开题报告

一、选题依据
垂体腺瘤(Pituitary Adenomas)是神经-内分泌系 统的常见疾病，发病率约为1／10万，但生前 并无任何表现而尸检时才发现有垂体腺瘤者并 非少见，约11％；垂体腺瘤发病率约占颅内肿 瘤的10％-15％。垂体腺瘤属于良性肿瘤，但是 侵袭性垂体腺瘤(Invasive Pituitary Adenomas， IPA)的生物活性介于良性和恶性肿瘤之间，具 有恶性肿瘤的某些特性。侵袭性垂体腺瘤易向 周围呈侵袭性生长，且临床演变急剧，易复发， 治疗困难，而倍受关注。垂体腺瘤的发病机制 尚不完全清楚。
七、已具备的实验条件
1.本院为大型综合性教学医院，有充足且 完善的病历资料和病理资料； 2.本院的泌外研究所、病理科具备实验所 需的所有实验设施; 3. 主要试剂： 1）、FAK和MMP-9免疫组化一抗均 可从试剂公司购买。 2）、二步法试剂盒。
八、研究计划及预期研究进展
2008年3月――2008年7月 查阅相关 文献，撰写综述。 2008年8月――2009年4月 标本收集， 购买实验所需试剂和部分实验器材,做好 预备实验工作。 2009年5月――2009年9月 实验实施 阶段。 2009年10月――2010年5月 收集整理 资料，分析结果，写出研究报告，结果 以论文形式发表，申请答辩。
（二）实验方法及步骤： 实验方法及步骤：
1.收集2007年8月至2009年6月期间本院侵 1. 袭性垂体腺瘤及非侵袭性垂体腺瘤的手 术标本、进行石蜡包埋，待收集完全后 统一进行石蜡切片。 2.常规脱蜡冲洗。 2. 3.每张切片都进行HE染色，显微镜下观察 3. 挑选合适的切片。
4.运用二步法免疫组化方法测量FAK和MMP-9在侵 袭性垂体腺瘤及非侵袭性垂体腺瘤中的表达情 况，在400倍光镜下随机不重复选5个视野，由 病理科老师审核，得出阳性细胞率，即为本实 验计量资料。 5.统计分析：应用SPSS软件(13.0版本)进行统计 5. 学分析。对侵袭性与非侵袭性组间数据进行四 格表χ2检验分析，FAK和MMP-9表达之间的相 关关系采用Spearman相关分析。P<0．05为差 异有统计学意义。
（三）拟解决的关键问题
多位病理老师对免疫组化玻片图像进行 审核分析得出计量资料。
三、研究方法，步骤，技术 研究方法，步骤， 路线
（一）研究材料： 研究材料： 选择2007年8月至 月至2009年6月期间在 选择 年 月至 年 月期间在 南昌大学第一附属医院住院手术治 疗的垂体腺瘤患者。试验分两组： 疗的垂体腺瘤患者。试验分两组： 侵袭性垂体腺瘤组27例 侵袭性垂体腺瘤组 例；非侵袭性 垂体腺瘤组23例 垂体腺瘤组 例。
THANK YOU!!
