核酸提取方法的研究进展
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失 。Ｍｉ ｃ ｅ 首例 提 取 出粗 糙 的 Ｄ ｅ ｈｒ ｓ ＮＡ，Ｍｉ ｃ ｅ 成 ｅ ｈｒ ｓ
被降解 。１７ 年，Ｕｒ ｈ等 ｆ首次使用异硫氰酸胍 ９７ ｌｃ ｉ ３
从总 Ｒ ＮＡ 中分 离纯 化 出 ｍＲ ＮＡ。 方法 特 点是 利 用 该
多 数 真核 细 胞 中 ｍＲ ＮＡ 的 ３端有 ｐ ｌＡ 尾 巴， 用 ’ ｏｙ 使 ｏｉｏ （Ｔ ｌ ｇ ｄ ）一 纤 维 素 亲和 层 析 法 ， 总 Ｒ Ａ 中分 离 从 Ｎ 纯 化 出 ｍＲ ＮＡ， 此 方 法 费 时 费力 。 Ｕｌｃ 但 在 ｒ ｈ研 究 的 ｉ 基 础 上 ，１７ ９９年 Ｃ ｉ ｗｉ ｈｒ ｎ等 ［发 明 了一种破 裂细胞 ｇ ４
量 的核酸 分 子 则是 核酸 分 子生 物 学试 验 中关 键 ， 提取 方 法 的灵 敏 度 、 异 性 也将 直接 关 系到 后 续试 验 的成 特
败。
胍盐 是 蛋 白强变 性 剂 ， 核酸 提 取一般 采 用 高浓度 的胍 盐 来 裂 解 细 胞 ， 使 核 蛋 白体 解 离 ， 促 同时 高 浓度 的 胍 盐 能 使 细 胞 内核 酸 酶 失 活 ， 释 放 出 的核 酸 不 使
此 设 计研 制 出 了很 多商 品化 试剂 ， Ｔ Ｋａ ａ公 司 的 如 ａ Ｒ
化两大步骤 ， 本文据此对核酸提取的研究进展进行分
析 和讨 论 。
１ 组 织细 胞裂解 方 法
基金项 目： 质检公 益性行 业科研 专项（ ０ ９ ０ ３ ） ２０ １ １２
那些 内容交 叉 重复 甚 或矛 盾 的部 分进 行 彻底 清理 ， 内 容 陈 旧的标 准 进行 更 新修 订 ， 过期 或 不适 用 的标 准进 行 作废 处理 ， 失 的标 准 加 紧 制 修 订 ， 我 国 的标 准 缺 使 制修 订工 作逐 步进入 一个 有序 状态 ， 计划进 行 。 按 参考文 献 ：
用于 Ｄ ＮＡ和 Ｒ ＮＡ 的提取 。
术 是首 次 能 特 异 性分 离 Ｒ ＮＡ 的方法 ， 还 是 存 在诸 但
多缺 点 ， 比如 耗 时长 、 率低 ， 且 由于采 用 苯酚 等毒 效 并
核 酸提 取 的 关键 在 于 组 织 细 胞 的裂 解 和 核 酸 纯
性 有 机溶 剂 ， 操作 有 一 定 的风 险 性 。 目前为 止 ， 到 虽然 在 此 基础 上 发展 出了很 多核 酸提 取技 术 ， 均没 有克 但 服 耗 时长 、 危险性 大等 诸 多弊端 。 伴 随着 生 物产 业 的 商业 化发 展 ， 多试剂 公 司依 很
膜 但 不破 坏 核苷 酸 的方 法 ， 即先 将一些 研 究者 纷 纷效仿 ， 并
巯 然 在材料 、 试剂 的应用上进行 了不断的探 索， 由此发展 和 Ｂ． 基 乙醇 中混 合 均匀 ， 后 通过 乙醇抽 提 或 氯 ＮＡ。 该技 了许 多核 酸 的生 物 分 子提 取技 术 。 如 今 ， 硫 氰 酸 化 铯 梯 度 超 速 离 心 来 分 离 纯化 细胞 中 的 Ｒ 现 从 胍 盐 一 酚 一 仿 提 取法 到柱 纯 化 技 术 ， 苯 氯 己被广 泛 地
