马齿苋黄酮提取工艺研究

将收集液转至蒸发瓶中， 用旋转蒸发器减压浓缩
别用 ４０ ％、５０ ％、６０ ％、７０ ％、８０ ％的乙醇， 在一定的条 分离乙醇并浓缩至 ３０ ｍＬ 左右， 蒸发温度设定为 ５５ ℃
件下提取马齿苋粉末样品， 测浸取液吸光值， 得黄酮含量。 左右， 收集瓶中的乙醇溶液可回收作它用。将浓缩液冷
１．３．２．２ 提取温度对提取效果的影响
７５、８５ ℃， 其它条件一定的情况下提取马齿苋粉末样 摇 匀 ， 放 置 ６ ｍｉｎ， 加 入 １０ ％硝 酸 铝 ０．４ ｍＬ， 摇 匀 ， 放
品， 测浸取液吸光值， 得黄酮含量。
置 ６ ｍｉｎ， 加入 ４． ３ ％氢氧化钠 ４．０ ｍＬ， 再加水至刻度，
１．３．２．３ 料液比对提取效果的影响
摇匀， 放 置 １５ ｍｉｎ， 最 后 取 上 清 液 在 ５１０ ｎｍ 处 测 定 样
２．２．１ 乙醇浓度对提取效果的影响（ 见图 ２）
１５ ｍｉｎ， 以试剂空白为参照物对比［６］。用最小二乘法做线
性回归， 求得芦丁浓度（ Ｙ） 与吸光度（ Ａ） 的关系曲线。
１．４．２ 黄酮含量的测定
黄酮含量（ ％） ＝Ｙ×［５０×１×１０］／１×１ ０００×１００ ％ （１）
式中： Ｙ— ——总黄酮的浓度， ｇ／Ｌ；
图 ３ 水浴温度对提取效果的影响 Ｆｉｇ．３ Ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｔｅｍｐｅｒ ａｔｕｒ ｅ ｏｆ ｂａｃｋｗａｔｅｒ ｉｎｇ ｏｎ ｔｈｅ ｅｘｔｒ ａｃｔｉｏｎ
ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ
由图 ３ 可 见 ， 温 度 在 ７５ ℃时 ， 样 品 提 取 液 的 吸 光 值最大。低于 ７５ ℃之前， 测得的吸光值随温度的升高 先减小后增大； 而高于 ７５ ℃后， 测 得 的 吸 光 值 随 温 度 的升高反而减小， 这可能是因为温度升高到一定程度 会破坏样品中黄酮类物质的结构， 造成样品中黄酮的 损失， 故以 ７５ ℃最佳。 ２．２．３ 料液比对提取效果的影响（ 见图 ４）
图 ４ 料液比对提取效果的影响 Ｆｉｇ．４ Ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｓｏｌｖｅｎｔ ｖｏｌｕｍｅ ｏｎ ｔｈｅ ｅｘｔｒ ａｃｔｉｏｎ ｏｆ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ
由图 ４ 可见， 料液比 １：２０ 时， 样品提取液的吸光值 最大， 在料液比低于 １：２０ 之前， 测得的吸光值随料液比 的增大而增大； 而料液比在 １：２０ 之后， 测得的吸光度随 料液比的增大反而减小， 故以料液比 １：２０ 最佳。 ２．２．４ 浸提时间对提取效果的影响（ 见图 ５）
食品工艺
食品研究与开发
２００８ 年 ２ 月
第 ２９ 卷第 ２ 期
８１
２．２．２ 浸提温度对提取效果的影响（ 见图 ３）
的延长反而减小， 而且下降幅度逐渐趋于平缓。
２．３ 正交试验结果（ 见表 １、表 ２）
表 １ 正交试验因素及水平表 Ｔａｂｌｅ １ Ｆａｃｔｏｒ ｓ ａｎｄ ｌｅｖｅｌｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｏｒ ｔｈｏｇｏｎａｌ ｅｘｐｅｒ ｉｍｅｎｔ
