13第十三章 生化药物分析

主要包括以下内容： 1 菌种 2 发酵 3 收菌 4 菌体裂解与粗制干扰素制备 5 浓缩与纯化 6 稀释、除菌过滤 7 半成品检定 8 除菌半成品检定 9 成品检定 10规格 11保存与效期 12 冻干基因工程α1b干扰素使用说明书
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半成品和成品的检验项目包括： 鉴别： 鉴别： 分子量测定 肽图测定 等电聚集 紫外光谱扫描 外观 检查： 检查： 纯度： 1电泳纯度 2高效液相色谱纯度 pH值 水分
1）理化分析法： 理化分析法： 重量法、滴定法、 电化学法、 重量法、滴定法、 电化学法、光谱法 色谱法（ 色谱法（HPLC法） 法
例：蛋白质含量测定（ChP2005三部） 凯氏定氮法 Lowry法 双缩脲法
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2）生化分析法
酶法： 酶法：
酶活力测定法 以酶为分析对象进行分析 酶分析法 以酶为分析工具或分析试剂 的分析方法
O O
HO
CH 2 HO OH
O CH 2 HCOH CH 2 O OH O CH 2
O O
HO
O HO
CH 2 OH
O
H 2C OH
O
O CH 2 HCOH CH 2 HO O HO O O H 2C
O
H 2C
O
萄聚糖凝胶 立体网状结构图
O
O
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标准蛋白色谱图
1 2 4 5 3
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安全性检查： 安全性检查： 残余外源性DNA含量 残余IgG含量 残余工程菌蛋白含量 抗生素活性 无菌试验 热原质试验 异常毒性
含量： 含量：
效价测定：细胞病变 抑制法 蛋白含量 比活性
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本品系用从健康人白细胞中获得的α1b干扰素基因重组质粒，传染 干扰素基因重组质粒， 本品系用从健康人白细胞中获得的 干扰素基因重组质粒 大肠杆菌，使之高效表达人α1b干扰素，经高度纯化后冻干制成。用于 干扰素， 大肠杆菌，使之高效表达人 干扰素 经高度纯化后冻干制成。 治疗慢性乙型肝炎、丙型肝炎和毛细胞白血病等疾病。 治疗慢性乙型肝炎、丙型肝炎和毛细胞白血病等疾病。
人生长激素释放抑制因子 激素类及神经递质类 （Human Somatotin） 干扰素（Human Interferons） 链激酶（Streptokinase）
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5. 生化药物和基因工程药物特点
共同特点：活性强， 1）共同特点：活性强，毒副作用小 分子量大， 2）分子量大，结构确证难 3）全过程的质量控制：从原料、菌种到生产设备、 全过程的质量控制：从原料、菌种到生产设备、 的质量控制 中间体、 中间体、产品 4）生物活性检查 安全性检查：异常毒性检查、过敏物质检查、 5）安全性检查：异常毒性检查、过敏物质检查、 外源性DNA残留量、宿主菌蛋白残留量等 残留量、 外源性 残留量 效价（含量） 6）效价（含量）测定
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二、检验的程序和方法
收录于《中国药典》 中国生物制品规程》 收录于《中国药典》和《中国生物制品规程》
鉴别
杂质 检查
安全性 检查
含量（效价） 含量（效价） 测定
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1.鉴别 1.鉴别
1）理化鉴别法：UV、肽图等 理化鉴别法： 、肽图等
反应序列信息
RP-HPLC法分析重 组人胰高血糖素类 多肽－1（7－36） 肽图谱 《药物分析杂志》 2005，25(1)24-26 rhGLP-1(7-36)由30 个氨基酸组成，结 构中含2Lys、1Arg、 1Asp、3Glu
O
O
HO
O
CH 3 OH
OH
O
O
O CH 2 HCOH CH 2 OH O HO H 2C O
O HO
CH 2 OH
O O
O CH 2 HCOH
O O CH 2 HCOH CH 2 O O HO OH O CH 2
O CH 2 OH HCOH CH 2 O O HO OH O CH 2
CH 2 HO OH
SDS-PAGE
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2. 杂质检查
1）一般杂质：氯化物、重金属、水分等 一般杂质：氯化物、重金属、 特殊杂质： 2）特殊杂质：有关物质等
高效凝胶过滤色谱法(High Performance Gel Filter ，HPGFC）、RP-HPLC