ｌ６ ８９年 ， 士 医 师 Ｆｉ ｒ ｈＭｉ ｃｅ 首 例 成 功 瑞 ｒ ｄｉ ｅ ｈｒ ｅ ｃ ｓ 的 进 行 了核 酸 提 取 口。 初 ， 关注 于 组成 白细 胞 各 】起 他 种 蛋 白质 ， 指 出蛋 白质 是 细 胞 质 的 主 要 成分 。 在 并 但 随后 的测试 试验 中发 现 ， 当加入 酸 性 溶液 时 溶液 中生 成 一 种 沉 淀 物 ， 加 入 碱 性 溶 液 时 沉 淀 继 而 溶 解 消 再
［】马贵平 ， １ 史喜 菊， 李冰玲 ， ． 等 多种 动物共 患传染 病诊 断的 国家标准 、 行业标准与 国际标 准的 比较及适用性评估 ［ ． Ｊ 中国 ］
动物检疫 ，２ １ ，２ １ ） ６６ ． ０ ０ ７（ ０ ：６ ．９
２ １ ， ２ （ １ ： ６ ． ７ ００ ７ １ ） ４６ ．
核酸 的分子 生物 学 技术 是 进 行病 原微 生 物检 测 ，
组 织 细 胞 裂解 提 取 核 酸 的方 法主 要 包 括 胍 盐 裂
物种鉴定， 物种起源、 多样性评估及其亲缘关系、 系统 解 法 、 碱裂 解法 、Ｃ Ａ Ｔ Ｂ裂解 法 以及 酚抽 提法 等 。 进 化 等 常用 研 究手 段 之 一 『。 而 ， 否提 取 出 高质 １ １ 胍盐 裂解 法 】然 ］ 能 ．
［］Ｗｏｌ Ｏ ｇｎｚｔ ｎｆｒ ｎｍａ Ｈｅｌ （ Ｅ）． ａｕ ｌ ｆ ３ ｒ ｒａ ｉａｉ ｏ ｉ ｌ ａｔ ＯＩ Ｍ ｎ ａ ｏ ｄ ｏ Ａ ｈ Ｄｉ ｎ ｓ ｃＴｓ ｎ ａｃｎ ｓ ｒ ｅｒｓ ｉ ｎｍａｓ ０ Ｍ／ ａ ｏｔ ｅｔ ａ ｄＶ ｃｉｅ ｒ ｔａ Ａ ｉ ｌ ｇ ｉ ｓ ｏ ｆ Ｔ ｅｒｌ ，２ １ ［ １ ＯＬ ． ｔ： ／ ｗｗｏｅｎ／ ｔｍａｉｎｌ ｔｎ ａｄｓｔｎ ，ｒｅｔａ－ ］ｔ ｈｐ ／ ｗ ．ｉｉｔｎｅ ｔ ａ— ａ ｄｒ—ｅ ｉｇｔ ｒｓ ｉ ． ｉ ｏ ｓ ｔ ｅ ｒｌ
胍 盐裂解法 、 碱裂解 法、Ｃ Ａ Ｔ Ｂ裂解法 以及 酚抽 提法等 ， 和纯化 采用的 固相基质 ： 二氧化硅基质 、 磁珠 和 阴离子 交换介质 。 阐明 了 各种 方法的技 术原 理以及优缺 点， 以及各技 术在 实践 中的应用发展 情况 。
关键 字：Ｄ ＮＡ；Ｒ ＮＡ； 提取 ； 纯化 ； 进展 中图分类号 ：Ｑ５ 文献标识码：Ｂ 文章编 号：１０ －４ Ｘ （ ０ ）１—０ ５０ ２ ０ ５９ ４ ２ １ １ ２０ ７ －４
中 动 检 ０ 年 ２ 第２ 国 物 疫２１ 第 ８ ｌ １ 卷 期
熊
－ ７ ５
核酸提 取方法 的研究进展
张 丽 ， 莲茹 ， 绍 强 杨 吴
（． １内蒙古农业大学兽 医学院， 内蒙古呼和浩特 ０ ０ １ ；２ 中国检验检疫科学研究院， １０ ８ ． 北京 １０２ ） ０ ０９
