血培养原则(CLSI)
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抽血培养的原则及操作流程
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(优选)临床血培养的指导原则
皮肤和血培养瓶的消毒方法
美国CLSI推荐皮肤的消毒方法为：
感染性心内膜炎采血方法
血培养采血套数及血量
• CLSI要求每次采集2-3套标本,每套应包括一个需氧培养瓶,一个厌氧 培养瓶
• 一个静脉穿刺点只能采集1套血培养，采集第2套血培养应该选择第2 个静脉穿刺点
• 成年病人不能只采1瓶血培养标本，采血量不足和只做1套血培养所 得得结果是很难正确解释的
Cockrill2004年报告:163位病人,血培养仪
How reliable is a negative blood culture result?
Australia, 2007
• Adequate blood culture volume
• < 1 month: ≥ 0.5 mL • 1 month – 36 months: ≥ 1.0 mL • ≥ 36 months: ≥ 4.0 mL
采血套数及血量
1套(20ml)
2套(40ml)
检出率
65%
80%
3套(60ml) 96%
血培养在需氧瓶和厌氧瓶中的分配及血量
• CLSI建议常规的血培养应该包括至少一个需氧培养瓶和一个厌氧 培养瓶（称“一套”）
• 最近的研究表明：用需氧瓶加厌氧瓶的组合检测出的葡萄球菌， 肠杆菌科菌中某些菌和苛氧菌比一对需氧瓶多。
•
对于婴幼儿患者，采血量不超过患者总血量的1％
体重kg
<=1 1.1-2 2.1-12.7 12.8-36.3 >=36.3
总血量ml
50-99 100-200 >200 >800 >2200
第一套取血量ml（ 第二套取血量ml 占全身血量％）
clsi血培养推荐指南
06
clsi血培养指南未来发展及展望
未来发展
提升检测灵敏度和特异性 通过改进培养技术、优化培养基 等方法，提高血培养的检测灵敏 度和特异性，减少假阴性或假阳 性结果。
拓展培养基和方法 研究新的培养基和方法，以适应 更多种类的病原体培养和检测。
缩短培养时间 研究缩短培养时间的方法，以便 更及时地检测到病原体，缩短患 者诊断和治疗的时间。
血培养的常见问题
血培养的阳性率受到多种因素的 影响，如患者用药情况、采血时
机、培养基质量进行 综合分析，以确定感染的病原体
种类和感染部位。
血培养结果阴性不能排除感染的 存在，需要结合其他检查结果进
行综合判断。
03
clsi血培养指南
成人血培养指南
clsi血培养推荐指南
汇报人： 日期:
• 引言 • 血培养概述 • clsi血培养指南 • clsi血培养指南应用及效果 • clsi血培养指南与临床实践 • clsi血培养指南未来发展及展望
01
引言
目的和背景
目的
为了提高血培养的检测灵敏度和特异性，减少漏检和误诊，以及优化实验室操 作流程，CLSI（临床和实验室标准化研究所）制定了血培养标准化操作指南。
个性化治疗将成为趋势
基于基因组学、免疫学等领域的进展，未来的血 培养将更加注重个性化治疗，为患者提供更加精 准的治疗方案。
THANK YOU
菌的检出率。
对于接受抗菌药物治疗的患者， 建议在更换新抗菌药物前采集血 液样本，以监测病原菌是否对当
前抗菌药物产生耐药性。
对于疑似血流感染的患者，建议 在患者发热期间或使用抗菌药物 前采集血液样本，以增加病原菌
的检出率。
04
clsi血培养指南应用及效果
血培养原则(CLSI)
血培养的时机
菌血症的菌量
寒颤
血培养
体温
0
30
60
时间(分)
血培养的数量
• 2004年Cockerill’s研究表明：当每套血培养采血20 mL ，且使用自动 化血培养系统时
• 一套检出率：65％ • 二套检出率：80％ • 三套检出率：96％ • 感染性心内膜炎第一套检出率90％ ％ • 血培养的数量 • 目前的指南推荐采集2-3套血培养 • 成年病人单一套的血培养从不被建议操作，因为这是不合适的数量， • 培养结果将很难做出临床解释 • 在采取血培养后的2-5天内，不需要再重复采取血培养，因为进行治 • 疗后的2-5天血液中的感染细菌不会马上消失 • 大部份细菌或真菌血症感染的移除，是以临床的症状表现来评估， • 唯有两个例外 • 感染性心内膜炎 • 金葡感染菌血症但非感染性心内膜炎相关
