Ni-NTA superflow cartridge手册 中文版

Ni-NTA Superflow Cartridge 手册

用于手动或FPLC纯化His-tag蛋白

目录：

包装内容物（4）

储存和稳定性（4）

安全措施（4）

介绍（7）

Ni-NTA Superflow Cartridge说明书（7）

QIA表达系统（7）

Ni-NTA Cartirdge 接头（14）

天然或变性条件下纯化蛋白（15）

说明书

⏹天然条件下清澈的E.coli菌液的制备（16）

⏹变性条件下清澈的E.coli菌液的制备（18）

⏹从E.coli细胞制备6XHis-tag的胞质蛋白（19）

⏹天然条件下从昆虫细胞中制备细胞菌液（20）

⏹使用注射器手动纯化6XHis-tag蛋白（21）

⏹使用自动层析系统纯化6XHis-tag蛋白（22）

问题的解决（23）

附录A：Buffer成分（25）

附录B; Ni-NTA Superflow Cartridge的清洁与再生（27）

包装包含物

Cat no. Ni-NTA Superflow Cartridge（1）Ni-NTA Superflow Cartridge（5）说明书30721 5 1 30725 100 1 30760 1 1 30761 5 1 30765 100 1

技术支持

在QIAGEN，我们为我们的技术支持的质量和有效性而感到骄傲我们的技术部门是由有广泛实验经验的技术人员和专家组成的，他们都从事分子生物学而且熟练使用QIAGEN的产品。如果您有任何问题或实验中遇到困难关于Ni-NTA SuperflowCartridge或QIAGEN的产品，请尽快联系我们。

QIAGEN用户是我们改进和专业化产品的主要信息来源。这些信息对于我们的科研人员与其他的科学家一样重要。因此您如果有什么关于产品的建议或新的需要和技术等等请尽快联系我们。

对于技术支持和更多的信息请联系QIAGEN的技术服务部或者当地经销商

储存和稳定性

Ni-NTA Superflow Cartridge应该储存在2-8度。不要冷冻。Cartridges在这样的条件下可以储存一年而性能不会发生任何改变。

产品局限性

Ni-NTA Superflow Cartridge仅供科研使用。没有声明或表述是用来为诊断，预防或治疗疾病而提供信息。所有预料到的麻烦和注意事项东应该使用中注意。对于重组DNA实验，我们推荐所有用户参照NIH指导方法，或者其他的可用性指导方针。

产品授权和满意的保证

QIAGEN保证产品的效果在我们的产品文献中都有描述。顾客对于产品的特殊用途必须决定它的适用性。如果不是由于使用造成的产品性能问题，QIAGEN将会免费更换或退货。我们有权更换、更改或是调整任何产品以增强性能和设计。如果QIAGEN产品没有达到您的要求，联系我们的当地技术部门或是销售商。我们将相信您的理由或者交换产品----只要您愿意。分离条件应用于QIAGEN科学仪器，服务产品，干冰用于产品运输。请询问更多的信息

你还可以要求得到QIAGEN的条款和条件的副本，他会在我们的发票后提供给您。如果您有什么关于产品说明和性能的问题，请联系QIAGEN技术服务和当地经销商。

安全措施

当工作时使用化学药品时，通常要穿实验服装，带一次性手套和护目镜。更多的信息请咨询MSDSs。您可以在网站下载PDF或打印QANGE kit 和kit 组成

以下危险和安全性用语适用于Ni-NTA Superflow Cartridge。

包含乙醇和镍铵酸。伤害性的，感光的，易燃的。危险和安全用语：R10-22-40-42/43。S13-26-36-46

24小时紧急情况

紧急医疗信息24小时内可以从Poison Information Center Mainz, Germany得到，有英语、法语和德语三种。电话：+49-6131-19240

介绍

QIAGEN Ni-NTA Superflow Cartridge是预先装好Ni-NTA Superflow的1ml和5ml柱子，用来纯化6XHis-tagged蛋白，可以使用注射器、蠕动泵，或者液相层析系统（例如AKTA或FPLC）

Ni-NTA Superflow Cartridge

高流速可能导致恢复6XHis-tagged蛋白减少

蛋白不同吸附能力不同

QIA表达系统

QIA表达系统以6Xhis tag为基础，这是一个亲和标签由6个连续的His残基组成。这个亲和标能够被QIAGEN独特的专利产品Ni-NTA金属吸附层析柱显著的选择吸附。QIA表达系统这个独特的特性提供了大量的显著优势（表一）而并不适合其他亲和标签和层析方法

表一：QIA表达系统的特点和优势

Ni-NTA Superflow

Ni-NTA Superflow由连接Superflow树脂的Ni-NTA组成。它将出众的机械稳定性和显著的流动特性及高效的动力吸附能力相结合。吸附6XHis-tagged蛋白的能力是

5-20mg/ml。这种树脂对于效率生产登记和FPLC的要求允许使用一步法纯化

6XHis-tag蛋白。Ni-NTA能力出众，适应试剂范围广泛，例如2M NaCl，10mM DTT，8M尿素，及许多去污剂（表二）

局限性

Ni-NTA基质不要暴露在高浓度的还原剂中，例如DTT，DTE；高浓度下，这些试剂还原Ni离子还可能阻止吸附6XHIS-Tag蛋白。Ni-NTA基质在还原剂中会变成棕色。很多情况下，β-巯基乙醇能够在浓度不高于20mM时使用，DTT兼容性证明浓度可以到10mM。

EDTA，EGTA或其他任何强螯合剂吸附Ni离子并将他们从NTA上夺走。NTA基质缺乏NI时变白。使用任何还原剂或螯合剂都要当心，如果不确定，就在小量的Ni-NTA 基质上作检测。高浓度的Buffer包含强的给电子集团或者氨基酸例如Arg、Glu、Gly、His，菌液中应该尽量避免。

细胞应该被溶解。不要用强的螯合剂如EDTA，强的还原剂如DTT，或者离子去垢