海南大学2013年《土壤农化分析》实验步骤

《土壤农化分析》实验操作步骤
实验一：植物样品的采集
根据单一差异原则，依据植株的大小、叶片的长势长相、生长发育情况确定适宜采集的植株。

在有效区分后，在不同的植株的不同方向依次采集样品N（小/中/大叶采样量30-50/20-30/15-20）株。

用干净的毛巾擦净植物样品表面的灰尘，剪掉叶柄，在90℃杀青、70℃烘干。

实验二：土壤肥力样品的采集
依据单一差异原则及相应的采样单元的采样路线在待采样的土地上进行采样。

按照棋盘式的采样路线采集12个点位置的土壤（每个点采样100—200g）并剔除其中的有机物。

将12个位置的土壤样品混合均匀并称重（约1.5kg）、风干。

实验三：植物样品的消化
称取＜1mm风干样品0.2000—0.2500g于干燥的100mL消煮管中，润湿样品后加入浓硫酸8.00mL，低温消煮至黑色溶液时去下稍冷却，加入双氧水10-15d，继续加热10min，取下重复以上操作至溶液清亮后继续加热10min取下，冷却定容。

实验四：植物含氮的测定
比色法：吸取待测液1.00mL与50mL容量瓶中，加入10%酒石酸钠2.00mL，摇匀后，用指示剂外加入法调节酸度，加水至约40mL，摇匀后加入奈氏试剂2.50mL，定容，30min后，410nm比色，同时做空白。

标准曲线：0；0.25；0.5；1.0；1.5；
2.0
计算：N（%）=ρ*V*ts*0.0001/m
蒸馏法：吸取待测液10.00mL，10M NaOH 8.0mL，2% H3B03 5.0mL，蒸馏至60—70mL，标准酸滴定。

计算：N（%）=（（V-V0）*c（1/2H2SO4）*14.0*0.001/m）*1000 实验五：植物磷钾的测定
磷：吸取待测液2.00mL于50mL容量瓶中，加水至约30mL，加3滴2，6-二硝基酚，用4N NaOH 调至刚显黄色，加入钼锑抗5.0mL，定容后30min，700nm比色。

标准曲线：0；0.05；0.10.0.20；0.40；0.60；0.80计算：P（%）=ρ*V*ts*0.0001/m 钾：吸取待测液2.00mL于50mL容量瓶中，用蒸馏水定容，在火焰光度计上测定。

标准曲线：0；1.0；2.0；4.0；8.0计算：K（%）=ρ*V*ts*0.0001/m
实验六：土壤样品的制备及含水量的测定
土壤样品的制备（物理性样品）：将风干的土壤样品混匀，用四分法分取约250—300g土样并称量。

让土样通过1mm筛子，并对没有通过1mm筛子的土样进行反复研磨。

重复上述步骤，直到土样中的土粒全部通过筛子。

称量＞1mm的石砰，记录重量后弃去。

称量＜1mm的土粒，记录重量后用方格法取10g左右土样，并使之全部通过0.25mm的筛子。

含水量的测定：取小型铝盒在105℃恒温箱中烘烤约2h，移入干燥器内冷却至室温。

用分析天平称量小型铝盒的质量，称取土样4.5***—5.5***g于铝盒中，把铝盒置于已预热至105±2℃的烘箱中烘烤6h，取出铝盒移入干燥器内冷却至室温，立即称重。

M0烘干铝盒；M1烘前铝土；M2烘后铝土
水分（分析基），%=（M1-M2）/（M1-M0）*100
水分（干基），%=（M1-M2）/（M2-M0）*100
实验七：土壤有机质的测定（K2Cr2O7—外加热法）
称取＜0.25mm风干土0.7***—0.8***g于干燥的硬质试管中，润湿样品后加入0.4mol·L-1的K2Cr2O7—H2SO4混合液10.00mL，要分散后放入已开至200℃左右的油浴中（使温度下降至170—180℃），准确煮沸5min，取出稍冷，擦拭试管外油污，冷却后，完全转移到250—300mL三角瓶中（使总体积60—70mL）加邻啡罗啉指示剂3d，用标准FeSO4滴定，同时做空白。

计算：风干土换算烘干土：k=1/（1+w干基）
土壤有机碳：C（g/kg）=（（（（c*10）/V0）*（V0-Va）*0.001*3.0*1.1）/（m*k））*1000
土壤有机质：M（g/kg）=C*1.724
实验八：土壤速效磷的测定（0.03M NH4F—0.025M HCl）
称取2.00g风干土于干燥的塑料瓶中，加20.00mL浸提剂（盐酸—氟化铵），加塞，振荡30min，振荡结束后应立即干过滤。

吸取滤液5.00mL于50mL容量瓶中，加0.8M H3B03 10.0mL，摇匀后加水至约30mL，加2，6-二硝基酚3d，用稀酸或稀碱调节酸度至刚显黄色，加入钼锑抗5.0mL，定容，30min后800nm显色，同时做空白。

计算：P（mg/kg）=（（ρ*50*20）/（m*5*1000））*1000=（ρ*200）/m
实验九：土壤全氮的消化（混合催化剂法）
称取＜0.25mm风干土0.3***—0.4***g于干燥的50mL消煮管中，加入1.84g混合催化剂，湿润样品后加入浓硫酸5.00mL，摇分散后低温消煮。

