危重患者常见感染细菌耐药性和耐药基因的检测及分析

患者 的多种标本 ， 如血 、 、 泌 物 、 拭 子 、 液 、 腔 积 液 、 尿 分 咽 脓 胸 腹
水、 汁、 胆 脑脊 液 、 引流 液 等 。
１ ２ 仪 器 与 方 法 采 用 Ｂ ｈ ｅｉｌ０全 自动微 生 物 分 析 仪 ． Ｄ Ｐ ｏ ｎｘ ０ 对 临 床 分 离 的 细 菌 菌 株 进 行 鉴 定 ， ｒｙＢ ｕ ｒ 片扩 散 法 进 Ｋｉ — ａ ｅ 纸 ｂ 行 药 物 敏 感 试 验 ； 敏 推 测 法 鉴 定 产 Ｅ Ｂ ｓ菌 株 ； 合 酶 链 反 药 ＳＬ 聚 应 （ Ｃ 技 术 检 测 耐 喹诺 酮 类药 物 菌 株 ｐ ｒ 和 ｇ ｒ 喹 诺 酮 Ｐ Ｒ） ａＣ ｙＡ 类耐药相关基 因； 药敏结 果和基 因检 测结果进 行综合 分析 。 对 Ｐ Ｒ 扩增 ： 基 因 Ｐ Ｒ 扩 增 体 系 为 ２ Ｉ， 括 ｌ ｘ Ｂ ｆ ｒ Ｃ 靶 Ｃ ５ 包 Ｏ ｕｆ ｅ ２ ５ Ｌ， Ｃ ２ ． ． Ｍｇ Ｉ １ ５ｍｍｏ／ ， 下 游 引 物 各 ０ ４ ￣ ｌＬ， ａ ｌＬ 上 ． ｍｏ／ Ｔ ｑ
Байду номын сангаас论
重 。 （） ２ 分离 菌 株 均 检 出 喹 诺 酮 类 耐 药 基 因 ｐ ｒ ａ Ｃ和 ｇ ｒ 但 ｙ Ａ， 其 药 物 敏 感 率 和 耐 药 基 因携 带 率 有 一 定 差 异 ， 示 携 带 喹 诺 酮 提
类 耐 药 基 因是 其 对 喹 诺 酮 类 药 物 产 生 耐 药 的原 因 ， 外 可 能 尚 此
用 １ ／ ２ｇ Ｌ琼 脂 糖 凝 胶 ， 于 ５ ０ｂ 小 ０ ｐ用 ２ ／ 琼 脂 糖 凝 胶 电 ０ｇ Ｌ 泳 ，０ 电 压 电泳 ４ ｉ， Ｂ染 液 浸 泡 ３ ｎ 凝 胶 成 像 仪 ｉ０Ｖ ０ｒ ｎ Ｅ ａ ０ｍｉ， 观察分析结果 。 表 １ 喹 诺 酮 类 抗 菌 药 物 耐 药 基 因 Ｐ Ｒ 引物 Ｃ
Ｄ ＮＡ 聚 合 酶 １ ０ Ｕ， ＮＴ ｓ０ ２ ｍ ｜Ｌ， ＮＡ 模 板 ３ ” ， ． ｄ Ｐ ． ｍｏ／ Ｄ Ｌ
Ｐ Ｒ 专 用 水 加 至 ２ Ｌ。Ｐ Ｒ 扩 增 热 循 环 参 数 为 ： ｙＡ ９ Ｃ ５“ Ｃ ｇ ｒ ４℃ 预 变 性 ５ｍｉ； ｎ 然后 ９ ４℃ ５ ，６℃ ４ ，２℃ ４ ， ３ Ｏｓ５ ０ｓ７ ５ｓ 共 Ｏ个 循环 ； 后 ７ 最 ２℃延 伸 ７ｒｉ， 却 至 ４ ℃ 。 ｐｒ ４ ℃ 预 变 性 ｎ冷 ａ ａＣ ９ ５ｒｉ； 后 ９ ｎ然 ａ ４℃ 变 性 ４ ，６℃ 复 性 ４ ，２℃ 延 伸 ４ ， ５ｓ ５ ０ｓ７ ０Ｓ共 ３ Ｏ个 循 环 ； 后 ７ 最 ２℃ 延 伸 ７ｍｉ ， 却 至 ４℃ 。Ｐ Ｒ 引 物 序 列 ｎ冷 Ｃ 见表 １ 。取 ６ Ｌ 扩 增 产 物 与 １ Ｌ ６ 上 样 缓 冲 液 混 匀 ， × 于
