生物化学实验内容

生物化学实验内容

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《生物化学》实验教学大纲

课程类别:专业基础

适用专业：本科临床学专业

课程总学时：实验学时:32

实验指导书:生物化学与分子生物学实验教程

开课实验室名称：生化实验室

一、目的和任务

生物化学是一门在分子水平上研究生命现象的学科,也是一门重要的实验性较强的基础医学课程.随着医学的发展，该学科已渗透到医学的各个领域。生物化学实验技术已被广泛地应用于生命科学各个领域和医学实验的研究工作。生物化学实验是生物化学教学的重要组成部分，它与理论教学既有联系,又是相对独立的组成部分,有其自身的规律和系统。我们根据国家教委对医学生物化学课程基本技能的要求，开设了大分子物质的常用定量分析法、酶活性分析、电泳法、层析技术、离心技术及临床生化,使学生对生物化学实验有一个比较系统和完整的概念，培养学生的基本技能和科学思维的形成，提高学生的动手能力。

二、基本要求

１.通过实验过程中的操作和观察来验证和巩固理论知识，加深学生对理论课内容的理解。

２.通过对实验现象的观察，逐步培养学生学会观察，比较，分析和综合各种现象的科学方法,培养学生独立思考和独立操作的能力。

3.通过对各类实验的操作和总结，培养学生严谨的科学态度。

4.进行本学科的基本技能的训练,使学生能够熟练各种基本实验方法和实验技术的操作。

三、考试方法及成绩评定方法

占总成绩之比总

分

分数分配考核目的要求

3０% 30 移液管正确

使用方法

1０考察学生平时对移液管的使用是否正确与熟练程度

移液枪的正确使用方法1０考察学生平时对移液枪的使用情况是否正确与熟练程度

紫外分光光度计的正确使用方法10 考察学生平时对紫外分光光度计的使用情况是否正确

与熟练程度

四、说明

实验教材及参考书：

１.揭克敏主编:生物化学与分子生物学实验教程（第2版)。科学出版社，201０参考资料：

1．.袁道强主编：生物化学实验（第1版)。化学工业出版社,201１

五、实验项目数据表

序号实验名称学

时

类

别

要

求

类

型

设备

套数

每组

人数

每组常规仪器设

备名称,数量

每组主要消耗材料

名称、数量、消耗

额

1 蛋白质的

沉淀反应3 2 0 1 3 １0

人

水浴锅１台试管2支、滤纸3

张

2 影响酶活

性的因素3 2 0 1 ３1０

人

水浴锅1台试管5支

3 血清醋酸

纤维素薄

膜电泳６２０２ 1 25

人

电泳仪1台电泳

槽1台

薄膜条1张干

4 血清胆固

醇的测定3 2 ０ 1 1 ２5

人

分光光度计1台试管3支

5 转氨基作

用6 ２0 1 1 2５

人

烘干箱1台层析

缸1个

层析滤纸1张

6 血清尿素

氮的测定3 2 0 1 1 25

人

分光光度计1台试管2支、移液管

4支

7 动物组织

基因组

DNA的提

取6 2 0 2 1 25

人

分光光度计1台ＥP管6支、移液

枪3支

8 实验基本

操作考核２ 2 0 3 １25

人

分光光度计１台试管1支、移液枪

１支、移液管1支

[注］1)类别:2:指为技术（或专业基础)课开设的教学实验项目。

2）要求：０:必修１选修

3）类型：0:演示1：验证2:综合３：设计

4）每组人数：指教学实验项目中一次实验在每套仪器设备上完成实验项目的人数。

六、各实验项目教学大纲

实验一蛋白质的沉淀反应

【预习要求】

预习四个小实验的具体实验原理和操作内容。

【实验目的】

1. 加深对蛋白质胶体溶液稳定因素的认识;

