最新实验10脂质体的制备

• 对于脂溶性的、与磷脂膜亲和力高的药物， “被动载药”法较为适用。而对于两亲性药物， 其油水分配系数受介质的pH值和离子强度的影 响较大，包封条件的较小变化，就有可能使包 封率有较大的变化，首选“主动载药” 方法。
• 下图为“主动载药”中pH梯度法载药原理示
意图
Hale Waihona Puke Baidu
oudside neutral pH
• （ 3 ） 另 取 PBS 30ml 于 小 烧 杯 中 ， 同 置 于 6570℃水浴中，保温，待用。
• （4）取预热的PBS 30ml，加至含有磷脂膜的烧 瓶 中 ， 65-70℃ 水 浴 中 搅 拌 水 化 10-20min 。 取 出 脂质体液体于烧杯中，置于磁力搅拌器上，室温 下，搅拌30-60min，如果溶液体积减少，可补加 水至30m1，混匀，即得。（整个过程也可在旋转 蒸发仪上完成，其它的脂质体制备也可在旋转蒸 发仪上完成。）
55-65℃含药或不含药的水性介质中，蒸去乙醇，继续搅 拌1—2h，即可形成脂质体。
• （3）逆相蒸发法 系将磷脂等脂溶性成分溶于有机溶剂， 如氯仿、二氯甲烷中，再按一定比例与含药的缓冲液混 合、乳化，然后减压蒸去有机溶剂即可形成脂质体。该 法适合于水溶性药物、大分子活性物质，如胰岛素等的 脂质体制备，可提高包封率。
• 2.实验设备与仪器：旋转蒸发仪、烧瓶、恒温 水浴锅、磁力搅拌器、吸耳球、光学显微镜、 玻璃棉、5ml注射器筒、0．8 m微孔滤、紫外 分光光度仪、溶量瓶等。
（二）实验部分
1．空白脂质体的制备（用于测定柱分离度用）
【处方】
注射用大豆卵磷脂
0.9g
胆固醇
0.3g
无水乙醇
2-20m1
磷酸盐缓冲液
适量
DH+ H+
D
inside acid pH
DH+ H+
D
• 评价脂质体质量的指标有粒径、粒径分布 和包封率等。其中脂质体的包封率是衡量脂质 体内在质量的一个重要指标。常见的包封率测 定方法有分子筛法、超速离心法、超滤法等。 本文采用阳离子交换树脂法测定包封率。“阳 离子交换树脂法”是利用离子交换作用，将荷 正电的未包入脂质体中的药物(即游离药物)， 如本实验中的游离小檗碱，通过阳离子交换树 脂吸附除去，包封于脂质体中的药物(如小檗 碱)，由于脂质体荷负电荷，不能被阳离子交 换树脂吸附，从而达到分离目的，用以测定包 封率。示意图见下图。
Ber +
Ber +
－－－
－
－
Ber + Ber
－
－
－ Ber +－
－－ －
Na+
SO-3
Na+
SO-3
Na+
SO-3
Na+
SO-3
• 三、 实验内容
• （一） 实验材料与设备
• 1.实验材料：盐酸小檗碱、注射用大豆卵磷脂、 胆固醇、无水乙醇、95％乙醇、磷酸氢二钠、 磷酸二氢钠、柠檬酸、柠檬酸钠、NaHCO3、阳 离子交换树脂。
实验10脂质体的制备
一、 实验目的
1、掌握薄膜分散法制备脂质体的工艺。 2、掌握用阳离子交换树脂测定脂质体包封
率的方法。
3、熟悉脂质体形成原理，作用特点。 4、了解“主动载药” 与“被动载药” 的
概念。
二、 实验原理
脂质体是由磷脂与(或不与)附加剂为骨 架膜材制成的，具有双分子层结构的封闭囊 状体。
•
脂质体的制备方法有多种，根据药物的性质或研究
需要来进行选择。
• (1)薄膜分散法 这是一种经典的制备方法，它可形成多
室脂质体，经超声处理后得到小单室脂质体。此法优点 是操作简便，脂质体结构典型，但包封率较低。
• (2)注入法 有乙醚注入法和乙醇注入法等。“乙醇注入
法”是将磷脂等膜材料溶于乙醇中，在搅拌下慢慢滴于
• （5）取样，在油镜下观察脂质体形态，画出所 见脂质体结构，记录最多和最大的脂质体的粒径； 随后将所得脂质体溶液通过0.8m微孔滤膜两遍， 进行整粒，再于油镜下观察脂质体的形态，画出 所见脂质体结构，记录最多和最大的脂质体粒径。
• 【注意事项】
• (1)在整个实验过程中禁止用火。
• (2)磷脂和胆固醇的乙醇溶液应澄清，不能在 水浴中放置过长时间。磷脂和胆固醇的比例可 以采用4：1或5：1或6：1，如果磷脂和胆固醇 的质量不好，建议采用6：1 。
• 其他方法：冷冻干燥法 、熔融法 等。
• 在制备含药脂质体时，根据药物装载的机 理不同，可分为“主动载药” 与“被动载药” 两大类。所谓“主动载药”，即通过脂质体内 外水相的不同离子或化合物梯度进行载药，主 要有K+-Na+梯度和H+梯度(即pH梯度)等。传统上， 人们采用最多的方法是“被动载药”法。所谓 “被动载药”，即首先将药物溶于水相或有机 相(脂溶性药物)中，然后按所选择的脂质体制 备方法制备含药脂质体，其共同特点是：在装 载过程中脂质体的内外水相或双分子层膜上的 药物浓度基本一致，决定其包封率的因素为药 物与磷脂膜的作用力、膜材的组成、脂质体的 内水相体积、脂质体数目及药脂比(药物与磷脂 膜材比)等。
常见的磷脂分子结构中有两条较长的疏 水烃链和一个亲水基团。将适量的磷脂加至 水或缓冲溶液中，磷脂分子定向排列，其亲 水基团面向两侧的水相，疏水的烃链彼此相 对缔和为双分子层，构成脂质体。
用于制备脂质体的磷脂有天然磷脂，如大 豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂等；合成磷脂，如二棕 榈酰磷脂酰胆碱、二硬脂酰磷脂酰胆碱等。常 用的附加剂为胆固醇。胆固醇也是两亲性物质， 与磷脂混合使用，可制得稳定的脂质体，其作 用是调节双分子层的流动性，降低脂质体膜的 通透性。其他附加剂有十八胺、磷脂酸等，这 些附加剂能改变脂质体表面的电荷性质，从而 改变脂质体的包封率、体内外稳定性、体内分 布等其他相关参数。
制成约30m1脂质体
• 【制备】
• （1）磷酸盐缓冲液（PBS）的配制 称取磷酸 氢 二 钠 （ Na2HPO4﹒12H2O ） 0.37g 与 磷 酸 二 氢 钠 （稀释Na至H2P1O040﹒0m2lH（2Op）H约2.为0g5,.加7）蒸。馏水适量，溶解并
• （2）称取处方量磷脂、胆固醇于100ml（也可 以是250ml、500ml或1000ml ）烧瓶中，加无水 乙醇1-2ml（根据情况可以加10ml或20ml ）， 置于65-70℃水浴中，搅拌使溶解，于旋转蒸发 仪上旋转，使磷脂的乙醇液在壁上成膜，减压 除乙醇，制备磷脂膜。