马齿苋（ ＰｏｒｔｕｌａｃａｏｌｅｒａｃｅａＬ） 是 我 国 古 老 的 菜 药 兼 用植物， 各地均有野生。《本草图经》及《救荒本草》又叫 它为“五行草”， 而民间俗称长寿菜、马塌菜等［１－２］。近年 来， 马齿苋以营养丰富， 独特的药理作用以及菜药兼用 的特性， 逐渐受到人们的关注。美国农业部科学家发现 它 含 有 大 量 对 心 血 管 疾 病 具 有 防 治 效 果 的 成 分［３］。马 齿 苋所含有的黄酮类活性成分， 具有降低血脂、降低血粘 度 、有 效 减 轻 主 动 脉 壁 脂 质 沉 积 、抑 制 动 脉 粥 样 硬 化 作 用［４］。本文以安徽合肥市郊野生马齿苋为研究对象， 对 影响马齿苋的黄酮类物质的提取因素进行研究， 寻找 最佳提取工艺条件。
２ 结果与讨论
１．３．２．４ 提取时间与黄酮含量的关系
２．１ 标准曲线（ 见图 １）
准确称取制备好的马齿苋粉末 ０．９３７ ５ ｇ 若干份，
用上述得到的最佳条件， 浸提时间分别为 ０．５、１．５、２．５、
３．５、４．５ ｈ 提取马齿苋粉末样品， 测浸取液吸光值， 得黄
酮含量。
１．３．３ 正交试验
利 用 正 交 试 验 进 一 步 考 察 乙 醇 浓 度 、提 取 温 度 、料
１ 材料与方法 １．１ 原料与试剂
马齿苋为 ２００７ 年 ４ 月 下 旬 采 摘 于 安 徽 合 肥 市 郊 的野生新鲜的马齿苋。
芦丁标准品（ 含量≥９５．０ ％， 国药集团化学试剂有限 公司） 、乙醚、氢氧化钠、无水乙醇、９５ ％甲醇、７５ ％乙醇、
作 者 简 介 ： 伊 长 文（ １９６５－ ） ， 男（ 汉） ， 讲 师 ， 本 科 ， 从 事 食 品 生 物 技 术 和食品加工工艺研究。
图 ５ 浸提时间对提取效果的影响 Ｆｉｇ．５ Ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｔｉｍｅ ｏｎ ｔｈｅ ｅｘｔｒ ａｃｔｉｏｎ ｏｆ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ
图 ５ 结果表明， 时间在 ２．５ ｈ 时， 测 得 样 品 提 取 液 的吸光值最大， 在低于 ２．５ ｈ 之前， 测得的吸光值随时 间的延长而增大； 而在 ２．５ ｈ 后， 测得的吸光值随时间
液比、提取时间这 ４ 个因素对提取效果的交互影响。试 验选用 Ｌ１６（４４）正交表， 研究提取条件对提取效果的影响 的大小， 并确定最佳工艺。 １．４ 马齿苋黄酮含量的测定 １．４．１ 芦丁标准曲线的绘制
用 移 液 管 准 确 吸 取 ０．０、０．５、１．０、１．５、２．０、２．５、３．０、 ３．５ ｍＬ 的芦丁标准液分别置于 １０ ｍＬ 的容量瓶中， 加 入水 ２ ｍＬ￣４ ｍＬ ， 加入 ５ ％亚硝酸钠 ０．４ ｍＬ， 摇匀 ， 放 置 ６ ｍｉｎ， 加 入 １０ ％硝 酸 铝 ０．４ ｍＬ， 摇 匀 ， 放 置 ６ ｍｉｎ， 加入 ４．３ ％氢氧化钠 ４．０ ｍＬ， 再加水至刻度， 摇匀， 放置
ＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ ＥＸＴＲＡＣＴＩＯＮ ＯＦ ＦＬＡＶＯＮＯＩＤＳ ＦＲＯＭ ＰＯＲＴＵＬＡＣＡＯＬＥＲＡＣＥＡＬ ＹＩ Ｃｈａｎｇ－ ｗｅｎ， ＣＨＵ Ｋａｉ－ ｂｉｎ
