高效液相色谱_质谱联用法研究乌头碱的水解产物
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乌头碱是为 C219二萜类双酯型生物碱 ,具麻辣 味 ,毒性极强 ,是乌头类中药的主要毒性成分 。将乌 头水中加热 ,或浸泡水中不加热 ,都可水解 。关于它 的水解动力学 、水解产物都有文献报道 ,且都集中在 生成乌头次碱和乌头原碱 。在匡海学主编的《中药 化学 》中论述到 : 乌头碱在 100 ℃水解生成乌头次 碱 ,在 160 ～170 ℃生成原碱 [ 1 ] 。可笔 者在 实验 中 发现乌头碱水解产物比上述论述的复杂的多 ,因 此 本 实 验 用 高 液 色 相 色 谱 2电 喷 雾 2质 谱 /质 谱 ( H PLC2ES I2M Sn )的方法来鉴定其水解产物 ,结果 发现乌头碱在 100 ℃时 ,在生成乌头次碱和乌头原 碱的同时 ,还生成准分子离子为 482和 586的化合 物 ,这为乌头类生物碱的进一步研究提供了新的 途径 。
2. 1 mm , 5μm ) 。流动相 : A 为 0. 1%氨水 , B 为乙 腈 ,采用梯度洗脱 : 0 m in 时 , VA ∶VB = 75 ∶25; 32 m in 时 , VA ∶VB = 40∶60; 55 m in时 , VA ∶VB = 60 ∶40; 75 m in 时 , VA ∶VB = 75 ∶25; 流 速 : 0. 5 mL·m in- 1 。柱 温 : 25 ℃。检测波长 : 230 nm。检测方式 : ESI ( + ) ; 干 燥气流速 : 10 L·m in- 1 ;雾化室压 : 518 kPa ( 40 p si) ; 雾化温度 : 350 ℃。毛细管电压 : 4 000 eV; 进样量 : 10μL;扫描范围 : 400～800 u。
编辑 :王宇梅 /接受日期 : 2006 - 05 - 09
高效液相色谱 2质谱联用法研究乌头碱的水解产物 3
刘永刚 1 ,刘 倩 1 ,张宏桂 2 ,乔延江 2 (1 吉林大学药学院 ,长春 130021; 2 北京中医药大学 ,北京 100029)
[摘要 ] 目的 :研究乌头碱的水解产物 。方法 :用高效液相色谱 2电喷雾 2质谱 /质谱 (HPLC2ESI2M Sn )的方法对 乌头碱的水解产物进行分析 ,其中液相用梯度洗脱 ,质谱用正离子模式 。结果 :在水解液中发现了乌头碱的 4种水 解产物的准分子离子和其各级碎片 ,其准分子离子为 604, 500, 586, 482。结论 :乌头碱的水解成分为乌头次碱 ,乌 头原碱和另外 2种未知产物 。
[ 4 ] GA IARDY RE, GASSABONBE ME, GIESE C, et al. Low mo2 lecular weight inhibitors in corneal ulceration [ J ]. A nn N Y A ced Sci, 1994, 732: 324 - 334.
[ 8 ] YAMAMOTO M , TSUJ ISH ITA H, HOR I N , et a l. Inhibition of membrane2type 1 matrix metallop roteinase by hydroxamate inhibi2 tors: an exam ination of the subsite pocket [ J ]. J M ed Chem ,
中国新药杂志 2007年第 16卷第 4期 1998, 41 ( 23) : 1209 - 1217. [ 9 ] FEENSLRA RW , STOKKINGREEF EHM , RE INCHW E IN AM , et a l. Oxidative p reparation op tically active n2hydroxy2α2am ino acid am ides[ J ]. Tetrahedron, 1990, 46 ( 5) : 1745 - 1756. [ 10 ] KUN ISH IMA M , KAWACH I C, IWASAKI F, et a l. Synthesis and characterization of 42( 4, 62D imethoxy21, 3, 52triazin222yl) 242 methylmorpholinium chloride [ J ]. Tetrahed ron L ett, 1999, 40 ( 29) : 5327 - 5330 [ 11 ] KUN ISH IMA M , KAWACH I C, MOR ITA J, et al. 42( 4, 62D im2 ethoxy21, 3, 52triazin222yl) 242methylmorpholinium chloride: An efficient condensing agent leading to the formation of am ides and esters[ J ]. Tetrahedron, 1999, 55 ( 46) : 13159 - 13170. [ 12 ] CRON IN JS, GINAH FO , ANGELA R, et al. An imp roved p ro2 cedure for the large scale p reparation of 22chloro24, 62dimethoxy2 1, 3, 52triazine[ J ]. Synth Comm un, 1996, 26 (18) : 3491 - 3494. [ 13 ] SEKER REDDY A , SURESH KUMAR M , RAV INDRA REDDY G. A conventient method for the p reparation of hydroxam ic acids [ J ]. Tetrahed ron L ett, 2000, 41 ( 33) : 6285 - 6288.
