展青霉素的测定(HPLC)
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展青霉素的测定（HPLC）
方法介绍
本方法能将展青霉素与羟甲基糠醛有效分离，检出限为5µg/L。
仪器
高效液相色谱仪、色谱柱（SupelcosilTM LC-C18-DB 15 cm×4.6 mm id）、紫外检测器
试剂
甲醇、乙腈、乙酸乙脂、碳酸钠和无水硫酸钠（分析纯）、三蒸水、展青霉素标准品(Sigma)
检测步骤
1 取2mL苹果汁于具塞试管，加入4mL乙酸乙脂，漩涡振荡器剧烈振荡约2分钟，静置3分钟，待分层后，用滴管移取上层有机相于另一试管；再加4 mL 乙酸乙脂于水相中，振荡2分钟，待静置分层后，取出有机层，合并在一起。
2 加1mL1.5%碳酸钠溶液于有机相中，振荡混匀约2分钟，静置分层，移取上层有机相，再加2mL乙酸乙脂于水相振荡提取，合并有机相。
3 加1g无水硫酸钠于有机相中，振荡混匀1分钟，使提取液脱水，过滤。
4 将滤液于40℃水浴、氮气下缓和吹干，立即用400µL乙腈：水（10:90 v/v）溶解,保存于-20℃，待色谱测定。
色谱条件
流动相：乙腈：水(10:90 v/v)，流速为1.0mL/min。
色谱柱：SupelcosilTM LC-C18-DB 15 cm×4.6 mm id，柱压为1kPa左右。
柱温：室温。
进样量：20µL。
紫外检测：波长为275nm。