多肽的固相合成版
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1963年，R.B.梅里菲尔德提出固相合成的方法，避免了溶解问题。 它的原理是将第 1个氨基酸接到不溶的固体颗粒上,然后将保护的第2 个氨基酸与之缩合。产物因在固体颗粒上，因此很容易将反应中剩 余的试剂清洗干净。然后脱去保护基,再将第3个氨基酸与之缩合而 成三肽。如此反复，只要反应产率非常高，就能合成很大的肽。最 后将合成的肽从固体的支持物上切下，再经纯化，即可得相应的肽。
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•固相合成法的诞生 •多肽合成仪介绍 •活化基团Fmoc与tBoc •多肽的不稳定
活化基团Fmoc与tBoc
多肽固相合成法 多肽合成是一个重复添加氨基酸的过程，固相合成顺序一般从C端 （羧基端）向N端（氨基端）合成。固相合成法，大大的减轻了每步 产品提纯的难度。为了防止副反应的发生，参加反应的氨基酸的侧链 都是保护的。羧基端是游离的，并且在反应之前必须活化。固相合成 方法有两种，即Fmoc和tBoc。
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•固相合成法的诞生 •多肽合成仪介绍 •活化基团Fmoc与tBoc •多肽的不稳定
固相合成法的诞生
有机化学家们
Max Bergmann 1932
Emil Fischer 1902
20世纪 50年代
1963
1972
Lou Carpino
Merrifield
•括取基到•多•肽速命其反础•多到1催得础1了9肽化，，在应的9肽1产了。6720932合学成并碱条各02合素不3年世年2成上为成性件种成，少年，纪，才具多为条温肽方胰成，ML5E开有肽了件和自o面0岛绩emMu年r始里合一下，动r的素，aiCli代xf有程成支可迅合Fi知a等这eBir，了碑的独以速成slp识，为deci有一意首立迅得仪首rnh太同后goe机定义选的速到也次m少时来r首首a化的的方学脱广相提，在的先n先学发合法科除泛继出n进多固将等开家展成，，使出—了展肽相9人始们-—。方而用现1固芴也合合0开关合固法且，和相m甲相成成始注成i相，带以发多n氧当方方使多就了有一来展B肽羰缓法法用O肽可大机出了，合基慢以的C苄合以量合现多并成和(及出F氧成反的成就肽仍方FM氨现羰，M应生(由有在法OS基提O基由C完物P于机不(S酸供C)O(于全用活其合断ZP这保了S)P当，于性来合成得)两S护实。时而保多保)成上到种，基验在且护肽护方的改方这上和由α，α便一造法个面理--氨于氨包，次和为在也论基其基迅革完基多，， 善。同时，固相合成树脂，多肽缩合试剂以及氨基酸保护基，包括合 成环肽的氨基酸正交保护上也取得了丰硕的成果。
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•固相合成法的诞生 •多肽合成仪介绍 •活化基团Fmoc与tBoc •多肽的不稳定
多肽合成仪
多肽合成仪的发展
• 第一代多肽合 成仪
• 第二代多肽合 成仪
• 第三代多肽合 成仪
第一代多肽合成仪
• 第一代多肽合成仪是以 Beckman公司推出的 Beckman 990 Peptide Synthesizer以及Vega’s Biotechnologies公司推 出的Vega’s 296 Peptide Synthesizer为代表的，诞 生在上世纪七十年代。
第一代多肽合成仪
back
第二代多肽合成仪
• 第二代多肽合成仪是以 Protein Technologies公 司推出的PS3 Peptide Synthesizer以及 Advanced ChemTech公 司推出的ACT peptide synthesizer Model 90为 代表的，诞生在上世纪八 十年代。
Fmoc的循环
•由于Fmoc比tBoc存在很多优势，现在大多采用Fmoc法合成具 体合成由下列几个循环组成：
1.去保护：Fmoc 保护的柱子和单体 必须用一种碱性溶 剂（piperidine） 去 除氨基的保护基
团。
3. 洗脱和脱保护：多肽从 柱上洗脱下来，其保护基 团被一种脱保护剂（TFA ） 洗脱和脱保护。 .