摘 要 ：系统详 细的阐述 了核 酸提取 过程 中针对 细胞 裂解和核酸纯化 两大关键 步骤的各种研 究方法 ， 包括对组 织细胞 裂解 的
被降解 。１７ 年，Ｕｒ ｈ等 ｆ首次使用异硫氰酸胍 ９７ ｌｃ ｉ ３
从总 Ｒ ＮＡ 中分 离纯 化 出 ｍＲ ＮＡ。 方法 特 点是 利 用 该
多 数 真核 细 胞 中 ｍＲ ＮＡ 的 ３端有 ｐ ｌＡ 尾 巴， 用 ’ ｏｙ 使 ｏｉｏ （Ｔ ｌ ｇ ｄ ）一 纤 维 素 亲和 层 析 法 ， 总 Ｒ Ａ 中分 离 从 Ｎ 纯 化 出 ｍＲ ＮＡ， 此 方 法 费 时 费力 。 Ｕｌｃ 但 在 ｒ ｈ研 究 的 ｉ 基 础 上 ，１７ ９９年 Ｃ ｉ ｗｉ ｈｒ ｎ等 ［发 明 了一种破 裂细胞 ｇ ４
量 的核酸 分 子 则是 核酸 分 子生 物 学试 验 中关 键 ， 提取 方 法 的灵 敏 度 、 异 性 也将 直接 关 系到 后 续试 验 的成 特
败。
胍盐 是 蛋 白强变 性 剂 ， 核酸 提 取一般 采 用 高浓度 的胍 盐 来 裂 解 细 胞 ， 使 核 蛋 白体 解 离 ， 促 同时 高 浓度 的 胍 盐 能 使 细 胞 内核 酸 酶 失 活 ， 释 放 出 的核 酸 不 使
此 设 计研 制 出 了很 多商 品化 试剂 ， Ｔ Ｋａ ａ公 司 的 如 ａ Ｒ
化两大步骤 ， 本文据此对核酸提取的研究进展进行分
析 和讨 论 。
１ 组 织细 胞裂解 方 法
基金项 目： 质检公 益性行 业科研 专项（ ０ ９ ０ ３ ） ２０ １ １２
那些 内容交 叉 重复 甚 或矛 盾 的部 分进 行 彻底 清理 ， 内 容 陈 旧的标 准 进行 更 新修 订 ， 过期 或 不适 用 的标 准进 行 作废 处理 ， 失 的标 准 加 紧 制 修 订 ， 我 国 的标 准 缺 使 制修 订工 作逐 步进入 一个 有序 状态 ， 计划进 行 。 按 参考文 献 ：
用于 Ｄ ＮＡ和 Ｒ ＮＡ 的提取 。
术 是首 次 能 特 异 性分 离 Ｒ ＮＡ 的方法 ， 还 是 存 在诸 但
多缺 点 ， 比如 耗 时长 、 率低 ， 且 由于采 用 苯酚 等毒 效 并
核 酸提 取 的 关键 在 于 组 织 细 胞 的裂 解 和 核 酸 纯
性 有 机溶 剂 ， 操作 有 一 定 的风 险 性 。 目前为 止 ， 到 虽然 在 此 基础 上 发展 出了很 多核 酸提 取技 术 ， 均没 有克 但 服 耗 时长 、 危险性 大等 诸 多弊端 。 伴 随着 生 物产 业 的 商业 化发 展 ， 多试剂 公 司依 很
膜 但 不破 坏 核苷 酸 的方 法 ， 即先 将一些 研 究者 纷 纷效仿 ， 并
巯 然 在材料 、 试剂 的应用上进行 了不断的探 索， 由此发展 和 Ｂ． 基 乙醇 中混 合 均匀 ， 后 通过 乙醇抽 提 或 氯 ＮＡ。 该技 了许 多核 酸 的生 物 分 子提 取技 术 。 如 今 ， 硫 氰 酸 化 铯 梯 度 超 速 离 心 来 分 离 纯化 细胞 中 的 Ｒ 现 从 胍 盐 一 酚 一 仿 提 取法 到柱 纯 化 技 术 ， 苯 氯 己被广 泛 地
