利用CountessIIFL自动细胞计数仪
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3. 获取一次性或可重复使用的 Countess 载玻片。
实验方案——培养设置和计数 1. 采 集 真 核 细 胞 悬 液 、 准 备 CellEvent
Caspase-3/7 Green 检测试剂和 SYTOX Red 死细胞染料。
2. 参照 CellEvent Caspase 3/7 Green 检测试剂 提供的手册染色细胞样本。
一般方法
材料 Countess II FL 自 动 细胞 计 数 仪 (货 号 ：
AMQAF1000)
Invitrogen™ Countess™ 细胞计数板 (货号： C10228) 或 Invitrogen™ Countess™ II FL 可 重复使用的载玻片 (货号：A25750)
EVOS 光立方，GFP (货号：AMEP4651) 和 Cy5 (货号：AMEP4656)
3. 参照 SYTOX Red 死细胞染料提供的手册染色 细胞样本。
4. 在 Countess 计数板中加入 10 μL 染色细胞样 本。
5. 将 Countess 计数板插入 Countess II FL 自动 细胞计数仪上样口，开始自动聚焦。
6. 调整荧光光线强度，使背景最小化且信号最大 化。
CellEvent Caspase-3/7 Green 检测试剂 (货 号：C10423)
SYTOX Red 死细胞染料 (货号：S34859)
实验方案——仪器设置 1. 打开 Countess II FL 自动细胞计数仪，安装
GFP 和 Cy5 EVOS 光立方。
2. 安装适当的载玻片支架，用于放置一次性或可 重复使用的载玻片。
应用指南
Countess II FL 自动细胞计数仪
利用 Countess II FL 自动细胞计数仪 进行凋亡细胞的荧光评估
简介 细胞群体的细胞健康评估能力是许多细胞和分子 生物学实验室中的基本且重要的评估参数。因此， 了解死细胞的数量即成为关键信息。要回答上述基 本 问 题 ， 可 使 用 存 活 率 染 料 ( 如 Invitrogen™ Molecular Probes™ SYTOX™ Red 死细胞染料) 及 检 测 caspase 活 性 的 细 胞 凋 亡 指 示 剂 ( 如 Invitrogen™ Molecular Probes™ CellEvent™ Caspase-3/7 Green 检测试剂) 对目的细胞进行染 色。将上述染料与配备 GFP 和 Cy®5 EVOS™ 光 立方的 Invitrogen™ Countess™ II FL 自动细胞计 数仪结合使用，可以快速简单地获取细胞凋亡数据 及细胞存活率数据。
要使用 CellEvent Caspase 3/7 Green 检测试剂， 只需在对照和处理细胞中加入检测试剂，孵育 30 分钟，然后观察。表达活化 caspase-3/7 的凋亡细 胞可显示亮绿色的细胞核，不表达活化 caspase3/7 的细胞则几乎无荧光信号。
SYTOX 死细胞染料无法穿过完整的细胞膜，它们 与 dsDNA 结合后会增加荧光强度，是我们最明亮 的死细胞染料之一。只需将 SYTOX 死细胞染料加 入细胞并观察即可，它在水溶性培养基中不发出荧 光，因此无需额外的清洗步骤。这些染料有多种单 色形式可供选择，适用于很多滤光片组。
如需了解更多信息，请登录/countess
仅供研究使用。不得用于诊断。 © 2015 Thermo Fisher Scientific Inc. 版权所有。除特别说明外， 所有商标均为Thermo Fisher Scientific及其附属公司的财产。Cy是GE Healthcare的商标。 CO210384 0615