ｌ Ｍａ ｉ Ｍｅ ｉａ， ９ ９，０ １ ９ — Ｏ ． １ ｘｍ ｄｃ ｌ１ ９ ２ （ ）：１ １ １ Ｊ．
种 ， 中主 要 的有 如 下 ３ ：１ 编 码 ＤＮ 旋 转 酶 （ ｇ ｒ 和 其 种 （） Ａ 由 ｙＡ
ｇ ｒ 基因编码） ｙＢ 和拓 扑 异构 酶 Ｉ（ ｐ ｒ 和 ｐ ｒ 基 因 编 码 ） 由 ａＣ ａＥ 的基 因发 生 突 变 。（ ） 的通 透 性 降低 。（ ） 动 外 排 系 统 功 ２膜 ３主
本 文 对 重 症 监 护 病 房 （ ｔｎ ｉ ａｅｕ ｉ Ｉ Ｕ） 临 床 各 ｉ ｅ ｓ ｅｃｒ ｎｔ Ｃ 和 ｎ ｖ ， 科 危 重 症 患 者 大 肠 埃 希 菌 、 炎 克 雷 伯 菌 分 离 菌 株 的 耐 药 情 肺
况 ， 药 菌 株 喹 诺 酮 类 耐药 基 因携 带 状 况 ， 是 否 为 产 超 广 谱 耐 及 Ｂ内酰 胺 酶 （ Ｓ Ｌ ） 株 进 行 检 测 分 析 ， 指 导 临 床 合 理 应 用 Ｅ Ｂ ｓ菌 为
显相关性 。
参 考 文 献
［］ 陈 萍 ， 丁 ， 志 海 ． 超 广 谱 Ｂ内酰 胺 酶 菌 医 院 感 染 的 １ 刘 余 产 一 危 险 因 素 Ｌ］ 中华 医 院感 染 杂 志 ，０ ３ １ （ ） ４ ６４ ７ Ｊ． ２０ ，３ ５ ：７ —７ ． ［］ 赵 汝 霞 ， 亦 鸣 ， 在 春 ． 诺 酮 类 药 物 的 研 究 进 展 ［］ ２ 虞 邓 喹 Ｊ． 临 床 肺 科 杂 志 ，０ ０ １ （ ２ ：９ ９１ ７ ． ２ １ ，５ １） １６— ７０ ［］ Ｔ ｌ ｔｏ Ｓ Ｂｏ ｄａ Ｍ ． ｔｕｔｒ－ｃｉｉ －ｕ ｃｉ ｌ ３ ｉｏｓｎＧ ， ｌｎ ｅｕＪ Ｓｒｃｕｅａｔ ｔ ｆｎ ｔ ｎａ— ｌ ｖｙ ｏ
续 表 ２ 产 Ｅ Ｂ ｓ菌株 与 不 产 Ｅ Ｂ ｓ 株 对 １ 种 抗 菌 药 耐药 率 ＳＬ ＳＬ 菌 ７
大 肠 埃 希 菌
基 因
肺 炎 克 雷伯 菌
Ｐ 产 ＥＢ ｓ Ｓ Ｌ 株 非产 Ｅ Ｂ ｓ Ｓ Ｌ 株 Ｐ
产 ＥＢ ｓ Ｓ Ｌ 株
非产 Ｅ Ｂ ｓ Ｓ Ｌ 株
３ 讨
抗 菌 药 物 、 效 预 防和 控 制 耐 药 细菌 感染 提供 科 学 依 据 。 有
１ 资 料 与 方 法
１ １ 标 本 来 源 ２ ０ ． ０ ９年 ９月 至 ２ １ ０ ０年 ５月 自菖县 中 医 院 、 莒 县 人 民 医 院 和 青 岛 大 学 医学 院 附 属 医 院 检 验 科 细 菌 室 收 集 临 床 分 离 菌 株 ， 述 标 本 取 自两 地 重症 监 护 室 和 临 床 各 科 危 重 症 上
刘 明霞 （ 岛大 学 医学院微 生物教 研 室／ 青 工作 单位 ： 东省青 岛市胸科 医院 ２ ６ ４ ） 山 ６ ０ ３
