是测定细胞绝对生长数的常用方法，也是判定细胞活力的重要指标，是培养细胞生物学特性的基本参数之一。

因为细胞太小，无法测单个细胞的生长状态，所以测细胞群体的生长曲线。

2、问：如何选择细胞接种数？
答：可根据细胞传代培养过程中接种数及细胞生长周期进行计算，细胞接种数因细胞的不同而不同。

3、细胞计数时为什么要用台盼蓝染色？
答：加入台盼蓝后，活细胞不着色，台盼蓝着色的细胞呈深蓝色，是不健康或已死亡的细胞，不能计数。

4、细胞生长曲线测定时为什么要做重复孔？
答：测定细胞生长曲线细胞计数时选择3个复孔，每孔分别计三次，取其平均值，目的是减小操作误差。

5、细胞生长曲线测定周期是几天?
答：一般是一个星期。

6、为什么绘制的细胞生长曲线没有达到平台期？
答：可能有以下原因：一是细胞接种密度过低；二是细胞培养时间过短；三是细胞生长状态不好，使其不能正常增殖。

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7、为什么细胞计数第一天，细胞数没有增加反而减少?
答：一般细胞传代后，会有一个生长缓慢的潜伏期，细胞不增殖，而细胞会有正常的死亡，故细胞数不增加反而减少。

8、细胞生长曲线还有其他方法绘制吗？
答：当然有。

我们提到最多的是直接计数的方法，除此以外还有相对计数的方法，该类方法首先要绘制标准曲线，标定细胞数和某个变量的函数关系，然后我们只需要测定每天这个变量的值便可以计算出细胞数。

常用的是MTT、CCK8等比色的方法。

细胞培养中的的支原体污染
支原体是一种大小仅为0.2~0.3μm，无细胞壁，可透过一般过滤膜（0.22~0.45μm）的原核生物。

支原体是让每个细胞培养者崩溃的家伙。

因为它极小，可以很轻松的通过滤膜，混入培养系统中，而且没有细胞壁，可以轻而易举的躲过抗生素，就这样悄无声息的杀死细胞，与细菌和真菌相比，支原体造成的污染不论在检测、预防还是去除上都更为困难。

细胞培养过程中一旦有支原体污染，轻则实验失败，重则整个实验系统被污染，严重影响实验的进程，劳心劳力。

为避免不必要的损失，细胞培养过程中要预防支原体的污染，以下是一些预防支原体污染的实践经验：
1、从源头上遏制支原体，当有新细胞进入培养系统时，必须进行支原体检测，确定无污染后才能进行正常的培养，实验。

2、所有进入细胞库的细胞都必须确保无支原体污染。

3、人体是最大的支原体携带者，因此进入细胞培养室时，必须穿细胞室专用实验服，戴口罩、手套、帽子，女生的长发一律不可露在外边。

4、培养每株细胞所用的培养试剂都需分开使用，避免交叉污染。

5、细胞培养室必须进行定期的消毒，并定期对培养系统进行支原体检测。

6、支原体污染后，不会使细胞死亡，可以与细胞长期共存，培养基一般不发生混浊，细胞无明显变化，外观上给人以正常感，实则细胞已受到多方面的潜在影响，如引起细胞变形，影响DNA合成，抑制细胞生长等，在培养过程中，若发现细胞状态不对，破碎细胞甚多，必须立马进行支原体检测，切不可延误，有报道称25%的细胞都存在支原体污染。