黄姜中皂素的提取及含量分析

微型化学实验专辑

广西师范大学学报

JOU RNAL O F GUAN GX INORM AL UN I V ER S IT Y

2000年6月黄姜中皂素的提取及含量分析

马敬中　陈长水　江　洪　李雪刚

(华中农业大学理学系,湖北武汉430070)

摘　要:黄姜干片经酸水解后的残渣用CHC l3提取皂素.提取液用分光光度法对皂素进行含量分析.

关键词:黄姜;皂素提取;分光光度法

0　前言

,是制备甾体激素药物的重要原料[1].由于甾体化合物难以由化学方法合成,所以该原料主要来源只能从富含皂素的植物如黄姜、黄山药等的地下茎中提取.其提取方法与含量分析方法各异[2—6].我们采用微型化的操作技术,建立了提取微量皂素和含量分析的新方法.新方法不仅缩短了分析时间,提高了准确度,而且适用于少量样品的提取分析.本实验内容可供大学有关专业高年级学生作为天然有机提取和分析的综合实验内容.

1　实验部分

111　仪器与药品

10mL,20mL圆底烧瓶,微型回流水冷凝管,索氏提取器,微型布氏漏斗、抽滤瓶,110mL移液管; 10mL,25mL容量瓶各数只,分液漏斗,蒸馏头,直型水冷凝管,恒温水浴,电子天平,722型分光光度计,酒精灯等加热装置.

黄姜干片,浓H2SO4,2m o l L稀H2SO4,CHC l3,乙酸酐,活性炭,1‰皂素的CHC l3标准溶液,饱和N aHCO3溶液,饱和N aC l溶液,无水硫酸镁.

112　实验步骤

11211　黄姜中皂素的提取

称取黄姜干片110g,用研钵捣碎,加入10mL圆底烧瓶中,加入6mL2m o l L稀H2SO4,酒精灯加热回流约4h,放冷,用布氏漏斗减压过滤,用清水洗3～5次,抽干,盖上干滤纸用小烧杯底压干,滤渣转移至一干净滤纸上,包成比微型索氏提取器内径略小的圆柱状包,置于索氏提取器内.在20mL干净圆底烧瓶中加入011～012g活性炭和10mL CHC l3,安装好装置,回流30～40m in,放冷,减压过滤,滤液转入25mL容量瓶用3～4mL CHC l3洗活性炭及抽滤瓶,并入25mL容量瓶中,CHC l3稀释至刻度备用.

11212　标准吸光度测定

显色剂配制,取冰箱中预冷的乙酸酐与浓H2SO4,按体积比10∶1混合均匀,再置冰箱中冷至0°左右备用.

用移液管移取0102,0105,0110,0120,0150,110mL的皂素标准溶液,分别加入6个10mL容量瓶,并标号,每瓶中加入4mL左右CHC l3.

每个容量瓶中加入4mL左右显色剂,摇均匀,用CHC l3稀释至刻度,塞上塞子,置50°C恒温水浴

基金项目:国家自然科学基金课题

显色40m in,取出放冷,试剂空白对照,1c m比色皿在460nm波长进行比色测定,平行作三次.

11213　提取液吸光度测定;移取提取液110mL,稀释至25mL,再取稀释液110mL至10mL容量瓶,照11212操作进行.

11214　皂素样品制取:剩下的24mL未稀释提取液,用饱和N aHCO3溶液洗至碱性,N aC l水溶液洗至中性,无水M gSO4干燥,然后蒸去CHC l3可得皂素样品.

2　结果与讨论

211　数据处理

将三次平行实验结果取平均值,各数据如表1所示.

表1　标准溶液的体积、浓度及吸光度

标准液体积 mL01020105011012015110

显色液浓度10-5g mL0120151102105101010

吸光度A010130010315010625011180129901613

以浓度为横坐标,吸光度为纵坐标作图,所得图形是一条直线.提取液显色后的吸光度为010132,从直线上查出其横坐标为2109×10-6g mL,由下式计算可得黄姜干片中皂素含量为:

2109×10-6×10×25×25

×100%=1.31%.

110

212　提取条件

经反复实验证明,黄姜干片在2m o l L的硫酸中回流4h r可以达到所含皂素全部水解的目的.

酸水解后的残渣洗至中性要用清水漂洗10多个小时.因提取液加浓H2SO4显色,酸对显色无妨碍,也不必干燥水解残渣,因显色剂中乙酸酐可以和提取液中少量水反应:

(CH3CO)2O+H2O2CH3CO2H

生成乙酸对显色无影响.但残渣含水过多会影响提取率.而提取液用N aHCO3去酸和用无水M gSO4去水很方便.提取时也可不用索氏提取器,直接将残渣和活性炭一起加入烧瓶回流,但时间稍长,溶剂适量增加以达到完全提取目的.活性炭同时加入使脱色和提取同时进行,可缩短实验时间.皂素可以用烃类溶剂提,但提取时残渣必须烘干.用CHC l3可以省去烘干步骤且烃类溶剂显色时不和显色剂混溶,故用CHC l3提取可以直接用提取液显色.

213　显色条件

显色溶剂:烃类溶剂不与显色剂混溶达不到均一目的,用强极性CHC l3则可以收到满意效果.

显色剂用量:显色剂用量多,显色效果好,但过多会使提取液中非甾体有机物产生颜色而干扰测定,适合比例是显色剂占总体积2 5左右.

显色温度与时间:温度高则显色快,温度低则显色慢,室温不显色.但温度过高会造成非甾体有机物产生颜色干扰测定.选用CHC l3沸点(61°C)以下50°C左右温度显色为宜,在此温度下40m in可以充分显色.

测试浓度范围:显色剂与皂素来CHC l3中显色有较好灵敏度但浓度低于7176×10-7g mL时吸光值波动较大;浓度高于9131×10-5g mL时会出现负误差.

3　结论

黄姜干片经稀酸酸水解后,滤渣直接用CHC l3提取,活性炭脱色后用CHC l3稀释,乙酸酐—浓硫酸作显色剂,显色温度为50°C左右,显色时间40m in,用460nm波长进行比色测定;浓度与吸光度之间有很好的线性关系.测试范围在7176×10-7g mL～9131×10-5g mL,此方法可以达到提取少量黄姜