• 碘酊、次氯酸和洗必太的消毒效果要优于碘伏 • 碘酊和洗必太的消毒效果大致相当 • 碘酊需作用30秒以发挥杀菌效能
• 碘伏需作用1.5-2分钟以发挥杀菌效能 • 洗必太发挥杀菌效能的作用时间和碘酊一样， • 但是由于没有伴随的过敏反应，所以使用后不 必擦去；但不能被用于小于2个月的婴儿皮肤消毒
血培养采集部位
采血量在需氧和厌氧瓶中的分配
• 对于常规的血培养，建议采取包括需氧 和厌氧的一套血培养瓶；将采集的血液 等量分配于需氧和厌氧血培养瓶中
• 当采血量不能满足推荐的血培养瓶需求 血量时，首先应进行接种需氧血培养瓶， 其余血量再接种厌氧血培养瓶
• 菌血症病源菌常见为需氧菌及兼性厌氧菌
血培养之皮肤消毒和污染的预防
因为该商业化培养基中添加其他成分以结合或去活化血液中抑制物质的作用多种商业化的肉汤培养基配方可用于人工及自动化血培养系统遵循clsim22指南血培养用培养基添加剂菌与酵母菌的检出?血培养的孵育条件阴性的血培养常规或盲传于是?必要的血培养的培养方法压?变化真菌和分枝杆菌血培养方法动血培养系统血培养的特殊话题crbsi导管相关性血?感染crbsi3少见细菌及苛养菌婴幼儿血培养儿童的采血?为?超过总血容?的1导管相关性血?感染crbsi1如果两套血培养为阴性而导管末梢培养为阴性?是crbsi导管相关性血?感染crbsi2如果两套血培养为阴性?是crbsi导管相关性血?感染crbsi3如果两套血培养为阴性而导管末梢培养为阴性?是crbsi感染性心内膜炎阴性则继续采集2套血培养全部培养一共5套已接受抗生素治疗的病人目前的研究表明接受抗生素治疗后的血培养检出?会有所下?也有研究表明在血培养瓶中添加的树脂或活性碳可以吸附或中和抗生素检出?比标准血培养瓶会有所提升但是在血培养瓶中添加的树脂或活性碳时污染菌的分离?亦会增加产品?贵少见细菌及苛养菌弯曲菌campylobacter转种时需微嗜氧环境孵育至少48小时才可见菌落少见细菌及苛养菌慢生长转种需要用支原体培养基sp4葡萄?培养基ph45结果报告药敏试验结果报告阳性血液培养的早期报告使用适当抗微生物制剂治疗避免抗药性菌株产生及?低病患死亡?提供适当次培养培养基及孵育环境结果报告其他结果报告初步报告结果与最终结果?吻合必须在书面报告上注明并提供详情污染问题对于有疑问的培养结果的临床意义判读如果是没有第二套同一个病人的血培养中发现同样的细菌判断血培养污染其它辅助检查的情况阳性血培养的判断真性菌血症truebacteremia
clsi血培养推荐指南教学课件ppt
根据质量改进方案，制定详细的实施计划和时间表，明确各项任务的责任人和完成时间。
06
clsi血培养的临床应用
1
临床应用概述
2
3
CLSI血培养临床应用旨在提供准确、快速、有效的检测方法，以帮助医生早期诊断和治疗血流感染（BSI）。
BSI是一种严重的感染性疾病，具有较高的死亡率和并发症发生率，而血培养是诊断BSI的金标准。
CLSI血培养临床应用在提高检测准确性和缩短检测时间方面具有重要优势，有利于医生及时做出诊断和制定治疗方案。
一名患者因持续发热和白细胞计数升高入院，医生采集血液样本进行CLSI血培养检测。检测结果显示，患者感染了革兰氏阴性杆菌，医生根据检测结果制定了相应的治疗方案，患者的病情得到了有效控制。
案例一
CLSI血培养推荐指南旨在为实验室提供有关血培养检测的标准化和优化方法，提高检测质量和患者诊治水平。
指南涵盖了血培养采样、实验室检测、结果解读和报告等方面的推荐意见。
指南概览
1
指南细节
2
3
针对不同年龄段、病情的疑似感染患者，建议最佳的采样时机和采血量。
采样指征
详细规定了样品处理、增菌培养、自动化检测和手工操作等步骤的标准化操作流程。
clsi血培养常见问题及解决方案
血培养操作不规范
采样方法不当，培养基选择不当
血培养采样不当
采样前未充分准备，采样量不足或过多
血培养结果不准确
培养基污染，培养过程中出现假阳性或假阴性
常见问题分析
充分准备，适量采样，注意采样方法和时间
血培养采样改进
血培养操作优化
血培养结果验证
选择合适的培养基和采样方法，规范操作流程
02
与传统血培养方法相比，CLSI血培养的临床应用可提高检出率、减少假阳性率、缩短检测时间，并降低漏检率。
06
clsi血培养的临床应用
1
临床应用概述
2
3
CLSI血培养临床应用旨在提供准确、快速、有效的检测方法，以帮助医生早期诊断和治疗血流感染（BSI）。
BSI是一种严重的感染性疾病，具有较高的死亡率和并发症发生率，而血培养是诊断BSI的金标准。
