碱性磷酸酶活力测定(修改版)

酶促反应进程曲线
•能够真正代表酶 活性大小的是线 性期的酶促反应 速度，即酶促反 应初速度。
酶促反应初速度
酶活性
酶的含量
•问题4：
•测酶活性应注意哪些方面？
酶最适反应条件的选择
• 合适的底物与最适底物浓度 • 底物浓度远远高于酶浓度 • 理想的缓冲液与最适离子强度 • 最适温度 • 最适pH • 合适的辅因子、激活剂浓度 • 合理的测定时间
引言（2）
• 一些酶在不同器官、组织、细胞内的分布和定 位存在明显差异，而且在细胞内外有明显浓度 梯度差。
• 正常情况下血浆中酶活性相对恒定。但一些病 理情况常导致血浆中酶活性的改变。性别、年 龄、运动、妊娠、人种及环境因素等可引起人 血浆中某些酶的生理性变化。
• 所以酶与其它指标相比具有更高的诊断特异性 和灵敏度。
• ALP几乎存在于机体各个组织，但以骨骼、牙齿、肝脏 和肾脏中含量较多，儿童期含量尤其多。
• ALP有六种同功酶。其中AKP1、AKP2、AKP6来自 肝脏， AKP3来自骨细胞，AKP4产生于胎盘及癌细胞 ，而AKP5来自小肠绒毛上皮与成纤维细胞。
• • 临床上测定ALP活性主要用于肝脏疾病和骨骼疾病的
• 连续监测法： （速率法）
• 连续监测法是指每隔一定时间（2～60s），连续多次测 定酶反应过程中某一反应产物或底物量随时间变化的数 据，求出酶反应初速度，间接计算酶活性浓度的方法。
• 适用于自动生化分析仪 • 能动态观测酶促反应进程，结果准确可靠，标本和试剂
用量少，可在较短时间内完成测定。
酶偶联测定法
应用：对于底物或产物不能直接测定或难于准确测 定的酶促反应 。
Ex Ea Ei ABCP
式中A为底物，B、C为中间产物，P为产物（必须能够直接测定），Ex为待测酶， Ea、Ei都为工具酶。按照工具酶作用的不同， Ea又称为辅助酶，Ei又称为指示酶，C P称为指示反应。
•问题3：
• 在酶促反应进程中，是否任一阶段的酶促反应速度 都可以代表酶活性？
诊断常用血清酶
血清酶
符号
鸟氨酸氨基甲酰转移酶
OCT
卵磷脂胆固醇酰基转移酶 LCAT
谷氨酸脱氢酶
GLDH
山梨醇脱氢酶
SDH
丙氨酸氨基转移酶
ALT
异柠檬酸脱氢酶
ICD
-谷氨酰转肽酶
-GT
5ˊ-核苷酸酶
5ˊ-NT
单胺氧化酶
MAO
天门冬氨酸氨基转移酶 AST
肌酸激酶
CK
乳酸脱氢酶
LDH
碱性磷酸酶
ALP
（2）各种骨骼疾病。ALP主要由成骨细胞产生，故骨骼 病特别是有新生骨质生成时，血液内ALP活性增加，以 促进磷酸盐的沉积。如佝偻病、纤维性骨病、成骨不 全症、骨转移癌和骨折修复愈合期等均引起血清ALP活 力升高。
• 降低：主要见于呆小症，磷酸酶过少症等。
•问题2：
• 如何测定酶活性？
酶活性的概念
血清碱性磷酸酶活性测定 （磷酸苯二钠法）
•问题1：
• 为何要测定血清中酶的活性？有什 么意义？
引言（1）
• 酶活性测定是目前临床酶学分析最为常用的方 法。酶测定约占目前临床生化总工作量的1/4到 1/2。
• 用于诊断的酶类已超过100多种，常用的数十 种。
血浆酶的来源
血浆酶
血浆特异酶
外分泌酶
非血浆特异酶
诊断。
• 当肝脏受到损伤或者障碍时经淋巴道和肝窦进入血液， 同时由于肝内胆道胆汁排泄障碍，反流入血而引起血清 碱性磷酸酶明显升高。
什wk.baidu.com是ALP?
• 是一种能够将对应底物去磷酸化的酶，即通 过水解磷酸单酯将底物分子上的磷酸基团除 去，并生成磷酸根离子和自由的羟基，这类 底物包括核酸、蛋白、生物碱等。而该脱去 磷酸基团的过程称为去磷酸化或脱磷酸化。
酸性磷酸酶
ACP
淀粉酶
AMS
脂肪酶
LPS
来源
肝 肝 肝 肝 肝、肾、心 肝、胎盘、心 肝、胆、肾、小肠 肝、胆道 肝、肾、脑 心、肝、骨骼肌 骨骼肌、心、脑 心、肾、骨骼肌、肝、肺 骨骼、牙齿、肝、肾 前列腺、红细胞、血小板 胰、唾液腺 胰
碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase,ALP or AKP )
• 酶活性：酶催化某一化学反应的能力
• 常用单位时间内底物的减少量或产物的生 成量（即酶促反应速度）来表示酶活性大小
注：在实际测定酶促反应速度时，以测定单位 时间内产物的生成量为好。
酶活性的测定方法
• 固定时间法： （终点法）
• 通常是酶作用一段时间后，加入强酸、强碱、蛋白沉淀 剂等终止酶促反应，测定这段时间内底物的减少量或产 物的生成量，计算酶促反应的平均速度。
• 2.代谢酶：（细胞酶） • 在细胞内发挥催化功能的酶。正常时这些
酶存在于组织细胞中，血浆中酶活性很低。细 胞内、外浓度差异悬殊。 • 当酶来源的组织细胞发生病变，细胞膜通 透性增加或细胞坏死时，细胞内酶大量进入血 浆，导致血浆酶活性显著增高。其下降的临床 意义很少。 • 这一类酶临床应用较多，如转氨酶、乳酸脱氢 酶、肌酸激酶等，它们在肝病、心脏疾病时都 可能出现变化。
细胞内酶
（一）血浆特异酶
• 在血浆中发挥特定催化作用的酶。如凝血酶、 胆碱酯酶（CHE）、脂蛋白脂肪酶、铜氧化酶等。
• 它们大多数在肝内合成，在血浆中的浓度甚 至超过器官细胞内浓度。有的可以作为肝功能试 验的一部分。
• 血浆特异酶活性的改变，除了反映血液功能 外，还反映来源器官的功能。
（二）非血浆特异酶
• 在血浆中浓度很低，且无功能，分为两种。 • 1.分泌酶： • 来源于消化腺或其他外分泌腺的酶。如α-淀粉酶
（AMY）、前列腺酸性磷酸酶（ACP）、脂肪酶 （LPS）、胃蛋白酶原、胰蛋白酶原 、ALP等。 • 正常体液中外分泌酶活性低而稳定，不发生催化 作用。 • 在血液中的浓度和其分泌腺体的功能活动和疾病有 关，来源增加或排泄受阻时，血浆中此类酶活性增高。 例如，急性胰腺炎时，血淀粉酶就会升高。 •
• 碱性磷酸酶在碱性环境中有最大活力。
问题1:为什么要测定碱性磷酸酶的活性？有什 么意义？
1.生理性增加：如儿童、妊娠期、进食高糖、高脂肪 食物等均可使血清ALP活性增高。
2.病理性改变： • 升高
（1）肝胆疾病。主要见于阻塞性黄疸，急、慢性黄疸 性肝炎，肝癌等均可引起血清ALP活力不同程度的升高， 其中以癌性梗阻最明显。