(整理)20 生物化学实验--磷钨酸-镁沉淀法测定血清高密度脂蛋白胆固醇含量.

磷钨酸 - 镁沉淀法测定血清高密度脂蛋白胆固醇含

量

【目的】

1 ．掌握磷钨酸 - 镁沉淀法测定血清高密度脂蛋白胆固醇含量的实验原理及操作方法。

2 ．了解测定血清高密度脂蛋白胆固醇含量的临床意义。

【原理】

血清中的脂蛋白可与聚阴离子及二价金属离子形成不溶性复合物，这种复合物形成的难易程度与脂蛋白分子中蛋白质 / 脂类的比例有关，比值愈小、脂类含量愈高的脂蛋白愈易沉淀，选择适当浓度的磷钨酸钠 - 镁溶液可将 CM 、 VLDL 和LDL 沉淀，离心后上清液中仅存有 HDL ，用“ 邻苯二甲醛 - 乙酸 - 硫酸” 显色法与同样处理过胆固醇标准液进行比色后，求得血清中 HDL-ch 的含量。

【器材】

1 ． 72

2 型分光光度计

2 ．离心机和离心管

3 ．中号试管

4 ．刻度吸量管

5 ．微量移液器

【试剂】

1 ．磷钨酸钠 - 镁溶液

称取磷钨酸 4g 溶于 50ml 蒸馏水中，然后加入 1mol/LNaOH16ml ，混匀后再加蒸馏水至 100ml ，调至 pH 为 7.6 。取此液 40ml ，加 2mol/LMgCl 2 10ml ，加入生理盐水至 100ml 。

2 ．邻苯二甲醛溶液

（ 1 ）储存液（ 0.1g /dl ）：称取邻苯二甲醛 100mg 溶于 100ml 冰乙酸中，置棕色瓶内保存。

（ 2 ）应用液（ 5mg/dl ）：取储存液 50ml 加无水乙醇及乙酸乙酯各 20ml ，混匀后加冰乙酸至 1000ml 。置棕色瓶内。

3 ．浓硫酸（A·R ）

4 ．生理盐水

5 ．胆固醇标准液（ 40mg/dl ）

称取胆固醇 40mg 溶于 100ml 冰乙酸中。

【操作】

1 ． HDL 的分离

取离心管 1 支（9× 70mm ），加入 0.2ml 血清及 0.05ml 磷钨酸钠 - 镁溶液，混匀后于室温放置 10 分钟， 2500r/min 离心 10 分钟，此时 CM 、 LDL 、VLDL 被沉淀，而上清液中只含有 HDL 。

2 ． HDL-ch 含量的测定

将各管液混匀后，于 550nm 波长处，以空白管调 0 ，进行比色，分别读取并记录各管吸光度值。 【计算】

血清 HDL-ch （ mg/dl ）＝

血清 HDL-ch （ mmol/L ） ＝

正常值： 45 ～ 90mg/dl 或 1.17 ～ 2.33mmol/L 【注意事项】

1 ．离心所得上清液必须清亮透明，不能混有细微沉淀颗粒，否则需要重新离心。

2 ．加浓硫酸时需将试管斜置，沿管壁加入，注意安全。

3 ．显色稳定时间在 1 小时左右，所以要控制好实验时间。

4 ．本法测定正常值为 4

5 ～ 90mg/dl 或 1.17 ～ 2.33mmol/L 。 【思考题】

1 ．磷钨酸 - 镁沉淀法测定血清 HDL-ch 含量的实验原理是什么？操作过程中应特别注意什么？为什么？

2 ．测定血清 HDL-ch 含量有何临床意义？为什么称 HDL 为对健康有益的脂蛋白？