【 键 词 】 大肠 埃 希 菌 ； 肺 炎 克 雷 伯 茵 ； 喹 诺 酮 类 耐 药基 因 ； 超 广谱 ８ 内酰 胺 酶 关 一 Ｄ ： ０ ３ ６ ／．ｓｎ １ ７ —４ ５ ２ １ ． ５ ０ ８ 文 献 标 志码 ： ＯＩ １ ． ９ ９ ｊ ｉ ． ６ ２ ９ ５ ． ０ １ １ ． ６ ｓ Ｂ 文 章 编 号 ： ６ ２９ ５ （ ０ １ １ — ９ ８０ １ ７～４ ５２ １ ）５１ ０—２
大肠 埃 希 菌 、 炎 克 雷 伯 菌及 鲍 曼 不 动 杆 菌 都 是 临 床 上 常 肺 见 的病 原 菌 ， 为 革 兰 阴性 菌 。近 年 来 由于 抗 生 素 的不 合 理 应 均 用 ， 致 这 些 临 床 常 见 菌 耐 药 情 况 严 重 。 产 生 Ｅ Ｂ ｓ 导 致 导 ＳＬ 是 肠 杆 菌 科 细 菌 对 第 三 代 头 孢 菌 素 耐 药 的 最 常 见 机 制 。Ｅ Ｂ ｓ Ｓ Ｌ 尤其在肺炎克 雷伯 菌 和大肠 埃 希菌最 为 多见 ， Ｓ Ｌ Ｅ Ｂ ｓ由 质 粒 介 导 ， 在 同 种 属 甚 至 不 同种 属 细 菌 间 传 递 ， 成 对 多 种 抗 菌 易 造
能增强 ＿。 ５ ］
［］ 王茜． ６ ４ ２ ５例 Ｉ Ｕ 患 者 病 原 菌 菌 谱 和 耐 药 性 分 析 临 床 研 Ｃ 究 ［］ 临 床 和 实 验 医学 杂 志 ，０ ０ ９ １ ） １０ —１ ２ Ｊ． ２ １ ，（４ ：１ １１０ ． ［ ］ 蒋 杰 ． Ｅ Ｂ Ｓ大 肠 埃 希 菌 对 氟 哇 诺 酮 类 的 耐 药 机 制 研 ５ 产 ＳＬ
菌 和 产 Ｅ Ｂ ｓ 炎 克 雷 伯 菌 对 抗 生 素 的 耐 药 性 普 遍 高 于 不 产 ＳＬ肺
Ｅ Ｂ ｓ 肠 埃 希 菌 和不 产 Ｅ Ｂ ｓ 炎 克 雷 伯 菌 ， 表 ２ ＳＬ 大 ＳＬ 肺 见 。 ２ ２ 菌 株 耐 药 基 因分 析 ． 产 Ｅ Ｂ ｓ大肠 埃 希 菌 、 炎 克 雷 伯 ＳＬ 肺
菌 临床 分 离 菌 株 与 不 产 生 Ｅ Ｂ ｓ 肠 埃 希 菌 、 炎 克 雷 伯 菌 ＳＬ 大 肺
临 床 分 离 菌 株 比较 ， 耐药 基 因 ｐｒ 和 ｇ ｒ 的 检 出率 均 无 显 著 ａＣ ｙＡ
性 差 异 ， 表 ３ 见 。
２ ／ 或 １ ／ ０ｇ Ｌ ２ｇ Ｌ琼脂 糖 凝 胶 电 泳 ， Ｃ 产 物 长 度 大 于 ５ ０ｂ ＰＲ ０ ｐ
２ 结 果
２ １ 菌 株 鉴 定 结 果 及 耐 药 率 分 析 （ ） 定 出大 肠 埃 希 菌 ８ ． １鉴 ８
株 ， 炎克 雷伯 菌 ５ 肺 ７株 ； 中 喹 诺 酮 类 药 物 耐 药 菌 株 分 别 为 其
７ Ｏ株 、２株 ； 药 菌 株 中 有 ５ ３ 耐 ７例 为 产 Ｅ Ｂ ｓ大 肠 埃 希 菌 ，８ ＳＬ １ 株 为 产 Ｅ Ｂ ｓ 炎 克 雷 伯 菌 。 （） 种 细 菌 均 有 明显 的 耐 药 现 ＳＬ 肺 ２２
究 Ｅ ］ 云南 ： Ｄ． 昆明医学院 ，０ ８ ２０．
（ 稿 日期 ： ０ １０ — ０ 收 ２ １－６１ ）