待溶液为蓝色时继续煮30min（其间摇动3—4次），取下冷却定容，同时做空白。

实验十：土壤有效氮的培养（康惠扩散法）
称取＜1mm风干土2.00g分散于已选好的扩散皿外室，加0.2g磨细的FeSO4（尽量与土混匀），加内室2.00mL 2% H3B03，沿外缘磨碱性胶后转动使盖子密合。

轻推盖子使露一条缝，加饱和Ag2SO4 2d，加1.07M NaOH 10.00mL，迅速密合盖子，并固定后放入40℃培养箱中培养24h，同时做空白。

回收率实验：100μg/mL NH4+—N 10mL代替样品
实验十一：土壤全氮的蒸馏及碱解氮的测定
全氮的蒸馏：吸取待测液20.00mL，10M NaOH 14.0mL，2% H3B03 5.0mL，蒸馏至50—60mL，标准酸滴定。

计算：N（g/kg）=（（（V1-V0）*c（1/2H2SO4）*14.0*0.001*ts）/m）*1000
碱解氮的测定：将已吸收完全的样品取出，小心揭下盖子，垫高培养皿，用小玻璃棒搅动内室，标准酸滴定。

计算：回收率=（（c*（V-V0）*14.0）/100*10*0.001）*100%
碱解氮测定：N~（mg/kg）=（（c*（V-V0）*14.0）/m）*1000
碱解氮含量：N（mg/kg）=N~/回收率
实验十二：土壤速效钾及pH的测定
速效钾：称取＜1mm风干土2.00g于干燥的塑料瓶中，加入20.00mL pH=7.0 1M NH4OAc溶液，加塞，振荡30min后立即干过滤，滤液上机测定，同时做空白。

标准曲线：0；2；4；8；16；24；32计算：K（μg/kg）=ρ*（20.00/2.00）PH：称取＜1mm风干土10.00g于50mL烧杯中，加H2O 25.00mL，搅拌1min，静置30min，测定，同时预热仪器。

实验十三：植物样品的灰化
称取＜1mm风干植物样品0.45**—0.50**g于30mL干燥的瓷坩埚中，铺平后预灰化至无烟，放入已开至300℃左右的马福炉中，500℃±30℃绘画2h，取出冷却，2d水润湿样品后沿润湿位置加入10.00mL 10%HCl，充分搅拌后加热煮沸，趁热倾泻法过滤于100mL容量瓶中，另加10.00mL HCl充分溶解后过滤，并用水洗干净残渣后定容，同时做空白。

实验十四：土壤有效硼的测定
称取＜1mm风干土10.0g于250—300mL三角瓶中，加水20.0mL，无损煮沸5min，取下冷却后2滴1M CaCl2干过滤，吸取滤液1.00mL于100mL的瓷蒸发皿中，加入4.00mL姜黄素，55±1℃水浴蒸至无水后继续蒸5min，加入95%乙醇20.00mL 溶解（并过滤）后550nm比色，同时做空白。

标准曲线：0；0.05；0.10；0.20；0.40；0.80
实验十五：植物中钙镁钾的测定
钙：吸取待测液10.00mL于50mL容量瓶中，加入5% LaCl21.00mL，用水定容，原子吸收法测定。

标准曲线：0；1.00；2.00；4.00；8.00；16.00
镁：吸取待测液1.00mL于50mL容量瓶中，加入5% LaCl2 1.00mL，用水定容，原子吸收法测定。

标准曲线：0；0.05；0.10；0.20；0.40；0.60
钾：吸取待测液10.00mL于50mL容量瓶中，用水定容，火焰光度法测定。

标准曲线：0；2.0；4.0；8.0；16.0；32.0
计算：M（%）==ρ*V*ts*0.0001/m
实验十六：尿素中氮的测定
称取待测样品0.40**—0.50**g于100mL消煮管中，湿润样品后加入浓硫酸5.00mL，摇匀后低温消煮。

待消煮管内有“白烟”时继续煮15—20min（其间摇动2—3次），取下冷却定容。

吸取待测液10.00mL，10M NaOH 5.0mL，5% H3B03 25.0mL，蒸馏至100—110mL，标准酸（0.3846mol·L-1）滴定。

计算：N（g/kg）=（（c*（V-V0）*14.*0.001*ts）/m）*1000
实验十七：过磷酸钙中有效磷的测定
称取＜0.15mm样品1.0**g于50mL烧杯中，加H2O 25mL，充分研磨后倾泻法过滤于已有1：1 HNO3 5.00mL的250mL容量瓶中，再用H2O 25mL研磨残渣，倾泻法过滤，宫重复3次后将残渣完全转移到滤纸上，用H2O充分洗涤残渣至水200mL 左右定容得滤液Ⅰ。

将残渣连用滤纸一同转移到另一250mL容量瓶中，加入2%比德曼溶液100.0mL，剧烈振荡使滤纸成糊状，放入60±1℃水浴中保温30min （其间摇2次）。

取出冷却至室温，定容，干过滤得滤液Ⅱ。

吸取滤液Ⅰ、Ⅱ各1.00mL于同一50mL容量瓶中，加水至约35mL，加入钒钼酸铵10.00mL，用水定容后20min470nm比色，同时做空白。

计算：P（%）=ρ*V*ts*0.0001/m。