方法与结果
1 供试品溶液的制备 精密称取适量乌头碱对照品溶于水中 ,让其形
成过饱和水溶液 ,在 100 ℃加热 1 和 3 h后分别取 1 mL的溶液 ,然后用等体积的水补充 。取出的溶液 冷却后用微孔滤膜过滤 ,作为供试品溶液 。
色谱条件及分析方法 色谱柱 : Agilent ZORBAX SBC18 柱 ( 150 mm ×
[ 3 ] GROBELNY D , PONCZ L, GALARDY RE. Inhibition of human skin fibroblast collagenase, thermolysin, and p seudomonas aerug2 inosa elastase by pep tide hy droxam ic acids [ J ]. B iochem istry, 1992, 31 ( 31) : 7152 - 7154.
[关键词 ] 水解产物 ;乌头碱 ;高效液相色谱 2质谱 [中图分类号 ] R917176 [文献标识码 ] A [文章编号 ] 1003 - 3734 (2007) 04 - 0303 - 03
Stud ies on hydrolysa tes of acon itine by HPLC 2M Sn
Chinese Journal of New D rugs 2007, Vol. 16 No. 4 tent, selective inhibitor of matrix metallop roteinase23 for the top i2 cal treatment of chronic dermal ulcers[ J ]. J M ed Chem , 2003, 46 ( 16) : 3514 - 3525.
[ Key words] hydrolysate; aconitine; HPLC2M Sn
3 基金项目 :国家重点基础研究发展规wk.baidu.com项目 (973)课题 (2004BA721A11)
— 303 —
Chinese Journal of New D rugs 2007, Vol. 16 No. 4
质谱行为 在上述质谱条件下水解物的 MS离子流图
见图 2。
Agilent 1100 LC M SD TRAP XCT p lus系统 , 含在线真空脱气机 、二元梯度泵 、自动进样器 、柱温 箱 、二极管阵列检测器 、电喷雾 ( ESI)接口 , HPChem2 stationRevA0. 803色谱工作站 (美国安捷伦公司 ) ; 乌头碱对照品 (中国药品生物制品检定所 , 批号 : 1107532200212) ;乙腈和甲酸为分析纯试剂 ,水为重 蒸水 。
仪器和试药
中国新药杂志 2007年第 16卷第 4期
没有发现 色 谱 峰 , 而 准 分 子 离 子 为 482 ( tR = 6. 1 m in)的化合物在色谱图上也没有出现峰 ,这说明此 化合物也没有紫外吸收 。所以在色谱图上只能看到 3个色谱峰 ,见图 1。
1为乌头次碱 , 2为未知降解物 , 3为乌头碱 图 1 乌头碱水解物的 HPLC图
[ 5 ] GALARDY RE. GalardinTM [ J ]. D rugs Fu t, 1993, 18 ( 12 ) : 1109 - 1111.
[ 6 ] LEVY DE, GROBELNY D , TANG C, et al. Process for p repar2 ing synthestic matrix metallop roteinase inhibitors: US, 5892112 [ P ]. 1994 - 01 - 21.
[ Abstract] O bjective: To analyze the hydrolysates of aconitine. M ethods: The aconitine was el2 uated in a gradient setting by HPLC and then analyzed by ESI2M Sn. AgilentM S TRAP equipped w ith ESI source was used as detector and operated in positive ion mode. Results: Four hydrolysates were found w ith p rotonated molecular ions at m / z 604, 500, 586 and 482. Conclusion : The hydrolysates were eluci2 dated as bebziylaconine, aconine and other two unknown compounds.
[ 7 ] LEVY DE, LAP IERRE F, L IANG W , et al. Matrix metallop ro2 teinase inhibitors: a structure2activity study [ J ]. J M ed Chem , 1998, 41 ( 2) : 199 - 223.