分 析 以上 结 果 ， 者 认 为 ： １重 症 监 护 病 房 和 临床 各 科 危 作 （）
重 症 患 者 ２ 细 菌 分 离 菌 株 耐 药 现 象 严 重 ， 表 现 为 多 药 耐 种 且
所 有 细 菌 中都 呈 高 度 表 达 状 态 ， 码 靶 酶 的 基 因分 别 为 ｇ ｒ 编 ｙ Ａ／
ｇ ｒ ／ ａＣ ｐ ｒ 这 些 基 因 的 点 突 变 有 可 能 引 起 耐 药 ［ 。在 ｙ Ｂ ｐ ｒ ／ ａＥ， ３ ］ ｇ ｒ 和 ｐ ｒ 基 因 内 有 一 个 称 之 为 热 点 的 氟 喹 诺 酮 耐 药 决 定 ｙＡ ａＣ 区 （ Ｄ ｌ 。细 菌 对 喹 诺 酮 类 药 物 产 生 耐 药 的 机 制 可 有 多 ＱＲ Ｒ）４ ］
药 物 的耐 药 ［ 。喹 诺 酮 类 药 物 的 抗 菌 机 制 主 要 是 抑 制 细 菌 体 】 ］ 内的 Ｄ ＮＡ 回 旋 酶 （ 称 拓 扑 异 构 酶 Ⅱ）的 活 性 ， 致 细 菌 死 又 导
亡 。
有 其 他 喹 诺 酮 类 耐 药 机 制 存 在 。 （） ３ 大肠 埃 希 菌 和肺 炎 克雷 伯 临 床 分 离 株 中喹 诺 酮 类 耐 药 基 因 的存 在 与 Ｅ Ｂ ｓ的产 生 无 明 ＳＬ
ｕ ｔ ｎ ｏ ｈ １ｏ ｏ ｕ ｎ ｌ ｎ ｓ Ｉ ｏ ｉｌｘ ｅｎ ｉ ａ ｔ ｅ ａ ｉ ｆｔ ｅ ｆｕ ｒ ｑ ｉｏ ｏ ｅ ． ｎ Ｍ ｘｆｏ ａ ｉ ｎ Ｐｒ ｃ ｉ ｏ ｃ
Ｄ ＮＡ 回旋 酶 和 拓 扑 异 构 酶 Ⅳ 是 细 菌 体 内 最 基 本 的 酶 ， 在
表 ２ 产ＥＢ ｓ Ｓ Ｌ 菌株 与 不 产 Ｅ Ｂ ｓ 株 对 １ 种 抗 菌 药 物 耐 药 率 ＳＬ 菌 ７
检 验 医 学 与 临床 ２ １ Ｏ １年 ８月 第 ８卷 第 １ ５期 Ｉ ｂＭｅ ｌ ， ｇ ｓ ２ １ ， ｏ． ， ． ５ ｄＣｉ Ａｕ ｕｔ ０ １ Ｖ １８ Ｎｏ １ ａ ｎ
象 ， 于 喹 诺 酮 类 药 物 的 耐 药 情 况 ， 大 肠 埃 希 菌 最 严 重 ， 次 对 以 其 为 肺 炎 克 雷 伯 菌 ， 表 ２ （ ） 产 Ｅ Ｂ ｓ临 床 分 离 菌 株 与 见 。 ３将 ＳＬ
Ｅ Ｂ ｓ阴性 菌 株 耐 药 特 点 进 行 比 较 ， 现 产 Ｅ Ｂ ｓ大 肠 埃 希 ＳＬ 发 ＳＬ
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ｌＯ ・ ９８
检 验 医学 与 临 床 ２ １ ０ １年 ８月 第 ８卷 第 １ ５期
Ｌ ｂＭｅ ｌ ， ｇ ｓ ２ １ ， １８ Ｎｏ １ ａ ｄＣｉ Ａｕ ｕ ｔ ０ １ Ｖｏ． ， ． ５ ｎ
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基层园地 ・
危 重 患 者 常见 感 染 细 菌 耐 药 性 和 耐药 基 因的检 测 及 分 析