ｌ６ ８９年 ， 士 医 师 Ｆｉ ｒ ｈＭｉ ｃｅ 首 例 成 功 瑞 ｒ ｄｉ ｅ ｈｒ ｅ ｃ ｓ 的 进 行 了核 酸 提 取 口。 初 ， 关注 于 组成 白细 胞 各 】起 他 种 蛋 白质 ， 指 出蛋 白质 是 细 胞 质 的 主 要 成分 。 在 并 但 随后 的测试 试验 中发 现 ， 当加入 酸 性 溶液 时 溶液 中生 成 一 种 沉 淀 物 ， 加 入 碱 性 溶 液 时 沉 淀 继 而 溶 解 消 再
［】马贵平 ， １ 史喜 菊， 李冰玲 ， ． 等 多种 动物共 患传染 病诊 断的 国家标准 、 行业标准与 国际标 准的 比较及适用性评估 ［ ． Ｊ 中国 ］
动物检疫 ，２ １ ，２ １ ） ６６ ． ０ ０ ７（ ０ ：６ ．９
２ １ ， ２ （ １ ： ６ ． ７ ００ ７ １ ） ４６ ．
核酸 的分子 生物 学 技术 是 进 行病 原微 生 物检 测 ，
组 织 细 胞 裂解 提 取 核 酸 的方 法主 要 包 括 胍 盐 裂
物种鉴定， 物种起源、 多样性评估及其亲缘关系、 系统 解 法 、 碱裂 解法 、Ｃ Ａ Ｔ Ｂ裂解 法 以及 酚抽 提法 等 。 进 化 等 常用 研 究手 段 之 一 『。 而 ， 否提 取 出 高质 １ １ 胍盐 裂解 法 】然 ］ 能 ．
［］Ｗｏｌ Ｏ ｇｎｚｔ ｎｆｒ ｎｍａ Ｈｅｌ （ Ｅ）． ａｕ ｌ ｆ ３ ｒ ｒａ ｉａｉ ｏ ｉ ｌ ａｔ ＯＩ Ｍ ｎ ａ ｏ ｄ ｏ Ａ ｈ Ｄｉ ｎ ｓ ｃＴｓ ｎ ａｃｎ ｓ ｒ ｅｒｓ ｉ ｎｍａｓ ０ Ｍ／ ａ ｏｔ ｅｔ ａ ｄＶ ｃｉｅ ｒ ｔａ Ａ ｉ ｌ ｇ ｉ ｓ ｏ ｆ Ｔ ｅｒｌ ，２ １ ［ １ ＯＬ ． ｔ： ／ ｗｗｏｅｎ／ ｔｍａｉｎｌ ｔｎ ａｄｓｔｎ ，ｒｅｔａ－ ］ｔ ｈｐ ／ ｗ ．ｉｉｔｎｅ ｔ ａ— ａ ｄｒ—ｅ ｉｇｔ ｒｓ ｉ ． ｉ ｏ ｓ ｔ ｅ ｒｌ
胍 盐裂解法 、 碱裂解 法、Ｃ Ａ Ｔ Ｂ裂解法 以及 酚抽 提法等 ， 和纯化 采用的 固相基质 ： 二氧化硅基质 、 磁珠 和 阴离子 交换介质 。 阐明 了 各种 方法的技 术原 理以及优缺 点， 以及各技 术在 实践 中的应用发展 情况 。
关键 字：Ｄ ＮＡ；Ｒ ＮＡ； 提取 ； 纯化 ； 进展 中图分类号 ：Ｑ５ 文献标识码：Ｂ 文章编 号：１０ －４ Ｘ （ ０ ）１—０ ５０ ２ ０ ５９ ４ ２ １ １ ２０ ７ －４
中 动 检 ０ 年 ２ 第２ 国 物 疫２１ 第 ８ ｌ １ 卷 期
熊
－ ７ ５
核酸提 取方法 的研究进展
张 丽 ， 莲茹 ， 绍 强 杨 吴
（． １内蒙古农业大学兽 医学院， 内蒙古呼和浩特 ０ ０ １ ；２ 中国检验检疫科学研究院， １０ ８ ． 北京 １０２ ） ０ ０９
摘 要 ：系统详 细的阐述 了核 酸提取 过程 中针对 细胞 裂解和核酸纯化 两大关键 步骤的各种研 究方法 ， 包括对组 织细胞 裂解 的