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• 氨基保护 • 羧基保护
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• 缩合 • 羧基脱除保护
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• 缩合向C端延长 • 氨基脱除保护
ThemeGallery is a Design Digital Content & Contents mall developed by Guild Design Inc.
学员旅五队 徐磊 许金翔 钟家伟 王康 尚立群 王修楠
• 定义：以氨基酸为原料，用化学方法合成多肽或蛋白质。
•目的：①确证天然多肽或蛋白质的结构；②生产天然的、 在生物体内含量极微但有医疗或其他生物效用的多肽；③ 改变部分结构，研究其结构与功能的关系，并设计更有效 的药物。
•基本原理 ： 将两个氨基酸合成一个二肽,基本点是将一 个氨基酸的羧基与另一个氨基酸的氨基连结成肽键
2.激活和交联：下一个氨基酸的羧基被一种 活化剂所活化。活化的单体与游离的氨基反 应交联，形成肽键。在此步骤使用大量的超 浓度试剂驱使反应完成。
第二代多肽合成仪
此两款设备也是 目前市场上仍在 销售的最早的多 肽合成仪。
back
第三代多肽合成仪
•第三代多肽合成仪是 以Applied Biosystems 公司的ABI 433 peptide synthesizer 与C S Bio公司的CS336 为代表的无死角多肽合 成仪为代表的，诞生在 上世纪九十年代。
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• 氨基及脱羧除基保护 • 形成无保肽护的四
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• 缩合从N端延伸
弊端：上述反应都在溶剂中进行，称为溶液方法。因所 用保护基都是疏水的,而肽键是亲水的,因此合成到一、二 十肽时，使保护了的肽溶解便成了困难的问题。寻找合 适的溶剂是液相法的一个难题。
关键：需要有措施使第1个氨基酸的氨基与第2个氨基酸 的羧基不参与反应
方法：将这些不希望参加反应的基团用一些特殊的化学 试剂与之反应,使生成的基团对缩合反应不敏感,还能在肽 合成后，在不破坏肽键及氨基酸结构的条件下将它们恢 复成原先的基团。这一类试剂称保护试剂，形成的基团 称保护基。
多肽的液相合成Biblioteka Baidu
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•固相合成法的诞生 •多肽合成仪介绍 •活化基团Fmoc与tBoc •多肽的不稳定
活化基团Fmoc与tBoc
多肽固相合成法 多肽合成是一个重复添加氨基酸的过程，固相合成顺序一般从C端 （羧基端）向N端（氨基端）合成。固相合成法，大大的减轻了每步 产品提纯的难度。为了防止副反应的发生，参加反应的氨基酸的侧链 都是保护的。羧基端是游离的，并且在反应之前必须活化。固相合成 方法有两种，即Fmoc和tBoc。
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•固相合成法的诞生 •多肽合成仪介绍 •活化基团Fmoc与tBoc •多肽的不稳定
固相合成法的诞生
有机化学家们
Max Bergmann 1932
Emil Fischer 1902
20世纪 50年代
1963
1972
Lou Carpino
Merrifield
•括取基到•多•肽速命其反础•多到1催得础1了9肽化，，在应的9肽1产了。6720932合学成并碱条各02合素不3年世年2成上为成性件种成，少年，纪，才具多为条温肽方胰成，ML5E开有肽了件和自o面0岛绩emMu年r始里合一下，动r的素，aiCli代xf有程成支可迅合Fi知a等这eBir，了碑的独以速成slp识，为deci有一意首立迅得仪首rnh太同后goe机定义选的速到也次m少时来r首首a化的的方学脱广相提，在的先n先学发合法科除泛继出n进多固将等开家展成，，使出—了展肽相9人始们-—。方而用现1固芴也合合0开关合固法且，和相m甲相成成始注成i相，带以发多n氧当方方使多就了有一来展B肽羰缓法法用O肽可大机出了，合基慢以的C苄合以量合现多并成和(及出F氧成反的成就肽仍方FM氨现羰，M应生(由有在法OS基提O基由C完物P于机不(S酸供C)O(于全用活其合断ZP这保了S)P当，于性来合成得)两S护实。时而保多保)成上到种，基验在且护肽护方的改方这上和由α，α便一造法个面理--氨于氨包，次和为在也论基其基迅革完基多，， 善。同时，固相合成树脂，多肽缩合试剂以及氨基酸保护基，包括合 成环肽的氨基酸正交保护上也取得了丰硕的成果。