CLSI血培养临床应用在提高检测准确性和缩短检测时间方面具有重要优势，有利于医生及时做出诊断和制定治疗方案。
一名患者因持续发热和白细胞计数升高入院，医生采集血液样本进行CLSI血培养检测。检测结果显示，患者感染了革兰氏阴性杆菌，医生根据检测结果制定了相应的治疗方案，患者的病情得到了有效控制。
案例一
CLSI血培养推荐指南旨在为实验室提供有关血培养检测的标准化和优化方法，提高检测质量和患者诊治水平。
指南涵盖了血培养采样、实验室检测、结果解读和报告等方面的推荐意见。
指南概览
1
指南细节
2
3
针对不同年龄段、病情的疑似感染患者，建议最佳的采样时机和采血量。
采样指征
详细规定了样品处理、增菌培养、自动化检测和手工操作等步骤的标准化操作流程。
clsi血培养常见问题及解决方案
血培养操作不规范
采样方法不当，培养基选择不当
血培养采样不当
采样前未充分准备，采样量不足或过多
血培养结果不准确
培养基污染，培养过程中出现假阳性或假阴性
常见问题分析
充分准备，适量采样，注意采样方法和时间
血培养采样改进
血培养操作优化
血培养结果验证
选择合适的培养基和采样方法，规范操作流程
02
与传统血培养方法相比，CLSI血培养的临床应用可提高检出率、减少假阳性率、缩短检测时间，并降低漏检率。
血培养的原则和规程;批准指南的解读
血培养的原则和规程； 批准指南的解读
中国医科大学附属盛京医院 孙继梅
内容提纲
抗菌药物临床应用国家新政策 血培养批准指南的引用 临床微生物检验 血培养采集指征 血培养的原则和规程
合理应用抗菌药物
全球细菌耐药现状 我国细菌耐药现状 国家的法律法规 临床抗菌药物应用指导原则 抗菌药物临床应用专项整治活动 抗菌药物临床应用管理办法
实验室与临床沟通是关键
医生
检验 人员
护士
微生物与临床密不可分
抗感染之路任重道远
抗菌药物敏感试验方法
纸片扩散法 抑菌圈直径 稀释法 最小抑菌浓度（MIC） 肉汤稀释法（常量、微量） 琼脂稀释法 E-test法 仪器法 肉汤稀释法 优点：操作简便、快速，结果准确、灵敏 专家系统：罕见耐药表型的提示 缺点：阈值药敏，流行病学调查和比较
明确抗菌药物临床应用管理责任制 开展抗菌药物临床应用基本情况调查 建立完善抗菌药物临床应用技术支撑体系 严格落实抗菌药物分级管理制度 建立抗菌药物遴选和定期评估制度，加强抗菌 药物购用管理 加大抗菌药物临床应用相关指标控制力度 定期开展抗菌药物临床应用监测与评估
专项整治动重点内容
加强临床微生物标本检测和细菌耐药监测
正确评价细菌培养结果
引起人类感染的微生物种类繁多，生物学特性 各异 没有一种检测方法能检测所有的微生物，更没 有一种培养基能解决临床所有问题 主动了解患者病史，根据临床症状和初步诊断 选择适当的检测方法，才能更好地为临床提供 服务 检验与临床的合作和交流非常重要! 根据药敏试验结果合理选择抗菌药物
正确评价细菌培养结果
中国医科大学附属盛京医院 孙继梅
内容提纲
抗菌药物临床应用国家新政策 血培养批准指南的引用 临床微生物检验 血培养采集指征 血培养的原则和规程
合理应用抗菌药物
全球细菌耐药现状 我国细菌耐药现状 国家的法律法规 临床抗菌药物应用指导原则 抗菌药物临床应用专项整治活动 抗菌药物临床应用管理办法
实验室与临床沟通是关键
医生
检验 人员
护士
微生物与临床密不可分
抗感染之路任重道远
抗菌药物敏感试验方法
纸片扩散法 抑菌圈直径 稀释法 最小抑菌浓度（MIC） 肉汤稀释法（常量、微量） 琼脂稀释法 E-test法 仪器法 肉汤稀释法 优点：操作简便、快速，结果准确、灵敏 专家系统：罕见耐药表型的提示 缺点：阈值药敏，流行病学调查和比较
明确抗菌药物临床应用管理责任制 开展抗菌药物临床应用基本情况调查 建立完善抗菌药物临床应用技术支撑体系 严格落实抗菌药物分级管理制度 建立抗菌药物遴选和定期评估制度，加强抗菌 药物购用管理 加大抗菌药物临床应用相关指标控制力度 定期开展抗菌药物临床应用监测与评估
专项整治动重点内容
加强临床微生物标本检测和细菌耐药监测
正确评价细菌培养结果
引起人类感染的微生物种类繁多，生物学特性 各异 没有一种检测方法能检测所有的微生物，更没 有一种培养基能解决临床所有问题 主动了解患者病史，根据临床症状和初步诊断 选择适当的检测方法，才能更好地为临床提供 服务 检验与临床的合作和交流非常重要! 根据药敏试验结果合理选择抗菌药物
正确评价细菌培养结果
血培养原则(CLSI).