２．了解沉淀蛋白质的几种方法及其实用意义。

【实验内容】

（一)蛋白质的盐折

1. 原理

大量中性盐类如硫酸铵((NＨ４）2SO４)、硫酸钠(Ｎa2SO4)和氯化钠(ＮaCl）等加入到蛋白质溶液后,可引起蛋白质颗粒因失去水化膜和电荷而沉淀。各种蛋白质分子的颗粒大小和电荷数量不同,用不同浓度中性盐可使各种蛋白质分段沉淀。例如血清中的球蛋白可在半饱和硫酸铵溶液中沉淀。当硫酸铵浓度达到饱和时血清中的白蛋白使沉淀下来。盐析沉淀蛋白质时能保持蛋白质不变性，加水稀释降低盐浓度,能使沉淀的蛋白质重新溶解,并保持其生物活性。因此,利用盐析法可达到分离提纯蛋白质的目的。

２. 操作步骤

①取小试管1支、加入5％鸡蛋清溶液2０滴，饱和硫酸铵溶液20滴，充分摇匀后静置5ｍin,记录结果。

②另取1小试管置于试管架上,插入准备好的滤纸和漏斗。将操作“1”之混合液倾入

漏斗内过滤。观察结果。

③向操作“２”的滤液中逐步加入米粒大小固体(NH4)2SＯ4, 边加边摇匀,直至饱

和为止。观察结果。再向管内加入少量蒸馏水,观察结果有何变化。

④将操作“2”的滤液漏斗置于1支小试管上，用玻棒戳穿滤纸尖部，加少量蒸馏水

将滤纸上的沉淀粉洗入试管内，摇匀后观察和解释结果。

（二）重金属盐和三氯乙酸沉淀蛋白质

1．原理

重金属粒子如Ｐb2+、Cu2+、Ｈｇ2+、Ag+等可与蛋白质分子上的羧基结合生成不溶性

蛋白质金属盐而沉淀。三氯乙酸属于生物碱试剂，能与蛋白质分子上的氨基结合而沉淀。它

们均可引起蛋白质分子的变性和失去生物学活性。

2．操作步骤

①编号2支小试管，各加５％鸡蛋清溶液２0滴。

②向试管1加入０.1mｏl/L NaoH溶液1滴，混匀。加入3%ＣuSＯ4溶液4滴，混

匀。

③向试管２加入5%三氯乙酸溶液1０滴,混匀。

④记录结果。

（三)乙醇沉淀蛋白质

1.原理

某些可与水混合的有机溶剂如甲醇、乙醇和丙酮等，能破坏蛋白质的水化膜，降低其

在溶液中的稳定性。当加入少量中性盐如NaCl等或溶液pＨ接近等电点时,蛋白质胶粒上的

电荷被中和。加入上述有机溶剂可使蛋白质沉淀。反应在0—4℃下进行,并应立即分离沉淀

物，否则蛋白质会变性。

2.操作步骤

a) 编号2支小试管，各加5%鸡蛋清溶液10滴。

b) 每管内均加入９5%乙醇20滴，边加边混匀,静置片刻后观察结果。

c) 向试管1内加入饱和NaＣl溶液1—2滴,观察结果。

（四）、加热沉淀蛋白质

1、原理：几乎所有的蛋白质都可因加热而凝固，这是由于温度升高,则容易出现沉淀。

在酸性、碱性条件下，蛋白质则易变性,此时若温度升高,虽变性并不出现沉淀,在冷却后加

酸或加碱调节PH值达蛋白质的等电点时，则有沉淀析出。

2、操作:

１)取试管4支，编号，按下表操作

ﻩ管号

试剂(滴) １ 2 3

4

5%蛋白质溶液２0 20 20

20

1％醋酸_ 1 ＿

＿

１0% 醋酸_ _ １0

＿

1０% ＮaOH _ _ _ 10

２)将上述试管同时放入沸水浴中加热，观察并记录各试管出现的现象,解释变化原因。

3）取出试管,冷却后于第3管中慢慢滴入10％氢氧化钠溶液并观察现象。