侵袭性垂体腺瘤的判断标准
结合Wilson改良的Hardy 分类法及Knosp 分级、 分期标准，判断垂体腺瘤侵袭性。本研究中将 Wilson改良的Hardy分类法III～IV级或C、D、 E期和／或Knosp2级以上作为垂体腺瘤侵袭性 的判断标准。 术前影像学改变，CT及MRI可见海绵窦、鞍旁 及下丘脑等邻近结构的破坏。 术中所取鞍底骨质、鞍底硬膜经病理学检查证 实有肿瘤细胞侵犯，可确定该肿瘤为侵袭性。 术中见鞍底骨质及硬脑膜被侵袭破坏，肿瘤突 入蝶窦腔或侵入海绵窦及鞍旁。 符合以上其中之一者即可确定为侵袭性腺瘤。
九、经费预算和实验所需试剂、 经费预算和实验所需试剂、 仪器
（一）经费预算 文献检索费 ： 200元 资料复印费 ： 200元 FAK和MMP-9免疫组化一抗 ：1000元 实验操作费：2000元 论文答辩费：1000元 1000 共计：4400元 （二）实验所需的主要试剂和仪器设备 FAK 免疫组化一抗 北京中杉公司 MMP-9 免疫组化一抗 北京中杉公司 免疫组化二抗 北京中杉公司
近两年来，国内外对MMP-9在侵袭性垂 体腺瘤中的表达的研究比较火热，也逐 渐成熟，但是FAK与垂体腺瘤的研究及 文章则很少。
1992年, Schalle等分别在v-Src转染的鸡胚 细胞及正常细胞中,发现一个在整合素富 集的细胞黏附区高度磷酸化、与细胞黏 附关系密切的蛋白,于是命名为黏着斑激 酶(focal adhesion kinase,FAK)。FAK 是一 种细胞质的酪氨酸激酶，FAK基因定位 FAK 于人8q24，编码1052个氨基酸，功能区 分为三个:N-端区、激酶区和C-端区，N 端区有FERM结构域，参与细胞移动的信 号途径。
五、本研究的创新之处
是国内外第一篇研究FAK和MMP-9在垂 体腺瘤表达相关性的课题。
六、预期成果
1、FAK和MMP-9在侵袭性垂体腺瘤中的 表达有统计学意义，对垂体腺瘤的侵袭 性起到一定的作用，或与上述结论相反。 2、FAK和MMP-9在侵袭性垂体腺瘤中存 在着相关性，两者的相互作用可促进垂 体腺瘤的侵袭性发展，故通过抑制FAK 和MMP-9的表达有效地抑制肿瘤生长， 从而为垂体腺瘤的临床治疗提供一个新 的途径。
这是第一篇同时研究侵袭性垂体腺瘤中 的FAK和MMP-9含量的文章，本课题的 研究旨在进一步了解这些细胞因子在侵 袭性垂体腺瘤发病机理中所起的作用， 明确在侵袭性垂体腺瘤中细胞因子表达 是否有明显的差异及因子间是否存在着 相关性。同时，深入了解发病机理，为 探索应用药物治疗、外科治疗以及放射 治疗等提供理论基础，指导临床应用。
侵袭性垂体腺瘤组2种因子的量分 别与非侵袭性垂体腺瘤组进行四格 表χ2检验分析，得出是否有统计 学意义。 侵袭性垂体腺瘤中FAK和MMP-9的含 量进行Spearman相关分析，判断有 无相关性。
所有资料均采用SPSS 12.0 进行统计分析,计量资料以 ±S表示，P < 0.05为差异 有显著性意义。
有体外研究证实,ECM中的纤粘连蛋白具 有激活FAK分子的功能,FAK进而通过磷 酸化方式激活胞浆功能蛋白,如细胞骨架 蛋白和MMP等,从而实现癌细胞侵袭行为 中的粘附和迁移。作为FAK信号的下游 分子,MMP-9几乎能降解细胞外基质 （ECM）的所有成分。由此可见，FAK 与MMP-9在分子机制上是相关的。
四、实 验 流 程 图
侵袭性垂 体腺瘤组 和非侵袭 性垂体腺 瘤组新鲜 标本进行 石蜡包埋
石 蜡 切 片
HE染色
显微镜下肉眼观察，从两组中挑选 适合的切片
免疫组 化染色
FAK和 MMP-9在 两组中 的表达 情况
在400倍光镜下随机不重 复选5个视野，由病理老 师审核，得出阳性细胞率， 即为本实验计量资料。