实验室质量保证(QA • • • • • • • • • • • • • 检查中质量保证对下列每项主要内容具备实验室步骤微生物检测的步骤菌株鉴定和相关菌株的药敏试验方法重要信息如染色结果初步鉴定包括对初步结实验室质量保证(QA ，：、；果回顾的重要。
报告和初步结果不一致时的实验室主管检阅检测结果可靠性证明结果的解释-培养阴性和阳性结果的标准与临床意义操作手册必须包括：鉴定潜在的假阴性、假阳性结果，以及用于正确解释结果的信息之其他原因，如：标本数量、是否在培养前已使用抗生素、苛养菌培养阴性等因素
实验室质量保证(QA • • • • • • • • • • • • • • 检查后质量保证报告血培养的结果，在报告前必须被正确的校验血培养的结果使用的用语必须标准且清楚，尽量避免使用简语实验室质量保证(QA 验证后的结果，需按照实验室的拟定流程立即向临床沟通实验室主管需每日查看更正的报告，更正报告的总结必须被定期检查与检讨标本管理包括：记录保存、培养基储存、有效的补救方法、保存期限、储存记录的销毁等咨询实验室的医学主管应能根据不同的临床情况，进行检验结果解释
的讨论与判读；亦可以合适的信息和建议进行其他检测，以协助血培养结果的准确解释。
血培养的采集、运送、培养指导原则
采血频率
3.急性心内膜炎：抗生素治疗或更换前1-2h内3 个部位采集3套血培养。
4.不明原因的发热：24h内不同部位采集2-3套 血培养，每次间隔≥1h。 如24-48h阴性，再次采集2-3套或更多套血培 养。
采血频率
5.婴幼儿： （1）采血量不能超过全血量的1%。 （2）一般只抽一瓶需氧瓶进行培养，无需常
成人：推荐每个血培养瓶应加的血量为10ml， 血液和肉汤比为1：5～10（体积：体积）。
新生儿、婴幼儿1-2ml。儿童：因很难获得 大量的血液，一般静脉采血3～5ml。
不同于成人血培养，由于厌氧菌感染极少 发生在儿童病人，因此建议只采用需氧瓶。 厌氧培养只考虑针对特殊的高危群体。
皮肤消毒参照成人的方法，新生儿除外。 儿童的采血量为不超过总血容量的1%。
阳性培养结果：最终革兰染色结果
最终鉴定结果
最终药敏结果
其他
十六、污染问题
每个实验室应有准则处理和报告可能的血培养污染 实验室由标本采集准则将污染最小化 可接受的污染概率在2%以下，即使是最佳的标本采
集流程也不能完全避免污染 常见的污染细菌也可能是引起感染的病原菌 很多情况下，可能的污染会来自一个或一套血培养瓶 如果没有第二套血培养，要给出有疑问的培养结果的
八、培养基
多种商业化的培养基可用于血培养 含不同改良配方的培养基可改善检出率，
因为没有一种单一的培养基可以检出所有 的细菌
九、添加剂
树脂、活性炭：吸附抗生素有助于对已经接受抗 生素治疗病人血培养的检出率 。
抗凝剂 抗凝剂中聚乙烯磺酸钠（SPS）：最常用； 能抑
制血清和吞噬细胞的抗细菌反应。 其他抗凝剂如肝素，EDTA和枸橼酸钠则对微生
CLSI血培养推荐指南
方法(fāngfǎ)和操作步骤 导管相关性的血流感染的血培养
• CRBSI是医院相关性最常见(chánɡ 的原因 jiàn)
• 美国每年有25万病人发生 • 死亡率12-35%
陈民钧
12
第十二页，共四十六页。
导管(dǎoguǎn)相关性菌血症 BSOP 3715
(CRBSI)
（IVCBSI）
• 导管种类：非隧道式长期(chángqī)放置导管、隧道式短期 放置导管
人工瓣膜心内膜炎（PVE）
– 人工瓣膜病人的2%得PVE – 占全体心内膜炎病人的20% – PVE多见于人工主动脉瓣 – PVE手术后的任何时间均可发
生，越后越少，细菌种类(zhǒnglèi) 也不同
– 早期PVE（几个月内）死亡率高于 晚期PVE （几年后）
– 多为医院感染耐药株
PVE 常见(chánɡ jiàn)病原 菌
actinomycetemcomitans – Cardiobacterium hominis – Eikenella corrodens – Kingella kingae – 艾滋病病人的Bartonella spp.
陈民钧
27
第二十七页，共四十六页。
方法(fāngfǎ)和操作步骤
感染性心内膜炎（IE）的血流感染
方法(fāngfǎ)和操作步骤 感染性心内膜炎的血流感染特殊要求
• 取血的血培养瓶数 • 取一次、一瓶血显然是不对的
– 血量不够 – 血培养的污染菌通常在两套血培养中只有一瓶发生 – 取两套血培养有助于医生鉴别真假阳性(yángxìng)
• 3-5套血培养为好 • 若阴性，要怀疑、重新考虑此诊断
陈民钧
• 2005-09-08出版(chūbǎn)：BSOP 37 Issue 5
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ຫໍສະໝຸດ 采血量在需氧和厌氧瓶中的分配