CH 2 H 2C HO OH O CH 2 HCOH CH 2 O OH O H 2C O O HO OH O HO CH 2 OH O CH 2 O O O HO O H 2C OH O O HO H 2C HO O O O CH 2 HCOH CH 2 O O CH 2 HO O O O HO CH 2 OH O CH 2 HCOH CH 2 O OH O CH 2 O
免疫血清 其他（血液制品、组织制品等） 其他（血液制品、组织制品等） 自动免疫制品 诊断制品
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基因工程药物 biotechnology drugs
利用重组DNA等生 等生 利用重组 物技术生产的药物
分离纯化 受体细胞表达该Pr 将该基因导入受体细胞
分离或合成控制该Pr合成的基因 发现并确定有治疗作用的Pr
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3. 安全性检查
1）热原检查 2）降压物质检查 3）过敏试验 4）异常毒性试验 5）无菌试验 6）宿主细胞蛋白残留、DNA残留 宿主细胞蛋白残留、DNA残留 ELISA法 法 豚鼠、 豚鼠、大鼠存活试验 家兔法、 家兔法、鲎试剂法
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含量（效价） 4. 含量（效价）测定
第13章 生物药物分析概论 13章
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本章主要内容
生物药物种类 与特点
生物药物质量 检验的基本程 检验的基本程 序与方法
生物药物理化 测定法： 测定法：HPLC 酶法、 法、酶法、电 泳法
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一、概述
生化药物 生物制品 （生物技术药物） 生物技术药物）
6
0
4
8
12 时间(min)
1.右旋糖酐蓝 2.醛缩酶 3.血清白蛋白 4.碳酸酐酶 5.抑蛋白 右旋糖酐蓝 醛缩酶 血清白蛋白 碳酸酐酶 抑蛋白 酶肽 6.酪氨酸 酪氨酸
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重组人肿瘤坏死因子相关调亡诱导配体 rhTRAIL） （rhTRAIL）质控方法和质量标准的研究 《药物分析杂志》2005，25（3）253-257 药物分析杂志》2005，25（ 253C18柱 3.9×150mm） Synmetry 300 C18柱（3.9×150mm）
人纤维蛋白原 氨基酸、Pr类 凝血酶、胰蛋白酶 酶、辅酶类 肝素、玻璃酸 多糖类
脂类
核酸类
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生物制品biological products 生物制品
应用普通的或以基因工程、细胞工程、 应用普通的或以基因工程、细胞工程、蛋白质工 发酵工程等生物技术获得的微生物、 程、发酵工程等生物技术获得的微生物、细胞及各 种动物和人源的组织和液体等生物材料制备的药品 菌苗、疫苗、 菌苗、疫苗、类毒素
标准品
样 品
胰蛋白酶酶解 V8蛋白酶酶解
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专属性强， 专属性强，应用广泛 生化鉴别法：免疫法、酶法、 2）生化鉴别法：免疫法、酶法、电泳法等
Marker 116.0k 66.2k 45.0k 35.0k 25.0k 18.4k 14.4k Sample
免疫双扩散法
3）生物鉴别法：动物试验等 生物鉴别法：
生物药物（ 生物药物 biopharmaceu ticals）：利用 利用 生物体、 生物体、生物 组织和器官制 得的天然活性 物质及其类似 物
分类没有严 格的界限
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生化药物biochemical drugs 生化药物 动植物及微生物提取、分离的天然生物活 性物质及半合成得到生命基本物质及其衍 生物等
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重组胰岛素原的合成
胰岛素原 胰岛素原基因 mRNA 反转录酶 (A)n 胰脏 胰岛素原 mRNA 与质 粒连 接 感染 E.col i 重组质粒
cDNA
转化细菌
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基因工程药物主要类别
蛋白质多肽类： 蛋白质多肽类： 细胞因子类 酶及凝血因子类 核酸类： 核酸类： 反义寡核苷酸 等
免疫分析法
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3）生物检定法
药物对生物体或离体器官所起的生物活性
测定效价时采用参考品，体内、体 外方法测定活性，计算效价IU 同时测定蛋白含量，计算特异比 （比活性，IU/mg）
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例：冻干基因工程α1b干扰素制造及检定规程 冻干基因工程α1b干扰素制造及检定规程 α1b