（ Ｄｅｐｔ． ｏｆ Ｂｉｏｃｈ． Ｅｎｇｎ．，Ａｎｈｕｉ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｓｃｉｅｎｃｅ， Ｗｕｈｕ ２４１０００， Ａｎｈｕｉ， Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒ ａｃｔ： Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｌｅａｃｈｉｎｇ ａｇｅｎｔ，ｒａｔｉｏ ｏｆ ｓｏｌｉｄ ｔｏ ｌｉｑｕｉｄ，ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ａｎｄ ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇ ｔｉｍｅ ｗａｓ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄｂｙｕｓｉｎｇａ Ｌ１（６ ４４） ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ ｔｏ ａｃｑｕｉｒｅ ｔｈｅ ｏｐｔｉｍｕｍ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ． Ｗｅ ａｌｓｏ ｐｕｒｉｆｉｅｄ ｔｈｅ ｅｔｈａｎｏ－ ｌｉｃ ｅｘｔｒａｃｔｓ ｗｉｔｈ ｍａｃｒｏｐｏｒｏｕｓ ｒｅｓｉｎ ｃｏｌｕｍｎ． Ｒａｔｉｏｎ ｏｆ １（ＰｏｒｔｕｌａｃａｏｌｅｒａｃｅａＬ）： ２０（７０ ％ ｅｔｈａｎｏｌ） ａｔ ｔｈｅ ｂａｃｋｗａｔｅｒ－ ｉｎｇ ｏｆ ７５ ℃ ｆｏｒ ２．５ ｈ ｗａｓ ｃｏｎｓｉｄｅｒｅｄ ａｓ ｔｈｅ ｏｐｔｉｍｕｍ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ ｏｆ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ Ｋｅｙ ｗｏｒ ｄｓ： ＰｏｒｔｕｌａｃａｏｌｅｒａｃｅａＬ； ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ； ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ； ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ
亚硝酸钠、硝酸铝、双蒸馏水， 其他试剂均为分析纯。 １．２ 主要仪器与设备
ＤＨＧ－ ９１３４ＢＳ－ Ｉ 型电热恒温鼓风干燥箱： 上海新 苗 医 疗 器 械 制 造 有 限 公 司 ； ＳＨＢ－ ＩＡ 循 环 水 式 多 用 真 空泵： 郑州市上街华科仪器厂； ＲＥ－ ５２ 型旋转蒸发器 上海青浦沪西仪器厂； ７２１ 分光光度计： 上海精密科学 仪器有限公司； ＨＨ－ ２ 数显恒温水浴锅： 常州国华电器 有限公司； ＨＰＤ－ ６００ 大孔树脂： 河北沧州宝恩化工有 限 公 司 ； 电 子 天 平 、粉 碎 机 、索 氏 提 取 器 、回 流 浸 提 装 置 、分 液 漏 斗 、抽 滤 瓶 、布 氏 漏 斗 等 。 １．３ 方法 １．３．１ 提取工艺流程
图 ２ 乙醇浓度对提取效果的影响 Ｆｉｇ．２ Ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｅｔｈａｎｏｌ ｃｏｎｃｅｎｔｒ ａｔｉｏｎ ｏｎ ｔｈｅ ｅｘｔｒ ａｃｔｉｏｎ
ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ
由图 ２ 可见， 乙醇浓度在 ７０ ％时， 样品提取液的吸 光值最大， 低于 ６０ ％时， 测得的吸光值随浓度的增大而 增大； 高于 ７０ ％时， 测得的吸光度随浓度的增大上升幅 度趋于平缓且稍有减小。故以 ７０ ％的乙醇浓度为最佳。