• 对于常规的血培养，建议采取包括需氧 和厌氧的一套血培养瓶；将采集的血液 等量分配于需氧和厌氧血培养瓶中
• 当采血量不能满足推荐的血培养瓶需求 血量时，首先应进行接种需氧血培养瓶， 其余血量再接种厌氧血培养瓶
• 菌血症病源菌常见为需氧菌及兼性厌氧菌
血培养之皮肤消毒和污染的预防
血培养的标本拒收标准
• 卷标错误或在血培养瓶上未贴标签 • 破损的或渗漏的血培养瓶 • 血液凝固的血培养瓶 • 使用除了SPS抗凝剂外的血液采集管
血培养的方法和步骤
• 检出率的重要影响因素 • 血量 • 血液-肉汤比例 • 培养基 • 添加物 • 孵育环境 • 摇动 • 侦测频率与次转种
血培养的血液送检量
导管相关性血流感染CRBSI-2
• 此方式适用于希望保留留置导管的病人
•
非贯通和贯通的中心静脉导管及静脉留置口(方法一)
•
由疑似CRBSI病人采集至少2套血培养，其中至少一套来自外周静脉，并做
血培养的采血量
• 血培养中采集血液的量，是影响细菌或真菌血症 的侦测最重要的因素，特别是成年患者
• 血培养的采血量 • 对于成年患者，每套血培养推荐的采血量为 • 20至30 mL；当采血量由2 mL提升至30 mL • 时，血培养阳性率会有3%/ mL的效果 • 对于婴幼儿患者，采血量不超过患者总血量 • 的1％
血培养用培养基添加剂
• 抗凝剂、树脂及活性碳 • 0.025-0.05％SPS是最常添加于血培养瓶中的血液抗凝 • 剂，它可以中和溶解酵素(lysozyme)、抑制细胞吞噬作 • 用(phagocytosis)、不活化部分抗生素及抑制部分补体 • 作用；其显示对革兰阳性及阴性菌有增加和检出率和 • 检出速度的作用 • 其他血液抗凝剂，如：肝素，EDTA和枸橼酸则对微 • 生物有毒性，因此不能被用于血培养标本采集和培养 • 厂家于血培养瓶中添加抗生素吸附剂，有助于对已经 • 接受抗生素治疗病人血培养的病源菌，及部分葡萄球 • 菌与酵母菌的检出率
血培养标本采集和运输
• 血培养时机 • 血培养数量 • 血培养采血量 • 血培养在需氧和厌氧瓶中的分配 • 血培养皮肤准备和污染预防 • 血培养采集部位 • 血培养拒收标准
血培养的时机
• 根据研究表明：细菌通常在病人寒战和 发烧前1小时进入血流
• 建议考虑到方便操作上的原因，常规血 培养应于病人寒战和发烧时，于30-60分 钟内或同时于不同部位采集2-3套血培养； 除非有怀疑感染性心内膜炎或其他静脉 内感染，如：导管相关性感染时，始可 分开时段采集
血培养的血液与肉汤的比例
• 正常人的血液中，含有可以抑制血流中细菌的生长的某些 物质。因此用于培养的血液与肉汤的比例须适当，以便稀 释和减少这些物质的抑制细菌作用
• 推荐血培养的血液与肉汤的比例是1:5-1:10，以避免假 • 阴性结果产生 • 某些商业化的血培养系统，其推荐比例低于该比例也 • 是可取的；因为该商业化培养基中，添加其他成分以结合
• 自静脉而非动脉采集血液进行血培养 • 自静脉植入装置采集血液进行血培养，如：留置导 管或留置口的血培养，与自静脉采集血液进行血培养比较，
会伴有高的污染率 • 各类血管导管注射帽 • 如果血培养是通过静脉植入管采集的，应同时自外 周静脉采集血液进行血培养，以协助判读血培养阳性结果
如果血培养是通过静脉植入管采集的则不必弃去起始部分 的血液或使生理盐水冲洗管道，以去除残留的肝素或其他 抗凝剂
内容
• 范围
•
标准防护措施
•
血培养的临床重要性
•
标本采集和运输
•
时机
•
方法和步骤
•
检出率的重要影响因素
•
方法
•
真菌
•
分枝杆菌
•
数量
•
采血量
•
在需氧和厌氧瓶中的分配
•
皮肤准备和污染预防
•
采集
•
拒收标准
方法和步骤 检出率的重要影响因素 方法 真菌 分枝杆菌特殊话题 结果报告 污染问题 安全问题 质量保证 检查前 检查过程中 检查后
或去活化血液中抑制物质的作用 • 儿童的血培养须采用专用儿童瓶，以符合儿童的采血 • 量的血液与肉汤的比例要求；但此要求的研究证明资料较
少
血培养用培养基
• 多种商业化的肉汤培养基配方，可用于人工及自 动化血培养系统
• 使用含不同改良配方的商用培养基，可以改善 • 检出率。因为没有一种培养基可以检出所有的 • 细菌、真菌及分枝杆菌；故结合使用多种不同 • 配方的培养基，可以提升病源菌检出率 • 质控要求 • 遵循CLSI M22指南
• 病原菌(细菌和真菌)在血培养中的检出率，和血液的送检 量有直接相关
• 成人血液中每毫升的菌落形成单位(CFU)很低，是检出 率(yield)的相关因素； 因此增加送检血液量可以提升检出 率
• 儿童的血液中每毫升的菌落形成单位(CFU)高于成人， • 因此送检血量应参照总血容量和年龄 • 当送检的血量少于推荐量时，实验室仍应进行培养， • 但必须通知临床单位，告知其送检血量低于标准并可 • 能导致敏感度下降 • 监控血培养的送检血量和提供临床回馈，是实验室间 • 质评的一项重要指标；以提升病人照顾质量与医疗资源
