基因治疗(genePPT课件

5.靶细胞应有较长的寿命 基因治疗、特别是某些单基因
遗传缺陷性疾病的基因治疗，最终 目标是要求外源基因长期、稳定的 表达，直至终生。
（三）基因载体和基因转移系统 目前使用的基因载体有病毒载体
和非病毒载体。 1.非病毒介导的基因转移
物理方法 • 显微注射法 •电穿孔法 •直接注射法和微粒子轰击法
化学方法 • DNA-磷酸钙共沉淀法 • 多聚阳离子-DNA复合物法 • 脂质体-DNA复合物法
体内法是将外源基因直接或通过基 因转移系统导入体内相关组织细胞， 并在其中表达。导入体内之后必须进 入靶细胞，有效表达并达到治疗目的。
三 基因治疗的总体策略 基因治疗是通过在适当的靶细胞
中有效表达重组目的基因片段而实 现的。目前设计基因治疗策略的总 体原则是：
1.直接补替缺陷的基因； 2.抑制非正常的基因产物表达； 3.以间接方式调节机体本身免疫系
2.靶细胞应容易取出和移植 基因治疗常规途径：将靶细胞从
体内取出，经基因转化后再移植回人 体内。这就要求靶细胞容易从体内取 出和植回人体。最容易取出和移植的 细胞当属血液系统的细胞。
3.靶细胞容易在体外培养 4wenku.baidu.com靶细胞容易实现基因转化
将目的基因转移到靶细胞的手 段主要有物理、化学、融合及病 毒载体四大类。
二 基因治疗分类： 1.目的基因导入体内的方式
体外途径(ex vivo)——间接法，
回输法
体内途径(in vivo)——直接法
2.靶细胞 体细胞：疾病相关细胞，免疫系统
细胞，干细胞 生殖细胞：严格禁止
间接法是指先将合适的靶细胞从 体内取出，在体外扩增，并将外源 基因导入细胞内使其高效表达，然 后将这种基因修饰过的靶细胞回输 病人体内，使外源基因在体内表达， 从而达到治疗目的。
9.特异性细胞杀伤性基因治疗
利用DNA重组技术构建以特异性 杀伤靶细胞为目标的导弹。具有导向 性和杀伤性。
四.基因治疗的基本程序 （一）获得目的基因
要进行基因治疗，必须首先获得目 的基因并对其表达调控进行详细研究。 目的基因来源有多种，主要包括：含目 的基因的供体细胞的基因组DNA分离、 预先分离克隆的基因、PCR扩增的基因 及人工合成的基因。
5.调控性基因治疗 通过导入编码调控蛋白的基
因以治疗基因表达异常的疾病。 如：以野生型P53基因治疗肺癌 或急性白血病。
6.应用“自杀基因”的基因治疗 也称活化前体药物性基因治疗。
某些病毒或细菌产生的酶能将对人 体无毒或低毒的药物前体，在人体 细胞内一系列酶的催化下转变为细 胞毒性物质，从而导致细胞死亡。
至于传染病，是由外源病原体如 病毒、细菌及其它微生物引起的疾病， 而这些病原体是通过它们的遗传物质 及其表达产物作用于人体而致病。同 时，这些病原体的遗传物质还可以在 人体内不断复制。
所以，人的疾病的发生，都是人细 胞本身的基因改变或由外源病原体的基 因及产物与人体相互作用的最后结果。 为此，长期以来科学家们想象人类能否 最终依靠遗传物质，无论是人本身的或 外源的，来治疗疾病，包括纠正人自身 基因的结构或功能上的错乱，阻止病变 的进展，杀灭病变的细胞或抑制外源病 原体遗传物质的复制，从而达到治疗的 目的。
融合法：通过原生质球相互融 合的方法，将目的基因导入靶细 胞。
基因治疗（gene therapy）
主要讲授内容：
一 概述
二 基因治疗分类
三 基因治疗的总体策略 四 基因治疗的基本程序 五 基因治疗应用（心血管疾病） 六 展望
一．引言：
人类疾病，除单基因遗传病外，许多 常见疾病如恶性肿瘤、高血压、糖尿病、 冠心病等的发生，都是环境因子如化学 物质、病毒或其它微生物、营养，以及 体内的各种因素，包括精神因素、激素 或中间产物等内外因素作用于人体基因 的最后结果。
3.基因补偿性治疗
基因补偿性治疗指将目的基因导入 病变细胞或其它细胞，不去除异常基 因，而是通过目的基因的非定点整合， 使其表达产物补偿缺陷基因的功能或 使原有的功能得以加强。目前基因治 疗多采用此种策略。
4.基因失活性治疗
基因失活性早期一般指反义核酸 技术。它将特定的反义核酸，包括 反义RNA、反义DNA和核酶导入 细胞，在翻译和转录水平阻止某些 基因的异常表达，以达到治疗疾病 的目的。RNAi、肽核酸、基因敲 除。
定义 把基因转移到患者体内，使其发
挥作用，以达到治疗疾病目的的技 术称为基因治疗(Gene Therapy)。
基因治疗自Anderson于1990年进 行了第一例应用腺苷脱氨酶基因 （ADA），经反转录病毒导入人体自身 T淋巴细胞，经扩增后输回患儿体内，获 得了成功。患儿5年后体内10%造血细 胞ADA基因呈阳性，除了还需应用部分 剂量的ADA蛋白外，其他体征正常。这 一成功标记着基因治疗的时代已经开始。
统的抗病功能； 4.利用外源基因对病变细胞造成特
异性杀伤。
1.基因替代和基因矫正治疗 基因替代是指正常基因原位替代
缺陷基因（或变异基因）。基因矫 正是指将致病基因的异常碱基序列 进行纠正，而正常序列部分予以保 留。
2.代偿性基因治疗 通过对有代偿功能的基因的
正调控，开启其关闭状态来代偿 功能异常的基因。例如，以某些 作用剂提高珠蛋白基因的表达以 治疗ß地中海贫血。
（二）靶细胞的选择 已被应用的靶细胞有淋巴细胞、
造血细胞、上皮细胞、角质细胞、 成纤维细胞、肝细胞、肌细胞及肿 瘤细胞。
1.发病器官及位置。 可以选择病变本身器官的细胞，也可
以选择病变器官以外的细胞来作为基因 治疗的靶细胞。例如：在肝脏病的基因 治疗中，可以选择肝细胞作为基因治疗 的靶细胞；在肿瘤基因治疗中，可选择 肿瘤组织侵润的淋巴细胞或肿瘤细胞本 身。
7.免疫修饰性基因治疗 免疫修饰性基因治疗即导入能
使机体产生抗病毒或抗肿瘤免疫 力的基因以达到治疗目的。例如： B7共刺激分子基因及各种淋巴细 胞因子基因的导入和表达，直接 注入抗原基因等。
8.化疗保护性基因治疗 向正常细胞内导入单相或多相细胞
毒性药物的抗性基因，使得正常细胞 耐受化疗药物的能力大大提高。如： 导入多药耐药基因（MDR），可使 正常细胞获得广泛的化疗药物耐受性。