建立色谱分析方法需考查的内容

建立色谱分析方法需考查的内容

建立色谱分析方法除进行色谱系统适用性试验外，还必须进行方法学的考查，包括方法的精密度、准确度、检测限、定量限、线性与定量范围等。有时还需要考查方法的专属性和耐用性。

1.精密度（precision）

是指在规定的测试条件下，同一个均匀样品，经多次进样测定所得结果之间的接近程度，反映了正常测定条件下分析方法的再现程度。含量测定和杂质定量测定应考虑方法的精密度。常用相对标准偏差来表示。

精密度分为方法精密度和仪器精密度。

重复性：在相同的条件下，由一个分析人员测定所得结果的精密度；

中间精密度：在同一个实验室，不同时间由不同分析人员用不同设备测定结果的精密度；重现性：在不同实验室由不同分析人员测定结果的精密度。

2.准确度（accuracy）

是指用该方法测定的结果与真实值或参考值接近的程度，是测量的系统误差和随机误差的综合，反映了方法所得结果对真值的接近程度。

回收率试验：在实际工作中经常用做回收率试验的方法来评价准确度，对已知标准品加入量的样品用待评定方法测定其含量作为回收量，计算回收量和加入量的百分数作为方法的回收率。测定回收率的常用方法包括模拟样品法和标准加入法两种。

3.灵敏度（sensitivity）

又称响应值或应答值，一定浓度或一定量的样品进入色谱仪器（主要是检测器）后，进样量△Q与信号强度改变△R之比，称为仪器的灵敏度（S），即

S=△Q/△R

由于灵敏度只反映仪器对样品的敏感程度，而未考虑仪器的噪声对检测的影响，因此通常都用检测限来衡量。

4.检测限（detection limit）

是指试样中被测物质能被检测出的最低量，表示为能产生确证在样品中存在的被测组分信号所需要的该分析物的最低浓度或最小量。一般表示为分析物质的浓度。

检测限是指在适当的置信概率被检出的组分最低浓度或最小量。

检测限的定义式：D＝N/S N---仪器的噪声S---仪器的灵敏度

美国国家标准局，将检测下限分为三类：

（1） 仪器检测限：相对于背景仪器检测的最小的可靠信号，通常用信噪比（S/N ）表示，

当S/N ≥3（或2）定义为仪器检测下限；

（2） 方法检测限：即某方法可检测的最小浓度。通常用外推法可求得方法的检测下限。

其方法是在低浓度范围下测试3个浓度，每个浓度水平均分别测试多次计算其标准偏差，以标准偏差－浓度用线性回归法计算或绘制回归线，然后把回归线延长外推和纵坐标的交点的标准偏差即为方法的检测限，故这里是把浓度为零时的标准偏差定义为方法检测限。

（3） 样品检测限：即相对于空白可检测的最小样本含量。定义样本检测限为3倍空白标

准偏差。从统计学的观点 ，检测限应表示为样品信号为空白样品值加上3倍空白样品信号标准差对应的样品浓度，其数学表达式为：

D=A C σ

3⨯

σ――空白溶液10次以上测定的标准差；

C ――浓度接近检出限的样品液的实际浓度；

A ――测得的样品液的信号值。

式中A/c 应为校正曲线的斜率，表示被测组分的浓度或质量改变一个单位时校正曲线上

分析信号的变化量，即灵敏度。

5. 定量限（quantitation limit ）

是指样品中被测物能被定量测定的最低量，其测定结果是定量分析应达到的准确度和精密度。

由于受到校正曲线在低浓度区域的非线性关系、试剂纯度、沾污等因素的影响，定量限一般都高于检测限，仪器方法定量限常用信噪比确定，以10倍于仪器噪声标准差时实际测得的浓度或质量表示。

6. 定量范围（range ）

即一个定量分析方法的适用范围，指分析物浓度的上、下限范围。在该定量范围内，应用本法能达到方法本身的精密度、准确度及线性等。

7. 线性（linearity ）

是指在规定的范围内，实验结果和分析浓度成正比的能力。在线性范围内可以直接应用分析方法建立的工作曲线或回归方程计算样品的浓度。