• 实验室必须提供标准的血培养采集步骤，以有效的将污染情况降至 最低，可以接受的污染率为≦3％
血培养标本的转运
• 被接种的血培养瓶应立即被送往实验室， • 任何延误送入自动连续监测血培养仪的行
为，将会延误或阻止检测细菌的生长 • 被接种的血培养瓶保留在室温不得超过 • 数小时 • 接种後血培养瓶后不得被冷藏或冷冻
血培养的特殊话题
• 儿童血培养 • 导管相关性血流感染CRBSI-1 • 导管相关性血流感染CRBSI 2 • 血培养的特殊话题 • CRBSI- 导管相关性血流感染CRBSI-3 • 感染性心内膜炎 • 已接受抗生素治疗的病人 • 少见细菌及苛养菌
婴幼儿血培养
• 婴幼儿由于免疫系统发展未成熟，所以血流感 • 染时症状轻微且无特异性，包括：呼吸急促、 • 嗜睡、活动力不佳、吸食能力变差、黄疸、腹 • 泻、发绀等，与成人感染的临床表现不同 • 不同于成人血培养，由于厌氧菌感染极少发生 • 在婴幼儿病患，因此建议只采用需氧瓶；厌氧 • 培养只考虑针对特殊的高危险群体 • 皮肤消毒参照成人的方法，除新生儿外 • 儿童的采血量为不超过总血容量的1％
血培养的孵育条件
• 温度：35-37℃ • 环境 • 需氧瓶充填二氧化碳，厌氧瓶充填二氧化碳与氮气 • 时间 • 尽管有研究表明：95-97％的有临床意义的细菌，会在3-4天被部分 • 系统检出；但仍然推荐自动化血培养系统采用5天的孵育周期 • 摇动 • 孵育的起始24小时得摇动，有助于需氧瓶内病源菌的检出率 • 监测的间隔 • 传统的血培养方法，须每日至少一次的目视检查血培养瓶，及进行 • 盲传与最终转种 • 连续性监测的自动化血培养系统，每隔10-24分钟会检测一次；当获 • 得阳性培养结果时，需进行革兰氏染色与转种；监测至少5天仍然是 • 阴性的血培养，常规或盲传于是不必要的
• 碘酊、次氯酸和洗必太的消毒效果要优于碘伏 • 碘酊和洗必太的消毒效果大致相当 • 碘酊需作用30秒以发挥杀菌效能
• 碘伏需作用1.5-2分钟以发挥杀菌效能 • 洗必太发挥杀菌效能的作用时间和碘酊一样， • 但是由于没有伴随的过敏反应，所以使用后不 必擦去；但不能被用于小于2个月的婴儿皮肤消毒
血培养采集部位
血培养的临床重要性
• 血流感染诊断的重要性 • 血液循环内存在活的微生物，对病人的感染诊断与 • 愈后有密切的相关 • 阳性血培养代表或确认病人血流感染的病源菌，同 • 时可以提供病源菌进行药敏试验及适当抗生素治疗 • 血流感染愈后的重要性 • 血培养阳性代表病人的防御系统出问题，无法移除 • 病源菌 • 阳性血培养的血流感染病源菌种类亦可以提供预测 • 病人愈后的重要信息
血培养无菌皮肤准备
• 在皮肤消毒前，血培养瓶的橡皮塞需使用70％异丙基酒精消毒并干燥
• 采血部位皮肤消毒步骤
• 先使用70％异丙基酒精消毒并干燥再进行正式消毒步骤
•
整个采集血液过程严格遵从无菌操作，除非有戴无菌手套，
否则不允许在消毒后按压采血的静脉
• 许多研究表明：采血后与接种是否需要换针头，并无明显的污染率 差异。虽有统计分析表明，不换针头的污染率有些微高；但为避免针 扎事件产生，仍建议采血后不需要换针头
血培养的时机
菌血症的菌量
寒颤
血培养
体温
0
30
60
时间(分)
血培养的数量
• 2004年Cockerill’s研究表明：当每套血培养采血20 mL ，且使用自动 化血培养系统时
• 一套检出率：65％ • 二套检出率：80％ • 三套检出率：96％ • 感染性心内膜炎第一套检出率90％ ％ • 血培养的数量 • 目前的指南推荐采集2-3套血培养 • 成年病人单一套的血培养从不被建议操作，因为这是不合适的数量， • 培养结果将很难做出临床解释 • 在采取血培养后的2-5天内，不需要再重复采取血培养，因为进行治 • 疗后的2-5天血液中的感染细菌不会马上消失 • 大部份细菌或真菌血症感染的移除，是以临床的症状表现来评估， • 唯有两个例外 • 感染性心内膜炎 • 金葡感染菌血症但非感染性心内膜炎相关
血培养的培养方法
• 手工方法 • 传统法 • 固体-液体双相瓶 • 溶血-离心法 • 全自动血培养系统 • 监测细菌代谢后，培養瓶中增加的二氧化碳气体浓度 • 传感器 • 颜色变化 • 荧光变化 • 压力变化
真菌和分枝杆菌血培养方法
• 真菌 • 手工方法 • 营养肉汤瓶 • 固体-液体双相瓶 • 溶血-离心法：培养双型性或菌丝型霉菌建议使用 • 全自动血培养系统 • 最佳的真菌检出，是在需养瓶的培养基中 • 分枝杆菌 • 提高检出率，培养基需要添加剂及长时间孵育 • 全自动血培养系统 • 固体-液体双相瓶的检出时间，要慢于肉汤法的全自 • 动血培养系统
