花生壳中黄酮类化合物的提取及其纯化

文献标识码：A
文章编号：1002-6630(2009)08-0101-05
花生是世界五大油料作物之一，其生产遍及世界各 大洲，1990～1997 年全球年均种植面积为 217319 万公 顷，其中亚洲占 5 6% 以上。近年来，我国的花生种植 面积逐年递增，产量已达 1500 万吨，位居世界第一位。 我国盛产花生，在花生的加工过程中，每年产花生壳 约 450 万吨，其中大部分被当作废弃物或燃料，仅有少 量制造胶合剂、人造板以及制备塑料填料和被加工成饲 料或用于化工原料，价格低廉，资源利用率很低。花 生壳中含有的黄酮类化合物(木犀草素) 具有降低血胆固 醇、β- 脂蛋白、β- 脂蛋白结合胆固醇及动脉脂质的 作用，对于治疗高血压、高血脂和冠心病等有明显的
1.3.6 回收率实验 准确称取 10 份花生壳样品各 1.0g，其中 5 份加入
4mg 芦丁标样，按照微波法最佳提取条件进行提取，用 紫外可见分光光度计测定吸光度，计算黄酮类化合物的 提取量，对加标和未加标的样品取平均值后，计算回 收率。
加标样品的提取量 －未加标样品的提取量 回收率(%)= ———————————————————×100
加标量
２ 结果与分析
2.1 微波法提取条件的选择 2.1.1 料液比对黄酮类化合物提取量的影响
不同料液比的提取结果见表 1。由表 1 可见，黄酮 类化合物的提取量随着提取溶剂的增加而增加，在固定 微波提取功率和提取时间的前提下，当提取溶剂体积大 于原料质量的 30 倍时，黄酮类化合物的提取量基本保持 不变，故选择料液比 1:30(g/ml)。
性条件下，经硝酸铝显色后，以试剂为空白参比液在 420～700nm 波长范围测定螯合物的吸光度，螯合物于 510nm 波长处有最大吸收，故测定时选用此波长。
1.3.3 标准曲线的绘制 分别精密吸取 0.10mg/ml 芦丁对照液 0.00、0.50、
1.00、2.00、3.00、4.00、5.00ml 于 10.00ml 容量瓶中， 分别加入 5% 亚硝酸钠溶液 1.0ml，摇匀，静置 5min； 再加 10% 硝酸铝溶液 1.0ml，摇匀，静置 5min；再加 4% 氢氧化钠溶液 5.00ml，用 60% 乙醇稀释至刻度，摇 匀，静置 10min。用分光光度计在 510nm 波长处以试剂 为空白进行参比，测定各样品的吸光度并得出回归方 程：A= － 2.230 × 10-2+14.46C，r=0.9995，见图 1。
1.3.1 样品制备 剥取花生壳，经鼓风干燥箱干燥，用高速组织捣
碎机捣碎成粉末。精确称取约 1.0 g 花生壳粉末，按正 交试验表加入一定浓度的乙醇溶解，再选择相应的微波 功率、时间，提取液冷却、过滤，用 100ml 容量瓶定 容，待用。
1.3.2 波长选择 取样品液适量，在 0.3ml 5% 亚硝酸钠溶液存在的碱
无水乙醇、95% 乙醇、NaNO2、Al(OH)3、NaOH
收稿日期： 2008-06-17 基金项目：东华理工大学校长基金项目(DHXK0821) 作者简介：李芳清(197 1-)，女，讲师，硕士，研究方向为食品分析。E-mail：lfq-71@yah oo.com .cn
102 2009, Vol. 30, No. 08
extraction, microwave-assisted extraction not only can reduce the extraction time from 4 h to 4 min but improve the yield by
2.4 times. Furthermore, the purification of total flavonoids from peanut hulls by macroporous adsorption resin was also
C×V 黄酮类化合物提取量 = ————
W
式中：C 为样品溶液质量浓度(mg/ml)；V 为样品溶 液体积(ml)；W 为样品质量(g)。
1.3.5 乙醇回流法提取花生壳中黄酮类化合物 精确称取约 1.0g 花生壳，加入一定量的 50% 乙醇，
50 ℃回流 2 次，将 2 次提取液合并，浓缩，加 3 % 淀 粉(按浓缩液重量计)，在 50℃以下减压干燥，以供黄酮 类化合物含量测定。
of total flavonoid and luteolin are promoted by 4 to 5 times after purification.