色谱行为 在上述色谱条件下 ,其乌头碱和水解产物得到
了很好的分离 ,由于乌头原碱没有紫外吸收 ,所以在 保留时间为 8. 5 m in (通过质谱的离子流图确定 )时
L IU Yong2gang1 , L IU Q ian1 , ZHAN G Hong2gui2 , Q IAO Yan2jiang2 ( 1 Pha rm acy College of J ilin U n iversity, Changchun 130021, Ch ina; 2 B eijing U n iversity of T rad itiona l Ch inese M ed icine, B eijing 100029, Ch ina)
2. 1 mm , 5μm ) 。流动相 : A 为 0. 1%氨水 , B 为乙 腈 ,采用梯度洗脱 : 0 m in 时 , VA ∶VB = 75 ∶25; 32 m in 时 , VA ∶VB = 40∶60; 55 m in时 , VA ∶VB = 60 ∶40; 75 m in 时 , VA ∶VB = 75 ∶25; 流 速 : 0. 5 mL·m in- 1 。柱 温 : 25 ℃。检测波长 : 230 nm。检测方式 : ESI ( + ) ; 干 燥气流速 : 10 L·m in- 1 ;雾化室压 : 518 kPa ( 40 p si) ; 雾化温度 : 350 ℃。毛细管电压 : 4 000 eV; 进样量 : 10μL;扫描范围 : 400～800 u。
编辑 :王宇梅 /接受日期 : 2006 - 05 - 09
高效液相色谱 2质谱联用法研究乌头碱的水解产物 3
刘永刚 1 ,刘 倩 1 ,张宏桂 2 ,乔延江 2 (1 吉林大学药学院 ,长春 130021; 2 北京中医药大学 ,北京 100029)
[摘要 ] 目的 :研究乌头碱的水解产物 。方法 :用高效液相色谱 2电喷雾 2质谱 /质谱 (HPLC2ESI2M Sn )的方法对 乌头碱的水解产物进行分析 ,其中液相用梯度洗脱 ,质谱用正离子模式 。结果 :在水解液中发现了乌头碱的 4种水 解产物的准分子离子和其各级碎片 ,其准分子离子为 604, 500, 586, 482。结论 :乌头碱的水解成分为乌头次碱 ,乌 头原碱和另外 2种未知产物 。
[ 4 ] GA IARDY RE, GASSABONBE ME, GIESE C, et al. Low mo2 lecular weight inhibitors in corneal ulceration [ J ]. A nn N Y A ced Sci, 1994, 732: 324 - 334.
[ 8 ] YAMAMOTO M , TSUJ ISH ITA H, HOR I N , et a l. Inhibition of membrane2type 1 matrix metallop roteinase by hydroxamate inhibi2 tors: an exam ination of the subsite pocket [ J ]. J M ed Chem ,
中国新药杂志 2007年第 16卷第 4期 1998, 41 ( 23) : 1209 - 1217. [ 9 ] FEENSLRA RW , STOKKINGREEF EHM , RE INCHW E IN AM , et a l. Oxidative p reparation op tically active n2hydroxy2α2am ino acid am ides[ J ]. Tetrahedron, 1990, 46 ( 5) : 1745 - 1756. [ 10 ] KUN ISH IMA M , KAWACH I C, IWASAKI F, et a l. Synthesis and characterization of 42( 4, 62D imethoxy21, 3, 52triazin222yl) 242 methylmorpholinium chloride [ J ]. Tetrahed ron L ett, 1999, 40 ( 29) : 5327 - 5330 [ 11 ] KUN ISH IMA M , KAWACH I C, MOR ITA J, et al. 42( 4, 62D im2 ethoxy21, 3, 52triazin222yl) 242methylmorpholinium chloride: An efficient condensing agent leading to the formation of am ides and esters[ J ]. Tetrahedron, 1999, 55 ( 46) : 13159 - 13170. [ 12 ] CRON IN JS, GINAH FO , ANGELA R, et al. An imp roved p ro2 cedure for the large scale p reparation of 22chloro24, 62dimethoxy2 1, 3, 52triazine[ J ]. Synth Comm un, 1996, 26 (18) : 3491 - 3494. [ 13 ] SEKER REDDY A , SURESH KUMAR M , RAV INDRA REDDY G. A conventient method for the p reparation of hydroxam ic acids [ J ]. Tetrahed ron L ett, 2000, 41 ( 33) : 6285 - 6288.