• 对于常规的血培养，建议采取包括需氧 和厌氧的一套血培养瓶；将采集的血液 等量分配于需氧和厌氧血培养瓶中
• 当采血量不能满足推荐的血培养瓶需求 血量时，首先应进行接种需氧血培养瓶， 其余血量再接种厌氧血培养瓶
• 菌血症病源菌常见为需氧菌及兼性厌氧菌
血培养之皮肤消毒和污染的预防
血培养的标本拒收标准
• 卷标错误或在血培养瓶上未贴标签 • 破损的或渗漏的血培养瓶 • 血液凝固的血培养瓶 • 使用除了SPS抗凝剂外的血液采集管
血培养的方法和步骤
• 检出率的重要影响因素 • 血量 • 血液-肉汤比例 • 培养基 • 添加物 • 孵育环境 • 摇动 • 侦测频率与次转种
血培养的血液送检量
导管相关性血流感染CRBSI-2
• 此方式适用于希望保留留置导管的病人
•
非贯通和贯通的中心静脉导管及静脉留置口(方法一)
•
由疑似CRBSI病人采集至少2套血培养，其中至少一套来自外周静脉，并做
血培养的采血量
• 血培养中采集血液的量，是影响细菌或真菌血症 的侦测最重要的因素，特别是成年患者
• 血培养的采血量 • 对于成年患者，每套血培养推荐的采血量为 • 20至30 mL；当采血量由2 mL提升至30 mL • 时，血培养阳性率会有3%/ mL的效果 • 对于婴幼儿患者，采血量不超过患者总血量 • 的1％
血培养用培养基添加剂
• 抗凝剂、树脂及活性碳 • 0.025-0.05％SPS是最常添加于血培养瓶中的血液抗凝 • 剂，它可以中和溶解酵素(lysozyme)、抑制细胞吞噬作 • 用(phagocytosis)、不活化部分抗生素及抑制部分补体 • 作用；其显示对革兰阳性及阴性菌有增加和检出率和 • 检出速度的作用 • 其他血液抗凝剂，如：肝素，EDTA和枸橼酸则对微 • 生物有毒性，因此不能被用于血培养标本采集和培养 • 厂家于血培养瓶中添加抗生素吸附剂，有助于对已经 • 接受抗生素治疗病人血培养的病源菌，及部分葡萄球 • 菌与酵母菌的检出率
血培养标本采集和运输
• 血培养时机 • 血培养数量 • 血培养采血量 • 血培养在需氧和厌氧瓶中的分配 • 血培养皮肤准备和污染预防 • 血培养采集部位 • 血培养拒收标准
血培养的时机
• 根据研究表明：细菌通常在病人寒战和 发烧前1小时进入血流
• 建议考虑到方便操作上的原因，常规血 培养应于病人寒战和发烧时，于30-60分 钟内或同时于不同部位采集2-3套血培养； 除非有怀疑感染性心内膜炎或其他静脉 内感染，如：导管相关性感染时，始可 分开时段采集
血培养的血液与肉汤的比例
• 正常人的血液中，含有可以抑制血流中细菌的生长的某些 物质。因此用于培养的血液与肉汤的比例须适当，以便稀 释和减少这些物质的抑制细菌作用
• 推荐血培养的血液与肉汤的比例是1:5-1:10，以避免假 • 阴性结果产生 • 某些商业化的血培养系统，其推荐比例低于该比例也 • 是可取的；因为该商业化培养基中，添加其他成分以结合
• 自静脉而非动脉采集血液进行血培养 • 自静脉植入装置采集血液进行血培养，如：留置导 管或留置口的血培养，与自静脉采集血液进行血培养比较，
会伴有高的污染率 • 各类血管导管注射帽 • 如果血培养是通过静脉植入管采集的，应同时自外 周静脉采集血液进行血培养，以协助判读血培养阳性结果
如果血培养是通过静脉植入管采集的则不必弃去起始部分 的血液或使生理盐水冲洗管道，以去除残留的肝素或其他 抗凝剂
内容
• 范围
•
标准防护措施
•
血培养的临床重要性
•
标本采集和运输
•
时机
•
方法和步骤
•
检出率的重要影响因素
•
方法
•
真菌
•
分枝杆菌
•
数量
•
采血量
•
在需氧和厌氧瓶中的分配
•
皮肤准备和污染预防
•
采集
•
拒收标准
方法和步骤 检出率的重要影响因素 方法 真菌 分枝杆菌特殊话题 结果报告 污染问题 安全问题 质量保证 检查前 检查过程中 检查后
或去活化血液中抑制物质的作用 • 儿童的血培养须采用专用儿童瓶，以符合儿童的采血 • 量的血液与肉汤的比例要求；但此要求的研究证明资料较
少
血培养用培养基
• 多种商业化的肉汤培养基配方，可用于人工及自 动化血培养系统
• 使用含不同改良配方的商用培养基，可以改善 • 检出率。因为没有一种培养基可以检出所有的 • 细菌、真菌及分枝杆菌；故结合使用多种不同 • 配方的培养基，可以提升病源菌检出率 • 质控要求 • 遵循CLSI M22指南
• 病原菌(细菌和真菌)在血培养中的检出率，和血液的送检 量有直接相关
• 成人血液中每毫升的菌落形成单位(CFU)很低，是检出 率(yield)的相关因素； 因此增加送检血液量可以提升检出 率
• 儿童的血液中每毫升的菌落形成单位(CFU)高于成人， • 因此送检血量应参照总血容量和年龄 • 当送检的血量少于推荐量时，实验室仍应进行培养， • 但必须通知临床单位，告知其送检血量低于标准并可 • 能导致敏感度下降 • 监控血培养的送检血量和提供临床回馈，是实验室间 • 质评的一项重要指标；以提升病人照顾质量与医疗资源