新鲜马齿苋→预处理→乙醇浸提取→大孔树脂纯 化→浓缩→显色→吸取上清液→测定黄酮含量
将新鲜马齿苋用清水洗净沸水漂烫 ３ ｍｉｎ， 然后用 冷水迅速冷却， 沥干水分。置于 ８０ ℃恒温鼓风干燥箱 烘干 ５ ｈ［５］、粉碎后过 ６０ 目筛。将粉碎后的马齿苋粉末 包好置于索氏提取器内， 乙醚 ５５ ℃水浴加热回流抽提 脱脂， 大约 ４ ｈ￣６ ｈ 至抽提液呈无色为止， 脱脂后马齿 苋粉末为原粉末的 ９３．７５ ％。
图 １ 芦丁样品的标准曲线 Ｆｉｇ．１ Ｓｔａｎｄａｒ ｄ ｃｕｒ ｖｅ ｏｆ ｒ ｕｔｉｎ ｓａｍｐｌｅ
用最小二乘法作线性回归得芦丁浓度与吸光值关
系的回归方程式
Ａ＝０．５９２ ２ Ｘ＋０．００１ ２
（２）
Ｒ２＝０．９９７ ２
式（ ２） 中： Ｙ 为芦丁浓度， ｇ／Ｌ； Ａ 为吸光值。
２．２ 各因素对提取效果的影响
却至室温后， 以蒸馏水定容至 ５０ ｍＬ， 待测。
准确称取制备好的马齿苋粉末 ０．９３７ ５ ｇ 若干份，
用移液管准确移取 １ ｍＬ 黄 酮 溶 液 至 １０ ｍＬ 容 量
用上述得到的最佳乙醇浓度， 温度分别为 ４５、５５、６５、 瓶 中 ， 加 入 水 ２ ｍＬ￣４ ｍＬ， 加 入 ５ ％亚 硝 酸 钠 ０．４ ｍＬ，
准确称取制备好的马齿苋粉末 ０．９３７ ５ ｇ 若干份， 品吸光度。以试剂空白为参照物对比， 用 ７２１ 分光光度
用上述得到的最佳乙醇浓度和最佳温度， 料液比分别 计， 在 ５１０ ｎｍ 波长处测定吸光度。
为 １：５、１：１０、１：１５、１：２０、１：３０， 其它条件一定的情况下提
取马齿苋粉末样品， 测浸取液吸光值， 得黄酮含量。
２００８ 年 ２ 月
８０ 第 ２９ 卷第 ２ 期
食品研究与开发
食品工艺
１．３．２ 单因素试验
通过树脂柱后用去离子水洗至流出液基本无色时， 用
１．３．２．１ 浸取剂乙醇浓度对提取效果的影响
７０ ％乙醇将提取物洗脱［７］， 经过 ８ ｈ￣１０ ｈ 的收集。
准确称取制备好的马齿苋粉末 ０．９３７ ５ ｇ 若干份， 分
因素 Ａ 乙醇浓度 ／％
Ｂ 料液比
Ｃ 浸提温度 ／℃ Ｄ 时间 ／ｈ
Ｆａｃｔｏｒｓ Ｅｔｈａｎｏｌ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ／％ Ｐｒｏｐｏｒｔｉｏｎｈ
５０— ——提取溶液浓缩并且定容后的体积； １０— ——将 １ ｍＬ 提取液放入 １０ ｍＬ 容量瓶； １— ——未脱脂前原料的质量； １ ０００— ——质量单位 ｇ 化为 ｍｇ。 式（ １） 中马齿苋总黄酮含量： 马齿苋用乙醇溶液提 取。将大孔吸附树脂湿法装柱， 柱体积为 １ ｃｍ×４０ ｃｍ， 将抽滤的马齿苋黄酮粗提取液上柱， 待样品溶液全部
食品工艺
食品研究与开发
２００８ 年 ２ 月
第 ２９ 卷第 ２ 期
７９
马齿苋黄酮提取工艺研究
伊长文， 楚凯宾 （ 安徽工程科技学院 生物化学工程系， 安徽 芜湖 ２４１０００）
摘 要： 以浸取剂浓度、料液比、浸提温度、浸提时间为主要考察因 素 ， 运 用 正 交 试 验 设 计 ， 作 Ｌ１（６ ４４） 正 交 试 验 ， 对 马 齿苋黄酮类物质的提取工艺进行了研究。并对马齿苋提取总黄酮使用大孔树脂柱进行简单的提纯。结果表明： 以 ２０ 倍原料重的 ７０ ％乙醇水溶液在 ７５ ℃， 浸提 ２．５ ｈ 为最佳提取工艺条件。 关键词： 马齿苋； 黄酮； 提取工艺； 正交试验