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•固相合成法的诞生 •多肽合成仪介绍 •活化基团Fmoc与tBoc •多肽的不稳定
多肽合成仪
多肽合成仪的发展
• 第一代多肽合 成仪
• 第二代多肽合 成仪
• 第三代多肽合 成仪
第一代多肽合成仪
• 第一代多肽合成仪是以 Beckman公司推出的 Beckman 990 Peptide Synthesizer以及Vega’s Biotechnologies公司推 出的Vega’s 296 Peptide Synthesizer为代表的，诞 生在上世纪七十年代。
第一代多肽合成仪
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第二代多肽合成仪
• 第二代多肽合成仪是以 Protein Technologies公 司推出的PS3 Peptide Synthesizer以及 Advanced ChemTech公 司推出的ACT peptide synthesizer Model 90为 代表的，诞生在上世纪八 十年代。
Fmoc的循环
•由于Fmoc比tBoc存在很多优势，现在大多采用Fmoc法合成具 体合成由下列几个循环组成：
1.去保护：Fmoc 保护的柱子和单体 必须用一种碱性溶 剂（piperidine） 去 除氨基的保护基
团。
3. 洗脱和脱保护：多肽从 柱上洗脱下来，其保护基 团被一种脱保护剂（TFA ） 洗脱和脱保护。 .
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• 缩合 • 羧基脱除保护
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• 缩合向C端延长 • 氨基脱除保护
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学员旅五队 徐磊 许金翔 钟家伟 王康 尚立群 王修楠
• 定义：以氨基酸为原料，用化学方法合成多肽或蛋白质。
•目的：①确证天然多肽或蛋白质的结构；②生产天然的、 在生物体内含量极微但有医疗或其他生物效用的多肽；③ 改变部分结构，研究其结构与功能的关系，并设计更有效 的药物。
•基本原理 ： 将两个氨基酸合成一个二肽,基本点是将一 个氨基酸的羧基与另一个氨基酸的氨基连结成肽键
2.激活和交联：下一个氨基酸的羧基被一种 活化剂所活化。活化的单体与游离的氨基反 应交联，形成肽键。在此步骤使用大量的超 浓度试剂驱使反应完成。
第二代多肽合成仪
此两款设备也是 目前市场上仍在 销售的最早的多 肽合成仪。
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第三代多肽合成仪
•第三代多肽合成仪是 以Applied Biosystems 公司的ABI 433 peptide synthesizer 与C S Bio公司的CS336 为代表的无死角多肽合 成仪为代表的，诞生在 上世纪九十年代。
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• 氨基及脱羧除基保护 • 形成无保肽护的四
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• 缩合从N端延伸
弊端：上述反应都在溶剂中进行，称为溶液方法。因所 用保护基都是疏水的,而肽键是亲水的,因此合成到一、二 十肽时，使保护了的肽溶解便成了困难的问题。寻找合 适的溶剂是液相法的一个难题。
关键：需要有措施使第1个氨基酸的氨基与第2个氨基酸 的羧基不参与反应
方法：将这些不希望参加反应的基团用一些特殊的化学 试剂与之反应,使生成的基团对缩合反应不敏感,还能在肽 合成后，在不破坏肽键及氨基酸结构的条件下将它们恢 复成原先的基团。这一类试剂称保护试剂，形成的基团 称保护基。
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