• 实验室必须提供标准的血培养采集步骤，以有效的将污染情况降至 最低，可以接受的污染率为≦3％
血培养标本的转运
• 被接种的血培养瓶应立即被送往实验室， • 任何延误送入自动连续监测血培养仪的行
为，将会延误或阻止检测细菌的生长 • 被接种的血培养瓶保留在室温不得超过 • 数小时 • 接种後血培养瓶后不得被冷藏或冷冻
血培养的特殊话题
• 儿童血培养 • 导管相关性血流感染CRBSI-1 • 导管相关性血流感染CRBSI 2 • 血培养的特殊话题 • CRBSI- 导管相关性血流感染CRBSI-3 • 感染性心内膜炎 • 已接受抗生素治疗的病人 • 少见细菌及苛养菌
婴幼儿血培养
• 婴幼儿由于免疫系统发展未成熟，所以血流感 • 染时症状轻微且无特异性，包括：呼吸急促、 • 嗜睡、活动力不佳、吸食能力变差、黄疸、腹 • 泻、发绀等，与成人感染的临床表现不同 • 不同于成人血培养，由于厌氧菌感染极少发生 • 在婴幼儿病患，因此建议只采用需氧瓶；厌氧 • 培养只考虑针对特殊的高危险群体 • 皮肤消毒参照成人的方法，除新生儿外 • 儿童的采血量为不超过总血容量的1％
血培养的孵育条件
• 温度：35-37℃ • 环境 • 需氧瓶充填二氧化碳，厌氧瓶充填二氧化碳与氮气 • 时间 • 尽管有研究表明：95-97％的有临床意义的细菌，会在3-4天被部分 • 系统检出；但仍然推荐自动化血培养系统采用5天的孵育周期 • 摇动 • 孵育的起始24小时得摇动，有助于需氧瓶内病源菌的检出率 • 监测的间隔 • 传统的血培养方法，须每日至少一次的目视检查血培养瓶，及进行 • 盲传与最终转种 • 连续性监测的自动化血培养系统，每隔10-24分钟会检测一次；当获 • 得阳性培养结果时，需进行革兰氏染色与转种；监测至少5天仍然是 • 阴性的血培养，常规或盲传于是不必要的
• 碘酊、次氯酸和洗必太的消毒效果要优于碘伏 • 碘酊和洗必太的消毒效果大致相当 • 碘酊需作用30秒以发挥杀菌效能
• 碘伏需作用1.5-2分钟以发挥杀菌效能 • 洗必太发挥杀菌效能的作用时间和碘酊一样， • 但是由于没有伴随的过敏反应，所以使用后不 必擦去；但不能被用于小于2个月的婴儿皮肤消毒
血培养采集部位
血培养的临床重要性
• 血流感染诊断的重要性 • 血液循环内存在活的微生物，对病人的感染诊断与 • 愈后有密切的相关 • 阳性血培养代表或确认病人血流感染的病源菌，同 • 时可以提供病源菌进行药敏试验及适当抗生素治疗 • 血流感染愈后的重要性 • 血培养阳性代表病人的防御系统出问题，无法移除 • 病源菌 • 阳性血培养的血流感染病源菌种类亦可以提供预测 • 病人愈后的重要信息
血培养无菌皮肤准备
• 在皮肤消毒前，血培养瓶的橡皮塞需使用70％异丙基酒精消毒并干燥
• 采血部位皮肤消毒步骤
• 先使用70％异丙基酒精消毒并干燥再进行正式消毒步骤
•
整个采集血液过程严格遵从无菌操作，除非有戴无菌手套，
否则不允许在消毒后按压采血的静脉
• 许多研究表明：采血后与接种是否需要换针头，并无明显的污染率 差异。虽有统计分析表明，不换针头的污染率有些微高；但为避免针 扎事件产生，仍建议采血后不需要换针头
血培养的时机
菌血症的菌量
寒颤
血培养
体温
0
30
60
时间(分)
血培养的数量
• 2004年Cockerill’s研究表明：当每套血培养采血20 mL ，且使用自动 化血培养系统时
• 一套检出率：65％ • 二套检出率：80％ • 三套检出率：96％ • 感染性心内膜炎第一套检出率90％ ％ • 血培养的数量 • 目前的指南推荐采集2-3套血培养 • 成年病人单一套的血培养从不被建议操作，因为这是不合适的数量， • 培养结果将很难做出临床解释 • 在采取血培养后的2-5天内，不需要再重复采取血培养，因为进行治 • 疗后的2-5天血液中的感染细菌不会马上消失 • 大部份细菌或真菌血症感染的移除，是以临床的症状表现来评估， • 唯有两个例外 • 感染性心内膜炎 • 金葡感染菌血症但非感染性心内膜炎相关
血培养的培养方法
• 手工方法 • 传统法 • 固体-液体双相瓶 • 溶血-离心法 • 全自动血培养系统 • 监测细菌代谢后，培養瓶中增加的二氧化碳气体浓度 • 传感器 • 颜色变化 • 荧光变化 • 压力变化
真菌和分枝杆菌血培养方法
• 真菌 • 手工方法 • 营养肉汤瓶 • 固体-液体双相瓶 • 溶血-离心法：培养双型性或菌丝型霉菌建议使用 • 全自动血培养系统 • 最佳的真菌检出，是在需养瓶的培养基中 • 分枝杆菌 • 提高检出率，培养基需要添加剂及长时间孵育 • 全自动血培养系统 • 固体-液体双相瓶的检出时间，要慢于肉汤法的全自 • 动血培养系统