方法与结果
1 供试品溶液的制备 精密称取适量乌头碱对照品溶于水中 ,让其形
成过饱和水溶液 ,在 100 ℃加热 1 和 3 h后分别取 1 mL的溶液 ,然后用等体积的水补充 。取出的溶液 冷却后用微孔滤膜过滤 ,作为供试品溶液 。
色谱条件及分析方法 色谱柱 : Agilent ZORBAX SBC18 柱 ( 150 mm ×
[ 3 ] GROBELNY D , PONCZ L, GALARDY RE. Inhibition of human skin fibroblast collagenase, thermolysin, and p seudomonas aerug2 inosa elastase by pep tide hy droxam ic acids [ J ]. B iochem istry, 1992, 31 ( 31) : 7152 - 7154.
[关键词 ] 水解产物 ;乌头碱 ;高效液相色谱 2质谱 [中图分类号 ] R917176 [文献标识码 ] A [文章编号 ] 1003 - 3734 (2007) 04 - 0303 - 03
Stud ies on hydrolysa tes of acon itine by HPLC 2M Sn
Chinese Journal of New D rugs 2007, Vol. 16 No. 4 tent, selective inhibitor of matrix metallop roteinase23 for the top i2 cal treatment of chronic dermal ulcers[ J ]. J M ed Chem , 2003, 46 ( 16) : 3514 - 3525.
[ Key words] hydrolysate; aconitine; HPLC2M Sn
3 基金项目 :国家重点基础研究发展规wk.baidu.com项目 (973)课题 (2004BA721A11)
— 303 —
Chinese Journal of New D rugs 2007, Vol. 16 No. 4
质谱行为 在上述质谱条件下水解物的 MS离子流图
见图 2。
Agilent 1100 LC M SD TRAP XCT p lus系统 , 含在线真空脱气机 、二元梯度泵 、自动进样器 、柱温 箱 、二极管阵列检测器 、电喷雾 ( ESI)接口 , HPChem2 stationRevA0. 803色谱工作站 (美国安捷伦公司 ) ; 乌头碱对照品 (中国药品生物制品检定所 , 批号 : 1107532200212) ;乙腈和甲酸为分析纯试剂 ,水为重 蒸水 。
仪器和试药
中国新药杂志 2007年第 16卷第 4期
没有发现 色 谱 峰 , 而 准 分 子 离 子 为 482 ( tR = 6. 1 m in)的化合物在色谱图上也没有出现峰 ,这说明此 化合物也没有紫外吸收 。所以在色谱图上只能看到 3个色谱峰 ,见图 1。
1为乌头次碱 , 2为未知降解物 , 3为乌头碱 图 1 乌头碱水解物的 HPLC图
[ 5 ] GALARDY RE. GalardinTM [ J ]. D rugs Fu t, 1993, 18 ( 12 ) : 1109 - 1111.
[ 6 ] LEVY DE, GROBELNY D , TANG C, et al. Process for p repar2 ing synthestic matrix metallop roteinase inhibitors: US, 5892112 [ P ]. 1994 - 01 - 21.
[ Abstract] O bjective: To analyze the hydrolysates of aconitine. M ethods: The aconitine was el2 uated in a gradient setting by HPLC and then analyzed by ESI2M Sn. AgilentM S TRAP equipped w ith ESI source was used as detector and operated in positive ion mode. Results: Four hydrolysates were found w ith p rotonated molecular ions at m / z 604, 500, 586 and 482. Conclusion : The hydrolysates were eluci2 dated as bebziylaconine, aconine and other two unknown compounds.
[ 7 ] LEVY DE, LAP IERRE F, L IANG W , et al. Matrix metallop ro2 teinase inhibitors: a structure2activity study [ J ]. J M ed Chem , 1998, 41 ( 2) : 199 - 223.
色谱行为 在上述色谱条件下 ,其乌头碱和水解产物得到
了很好的分离 ,由于乌头原碱没有紫外吸收 ,所以在 保留时间为 8. 5 m in (通过质谱的离子流图确定 )时
L IU Yong2gang1 , L IU Q ian1 , ZHAN G Hong2gui2 , Q IAO Yan2jiang2 ( 1 Pha rm acy College of J ilin U n iversity, Changchun 130021, Ch ina; 2 B eijing U n iversity of T rad itiona l Ch inese M ed icine, B eijing 100029, Ch ina)