二、主要研究内容，研究目 主要研究内容， 标和拟解决的关键问题
（一）研究内容
本课题拟运用二步法免疫组化方法测量 FAK和MMP-9在侵袭性垂体腺瘤及非侵袭 性垂体腺瘤组织中的表达情况，以及侵 袭性垂体腺瘤中FAK和MMP-9有无相关性。
（二）研究目标
初步探讨这2种细胞因子在侵袭性垂体腺 瘤中的作用，从而深入了解其发病机理， 为探索应用药物治疗、外科治疗以及放 射治疗侵袭性垂体腺瘤提供理论基础， 指导临床应用。
磷酸化是FAK激活的重要方式，受外界 刺激之后，SH2结构域暴露，能结合的蛋 白主要有Src家族蛋白。细胞移动是细胞 侵袭及转移的重要方式,这一过程要求黏 着斑循环与细胞骨架形成高度协调。 FAK突变的细胞因其与Src的结合受阻,细 胞丧失移动能力,即丧失侵袭及转移能力。
肿瘤侵袭及转移的另一方面是降解细胞 外基质(extracellular matrix,ECM),已有研 究显示, FAK可通过调控蛋白裂解酶降解 肿瘤周围基质。
肿瘤侵袭和转移的基本过程是肿瘤细胞 穿过ECM屏障、血管壁的基底膜,以及穿 出血管壁进入宿主周围和(或)远处组织微 环境的过程。MMP-9可以有效地降解、 破坏靠近肿瘤表面的基质和基膜,使瘤细 胞可沿着缺失的基膜向周围组织侵袭,促 进肿瘤侵袭和转移。
相关依据
已有研究显示, FAK可通过调控蛋白裂解 酶降解肿瘤周围基质,v-Src和FAK可以促 进整合素β1接触斑的形成,后者包含磷酸 化酪氨酸蛋白并可激活MMP-2和MMP-9。 转染了FAK抑制剂FRNK的人肺腺癌细胞 株A549,可降低EGF介导的细胞运动,并阻 断MMP-9的表达。
南 昌 大 学 医 学 院 2007级硕士研究生 学位) 级硕士研究生( 2007级硕士研究生(学位)论文 开 题 报 告
FAK和MMPFAK和MMP-9在垂体腺瘤中的 表wenku.baidu.com及意义
硕士研究生：程超 硕士研究生： 研究生导师： 研究生导师：张剑 教授
目
录
一、选题依据 二、主要研究内容，研究目标和拟解决的关键 主要研究内容， 主要研究内容 问题 三、研究方法，步骤，技术路线 研究方法，步骤， 四、实验流程 五、本研究的创新之处 六、预期成果 七、已具备的实验条件 八、研究计划及预期研究进展 经费预算和实验所需试剂、 九、经费预算和实验所需试剂、仪器
MMPs(Matrix Metalloproteinases, MMPs) 是一组结构相似、以ECM成分作为水解 底物并依赖Zn2+的蛋白水解酶类,它们不 仅能降解多数大分子细胞外基质( ECM), 还能激活生长因子和化学增活素。
MMP-9是MMPs家族的主要成员,是与侵 袭性关系最密切的一个因子，其作用底 物为明胶蛋白、Ⅳ和Ⅴ型胶原、蛋白聚 糖、弹性蛋白以及纤粘连蛋白等构成 ECM三维网状结构的重要成分。并能水 解维持正常内皮屏障的紧密连接蛋白、 粘附蛋白等。
细胞因子(cytokine) 是机体的各种细胞在 其生命周期中释放的一大类多肽, 其主要 功能是沟通细胞之间的联系, 促进靶细胞 的生长、繁殖和活化等, 其生物学效应是 通过靶细胞膜表面的受体而产生的。国 内外许多学者做了大量的研究，从多个 角度证实垂体腺瘤的侵袭性与以下细胞 因子有关：
1.癌基因 ：如p21、p62、垂体腺瘤转化基因 （PTTG）、碱性成纤维细胞生长因子-2 （FGF-2）、蛋白激酶C (PKC)等。 2. 抑癌基因：p53、nm23、p16、Ⅰ型多发性内 分泌腺瘤（MEN-Ⅰ）基因、PTEN蛋白等。 3.其他有关的相关因子：Ki-67抗原、表皮生长 因子（EGF）及其受体（EGFR）、增殖细胞 核抗原（PCNA）等。