Key words：peanut hulls；microwave；flavonoid；adsorption resin；luteolin
中图分类号：O623.54
extraction solvent, microwave power 700 W, radiation time 4 min and material to extraction solvent ratio 1:30 (g/ml). Under the
above conditions, the yield and spike recovery of total flavonoid are 0.48 mg/g and 93.3%, respectively. Compared to ethanol reflux
Abstract ：Based on single-factor test and orthogonal test, microwave-assisted extraction conditions of total flavonoid from
peanut hulls were optimized. The results showed that the optimal extraction conditions are as follows: taking 50% alcohol as
提取级数(次) 1 2 3
提取量(mg/g) 3.57 0.42 0.15
提取率(%) 77.61 9.13 3.26
2.1.3 提取时间对黄酮类化合物提取量的影响 用体积分数为 50% 的乙醇做溶剂，在微波功率为
560W 和料液比 1:30(g/ml)的条件下，不同提取时间的提 取量见图 2 。由图 2 可见，当提取时间为 4mi n 时，黄 酮类化合物的提取量最大，低于 4min，提取不完全， 高于 4min，部分黄酮类化合物可能被破坏，而导致提 取量下降。因此提取时间以 4min 为宜。
※工艺技术
食品科学
2009, Vol. 30, No. 08 101
花生壳中黄酮类化合物的提取及其纯化
李芳清，徐卫东
(东华理工大学应用化学系，江西 抚州
344000)
摘 要：本实验采用微波法对花生壳中黄酮类化合物进行提取。将单因素分析与正交试验相结合，得到微波法提 取花生壳中黄酮类化合物的最佳工艺条件：提取Байду номын сангаас乙醇体积分数 50%，微波功率 700W，提取时间 4min，料液比 1:30(g/ml)，每克花生壳中提取黄酮类化合物为 0.48mg，回收率为 93.3 %。微波法与乙醇回流法相比提取时间由 4h 减少到 4min，提取黄酮类化合物的量提高了 2.4 倍。大孔吸附树脂富集纯化花生壳黄酮类化合物方法：以木犀草 素作为考察指标，考察静态吸附量和洗脱率，筛选出最适型号树脂，比较纯化前后黄酮类化合物和木犀草素含量 的变化。结果表明：D 101 型树脂为花生壳提取液最佳精制纯化树脂，树脂纯化后黄酮类化合物和木犀草素的含量 提高 4～5 倍。 关键词：花生壳；微波法；黄酮；吸附树脂；木犀草素
吸光度
0.8
0.6
0.4
0.2
0
0
0.02
0.04
0.06
芦丁浓度(mg/ml)
图 １ 芦丁标准曲线 Fig.1 Standard curve of lutin
1.3.4 提取物含量测定 精密吸取样品液 5ml，置于 25ml 容量瓶中，加入
相应浓度的乙醇溶液至一半容量，再加入 5 % 硝酸钠 1ml，摇匀、静置 5min；再加入 10% 硝酸铝 1ml，摇 匀、静置 5min；再加入 4% 氢氧化钠 5ml，摇匀、静 置 10min，定容、待测。由标准曲线方程计算得样品 溶液质量浓度 C 再计算出样品黄酮类化合物含量。
investigated in the present study. Using the luteolin content as the index, the capabilities of static adsorption and desorption
were examined. The results showed that the D101 resin is the best among chosen 7 resins for the purification, and both of contents
Extraction and Purification of Total Flavonoids from Peanut Hulls
LI Fang-qing，XU Wei-dong (Department of Applied Chemistry, East China Institute of Technology, Fuzhou 344000, China)
食品科学
※工艺技术
均为分析纯；木犀草素(NO.111520-200201) 、芦丁 中 国药品生物制品检定所；甲醇( 色谱纯) 、蒸馏水。 1.2 仪器与设备
GZX-9140ME 数显鼓风干燥箱 上海博讯实业有限公 司医疗设备厂；DS-1 高速组织捣碎机 上海标本模型 厂；BS124S 电子分析天平 北京赛多利斯仪器系统有 限公司；SHZ-D(Ⅲ) 循环水式真空泵 河南巩义市予华 仪器有限责任公司；紫外可见分光光度计 上海光谱仪 器有限公司；D101 型大孔树脂 天津农药股份有限公司 树脂分公司；A B - 8 型大孔树脂 南开大学化工厂； DA201 型大孔树脂 上海汇脂树脂厂；HPD100(药用级)、 HPD400、HPD100、HPD600 型大孔树脂 沧州宝恩化 工有限公司。 1.3 方法
疗效[1-4]。因此该资源的开发利用潜力巨大、前景广阔。 本实验拟研究花生壳中黄酮类化合物的提取及纯化，以 期为花生壳的综合利用提供工艺基础。
１ 材料与方法
1.1 材料与试剂 花生购自抚州农贸市场。花生壳粗提物系采用微波
法最佳条件提取得到的花生壳提取液，置旋转蒸发器上 减压浓缩而成(黄酮类化合物含量为 11.7%，木犀草素含 量为 2.59%)。
提取率(%)= ———× 100 AV 式中：A o 为每次提取液的吸光度；V o 为每次提取 液的体积；A 为 3 次总的提取液的吸光度；V 为 3 次总 的提取液的体积。
表 ２ 多级提取结果 Table 2 Effects of extraction times on flavonoid compounds yield
5
4.5
提取量(mg/g)
4
3.5
3
2.5
2
2
3
4
5
6
7
8
时间(min)
图 ２ 不同提取时间对提取量的影响
Fig.2 Effects of extraction time on flavonoid extract compounds yield
Table 1
表 １ 料液比对提取量的影响 Effects of material to extraction solvent on flavonoid
compounds yield
料液比(g/ml)
1:20
提取量(mg/g)
1.14
1:30
1:40
1.35
1.37
2.1.2 提取级数对黄酮类化合物提取量的影响 固定微波功率和提取时间，对同一样品重复提取结
果见表 2。由表 2 可见，前 2 次提取的总提取率为86.74%， 3 次总提取率为 90.00%，可见在前 2 次提取的基础上， 再增加提取次数对黄酮类化合物的提取率增加不大，因 此选择二级提取。每次提取的提取率计算公式为：
※工艺技术
食品科学
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