与 SYTOX Red 死细胞染料短暂孵育后，采用传统 的 Cy5 滤光片组激发并检测，死细胞的核酸可发 出明亮的红色荧光。SYTOX Red 死细胞染料不同 于采用 488 nm 光线激发的死细胞探针，如 7-AAD 和碘化丙啶 (PI)。此外，SYTOX Red 死细胞染料 的发射通道仅有一个，因此最大程度地减少了其与 CellEvent Caspase 3/7 Green 检测试剂的光谱重 叠，简化了工作流程。
图 1. 采用 Countess II FL 自动细胞计数仪计数的凋亡细胞 和死细胞。Countess II FL 自动细胞计数仪配备有 EVOS 光 立方，用于 GFP (货号：AMEP4651) 和 Cy5 (货号： AMEP4656)。使用 0.5 μm 星孢菌素孵育 HeLa 细胞后，采 用 1:400 CellEvent Caspase-3/7 Green 检测试剂 (货号： C10423) 标记细胞，鉴别凋亡细胞 ，然后使用 1:1,000 SYTOX Red 死细胞染料 (货号：S34859) 染色，室温孵育 30 分钟，标记全部死细胞。
图 2. 在 Countess II FL 自动细胞计数仪上使用 CellEvent Caspase-3/7 Gபைடு நூலகம்een 检测试剂和 SYTOX Red 死细胞染料 检测凋亡的 HeLa 细胞。使用标示量的星孢菌素处理 HeLa 细胞，触发细胞凋亡。提高药物处理量可以发现绿色和远红 外信号提升，分别表示细胞凋亡和细胞死亡水平大幅增加。
7. 按下采集 (Capture)。
采用传统的显微镜或细胞仪检测需要一个多小时 ——仅采集初步结果——而现在使用 Countess II FL 自动细胞计数仪只需几分钟。在使用显微镜或流 式细胞仪之前先检查样本，可以节省时间和精力。
细胞凋亡评估
CellEvent Caspase-3/7 Green 检测试剂 (与 RNA 结合时，Ex/Em：502/530 nm) 本身无荧光，DEVD 肽可抑制染料与 DNA 结合。但是在凋亡细胞中， caspase-3/7 活化后，DEVD 肽被切断，使得染料 能够与 DNA 结合，并产生明亮的荧光。染料与 DNA 结 合 时 的 荧 光 发 射 波 长 可 采 用 标 准 的 “FITC”或 GFP 滤光片组观察。
实验方案——培养设置和计数 1. 采 集 真 核 细 胞 悬 液 、 准 备 CellEvent
Caspase-3/7 Green 检测试剂和 SYTOX Red 死细胞染料。
2. 参照 CellEvent Caspase 3/7 Green 检测试剂 提供的手册染色细胞样本。
一般方法
材料 Countess II FL 自 动 细胞 计 数 仪 (货 号 ：
AMQAF1000)
Invitrogen™ Countess™ 细胞计数板 (货号： C10228) 或 Invitrogen™ Countess™ II FL 可 重复使用的载玻片 (货号：A25750)
EVOS 光立方，GFP (货号：AMEP4651) 和 Cy5 (货号：AMEP4656)
3. 参照 SYTOX Red 死细胞染料提供的手册染色 细胞样本。
4. 在 Countess 计数板中加入 10 μL 染色细胞样 本。
5. 将 Countess 计数板插入 Countess II FL 自动 细胞计数仪上样口，开始自动聚焦。
6. 调整荧光光线强度，使背景最小化且信号最大 化。
CellEvent Caspase-3/7 Green 检测试剂 (货 号：C10423)
SYTOX Red 死细胞染料 (货号：S34859)
实验方案——仪器设置 1. 打开 Countess II FL 自动细胞计数仪，安装
GFP 和 Cy5 EVOS 光立方。
2. 安装适当的载玻片支架，用于放置一次性或可 重复使用的载玻片。
应用指南
Countess II FL 自动细胞计数仪
利用 Countess II FL 自动细胞计数仪 进行凋亡细胞的荧光评估
