新基因全长cDNA的克隆策略

• 所有的基因克隆都包括四个步骤：
• 1.产生DNA片段；
• 2.连接至载体；
• 3.转化到受体细胞扩增；
• 4.目的序列的筛选鉴别。
• 如果已知一个基因的序列，那么可以通过已知序列设计引物，然后通过PCR技术获 得目标DNA片段。
• 如果一个或多个物种的某种基因已经被分离，可以通过同源性对比找到的保守性
新基因功能研究的基本策略
随着人类基因组计划(H GP)和其它模式生物基因组计划的相继完成, 生命科学 已经进入了后基因组学时代(post genomics)。 在对基因组结构进一步了解的
同时,功能基因组学逐渐成为核心内容. 基因组序列测定的完成仅仅是基因组
计划的第一步, 更大的挑战在于如何确定基因的功能和阐述其调控的机制与 表达规律。 因而,基因功能研究已成为生命科学领域中的重大课题, 它将是21 世纪生命科学研究的重要领域. 那么,对于一个未知的新基因,如何对它制定基 因功能的研究方案从而进行全面和系统的研究是每个基因功能研究者面临的
• 转座子示踪技术可用于酵母和植物的克隆；ห้องสมุดไป่ตู้
• 基于图谱的基因克隆方法(m ap-based clo ning)依赖于遗传图谱和
物理图谱,可用来分离与已知分子标记紧密连锁的基因,包括染色
体跳查和染色体歩查；
• 硅片克隆(silico cloning),即不经过实验室工作, 将网络中的数据资
料进行整理分析和拼接,得到新基因的全长序列。
首要问题。
• 目前基因功能的基本策略： • 1 .新基因全长 cDNA的克隆策略； • 2 .通过生物信息学预测新基因的功能； • 3 .新基因的表达谱分析；
• 4 .基因功能的研究方法；
• 5 .基因编码产物相互作用蛋白的研究。
新基因全长cDNA的克隆策 略
•
在研究新基因的功能之前，首先要通过基因克隆实验得到新基因全长 cDNA序列。
序列合成探针或简并引物，通过文库筛选或PCR反应从另一个新物种中分离功能相 似的基因。
• 如果只知道某个基因的一段碱基序列,可以采用 RACE(cDNA 末端快速扩增)或反向
PCR和锚定 PCR方法克隆该基因的 cDNA全长序列;也可以将已知序列制备成探针对 cDNA文库进行筛选,获得 cDNA克隆后利用载体上的引物进行序列分析。
• 转座子是染色体上一段可移动的DNA片段，它可从染色体的一个位置跳
到另一个位置。当转座子跳跃而插入到某个功能基因时，就会引起该基 因的失活，并诱导产生突变型，而当转座子再次转座或切离这一位点时， 失活基因的功能又可得一恢复。遗传分析可确定某基因的突变是否由转 座子引起。由转座子引起的突变便可以转座子DNA为探针，从突变株的 基因组文库中钓出含该转座子的DNA片段。并获得含有部分突变株DNA序 列的克隆，进而以该DNA为探针。筛选野生型的基因组文库，最终得到 完整的基因。