简介 细胞群体的细胞健康评估能力是许多细胞和分子 生物学实验室中的基本且重要的评估参数。因此， 了解死细胞的数量即成为关键信息。要回答上述基 本 问 题 ， 可 使 用 存 活 率 染 料 ( 如 Invitrogen™ Molecular Probes™ SYTOX™ Red 死细胞染料) 及 检 测 caspase 活 性 的 细 胞 凋 亡 指 示 剂 ( 如 Invitrogen™ Molecular Probes™ CellEvent™ Caspase-3/7 Green 检测试剂) 对目的细胞进行染 色。将上述染料与配备 GFP 和 Cy®5 EVOS™ 光 立方的 Invitrogen™ Countess™ II FL 自动细胞计 数仪结合使用，可以快速简单地获取细胞凋亡数据 及细胞存活率数据。
要使用 CellEvent Caspase 3/7 Green 检测试剂， 只需在对照和处理细胞中加入检测试剂，孵育 30 分钟，然后观察。表达活化 caspase-3/7 的凋亡细 胞可显示亮绿色的细胞核，不表达活化 caspase3/7 的细胞则几乎无荧光信号。
SYTOX 死细胞染料无法穿过完整的细胞膜，它们 与 dsDNA 结合后会增加荧光强度，是我们最明亮 的死细胞染料之一。只需将 SYTOX 死细胞染料加 入细胞并观察即可，它在水溶性培养基中不发出荧 光，因此无需额外的清洗步骤。这些染料有多种单 色形式可供选择，适用于很多滤光片组。
如需了解更多信息，请登录/countess
仅供研究使用。不得用于诊断。 © 2015 Thermo Fisher Scientific Inc. 版权所有。除特别说明外， 所有商标均为Thermo Fisher Scientific及其附属公司的财产。Cy是GE Healthcare的商标。 CO210384 0615
与 SYTOX Red 死细胞染料短暂孵育后，采用传统 的 Cy5 滤光片组激发并检测，死细胞的核酸可发 出明亮的红色荧光。SYTOX Red 死细胞染料不同 于采用 488 nm 光线激发的死细胞探针，如 7-AAD 和碘化丙啶 (PI)。此外，SYTOX Red 死细胞染料 的发射通道仅有一个，因此最大程度地减少了其与 CellEvent Caspase 3/7 Green 检测试剂的光谱重 叠，简化了工作流程。
图 1. 采用 Countess II FL 自动细胞计数仪计数的凋亡细胞 和死细胞。Countess II FL 自动细胞计数仪配备有 EVOS 光 立方，用于 GFP (货号：AMEP4651) 和 Cy5 (货号： AMEP4656)。使用 0.5 μm 星孢菌素孵育 HeLa 细胞后，采 用 1:400 CellEvent Caspase-3/7 Green 检测试剂 (货号： C10423) 标记细胞，鉴别凋亡细胞 ，然后使用 1:1,000 SYTOX Red 死细胞染料 (货号：S34859) 染色，室温孵育 30 分钟，标记全部死细胞。
图 2. 在 Countess II FL 自动细胞计数仪上使用 CellEvent Caspase-3/7 Gபைடு நூலகம்een 检测试剂和 SYTOX Red 死细胞染料 检测凋亡的 HeLa 细胞。使用标示量的星孢菌素处理 HeLa 细胞，触发细胞凋亡。提高药物处理量可以发现绿色和远红 外信号提升，分别表示细胞凋亡和细胞死亡水平大幅增加。
7. 按下采集 (Capture)。
采用传统的显微镜或细胞仪检测需要一个多小时 ——仅采集初步结果——而现在使用 Countess II FL 自动细胞计数仪只需几分钟。在使用显微镜或流 式细胞仪之前先检查样本，可以节省时间和精力。
细胞凋亡评估
CellEvent Caspase-3/7 Green 检测试剂 (与 RNA 结合时，Ex/Em：502/530 nm) 本身无荧光，DEVD 肽可抑制染料与 DNA 结合。但是在凋亡细胞中， caspase-3/7 活化后，DEVD 肽被切断，使得染料 能够与 DNA 结合，并产生明亮的荧光。染料与 DNA 结 合 时 的 荧 光 发 射 波 长 可 采 用 标 准 的 “FITC”或 GFP 滤光片组观察。