可切换波长高效液相色谱法测定复方麒麟巴布剂中原儿茶醛、咖啡酸、阿魏酸的含量

可切换波长高效液相色谱法测定复方麒麟巴布剂中原儿茶醛、
咖啡酸、阿魏酸的含量
周进;闻雅君;黄文涛
【摘要】目的采用高效液相色谱法对复方麒麟巴布剂中主要成分原儿茶醛、咖啡酸、阿魏酸的含量进行测定,制定制剂的质量标准.方法采用依利特HypersilODSC18柱(4.6 mm×250 mm),流速:1.0 mL/min,流动相:甲醇(A)、乙腈(B)、0.1％磷酸水(C),梯度洗脱:(0～20 min,A:15％,波长:280 nm);(20～27 min,A:15％～60％,波长:323 nm);(27～35 min,B:15％～60％C,波长:321 nm);柱温:25℃,进样量:20μL.结果原儿茶醛在4.1156～102.89μg/mL,咖啡酸在
4.8004～120.00μg/mL,阿魏酸在
5.756～143.90μg/mL浓度范围内与峰面积线性关系良好.计算平均回收率分别为99.72％、101.48％、100.34％,计算RSD分别为1.74％、0.80％、0.56％,暂定的复方麒麟巴布剂的含量为原儿茶醛含量不少于0.74 mg/贴,咖啡酸含量不少于0.92 mg/贴,阿魏酸含量不少于2.27 mg/贴.结论制定的复方麒麟巴布剂含量控制标准,重复性好,方法可行,数据可靠,可作为其质量控制方法.
【期刊名称】《湖北民族学院学报（医学版）》
【年(卷),期】2019(036)003
【总页数】4页(P48-51)
【关键词】复方麒麟巴布剂;原儿茶醛;咖啡酸;阿魏酸
【作者】周进;闻雅君;黄文涛
【作者单位】武汉市第一医院湖北武汉430000;武汉市第一医院湖北武汉430000;武汉市第一医院湖北武汉430000
【正文语种】中文
【中图分类】R284.2
复方麒麟巴布剂为武汉市第一医院肿瘤科临床使用多年的协定处方，由血竭、麝香、乳香、没药、蒲公英、当归、丹参、山慈菇等组成。

具有活血化瘀，抗癌止痛的功效，特别用于晚期肿瘤止疼抑癌的治疗。

方中麝香、血竭为君药[1-3]，蒲公英、
当归、丹参为臣药，辅助君药活血化瘀。

为了更好的控制复方麒麟巴布剂的质量，本实验对麒麟巴布剂中丹参、蒲公英、当归中活性成分进行含量测定[4-7]，通过
高效液相色谱法同时测定制剂中原儿茶醛，咖啡酸、阿魏酸的含量，为该制剂的质量标准制定提供依据，现报道如下。

1 仪器与试药
1.1 仪器 Waterse2695高效液相色谱仪(美国，自动进样器，紫外检测器：Waters2489)；BP211D电子天平(德国赛多利斯，Max210 g，d=0.01 mg)；
KQ-300DE型医用数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；艾柯超纯水机(EXCEED 型，成都艾柯水处理有限公司)。

1.2 试药原儿茶醛对照品(中国食品药品检定研究院，批号110810-201608，纯
度≥97%)，咖啡酸对照品(中国食品药品检定研究院，批号110885-200102，纯
度≥99%)，阿魏酸(中国食品药品检定研究院，批号110773-200611，纯度
≥98%)；甲醇为色谱纯(国药控股有限公司)，乙腈为色谱纯(美国TEDLA公司)；
超纯水；自制复方麒麟巴布剂(批号19042501、19042502、19042503)。

2 方法
2.1 色谱条件色谱柱为依利特HypersilODSC18柱(4.6 mm×250 mm)，流速：1.0 mL/min，流动相：甲醇(A)、乙腈(B)、0.1%磷酸水(C)，梯度洗脱：(0～20 min，A：15%，波长：280 nm)；(20～27 min，A：15%～60%，波长：323 nm)；(27～35 min，B：15%～60%C，波长：321 nm)；柱温：25℃，进样量：20 μL。

2.2 溶液制备
2.2.1 对照品混合溶液制备精密称取减压干燥至恒重的原儿茶醛、咖啡酸、阿魏酸对照品适量至100 mL容量瓶中，加70%甲醇定容至刻度，分别制成含原儿茶醛、咖啡酸、阿魏酸浓度为205.78 μg/mL，240.02 μg/mL，287.80 μg/mL对照品
混合储备液，保存备用。

2.2.2 供试品溶液制备称取适量的明胶，加水浸泡溶胀制成明胶胶体液，依次加入甘油、羧甲基纤维素钠、聚丙烯酸钠、高岭土，搅拌均匀制成粘性适中的基质浆料，加入复方麒麟巴布剂流浸膏，边加边搅拌，放置熟化，制成巴布剂膏体，调节好涂布规格，涂布、晾干(减压干燥下抽干空气和气泡)，按规格切割成片[4]。

取复方麒麟巴布剂1贴(批号19042501)，除去盖衬，称取药膏0.50 g，置于锥形瓶中，精密加入70%甲醇50 mL，称重，超声提取(功率120 w，频率42 kHz)30 min后
静置放冷，补重，过滤，取续滤液作为供试品溶液。

2.2.3 阴性样品溶液制备分别取缺丹参、缺蒲公英、缺当归的复方麒麟巴布剂的中药处方，制备成阴性巴布剂，按“2.2.2” 项下供试品溶液的制备方法分别制成缺丹参阴性样品溶液、缺蒲公英阴性样品、缺当归阴性样品和缺丹参、蒲公英、当归样品。

3 方法学考察
3.1 专属性考察分别取“2.2”项下溶液制备的对照品混合溶液、供试品溶液，阴
性样品溶液，按“2.1”项下色谱条件，分别进样20 μL，并记录色谱图(图1)。

通
过高效液相色谱图可知，供试品溶液的3个目标主峰保留时间分别与对照品溶液
的主峰保留时间对应一致且无干扰，阴性样品溶液在对应的保留时间位置无干扰，表明该方法专属性良好。

3.2 线性关系考察取“2.2.1”项下混合对照品储备液，精密吸取对照品储备液1、2、5、10、15、25 mL，分别置于5 0mL容量瓶中，各加入70%甲醇稀释溶解，定容至刻度，分别制成原儿茶醛系列浓度为
4.116、8.112、12.168、16.224、20.280、40.560 μg/L；咖啡酸系列浓度为3.468、6.936、10.404、13.872、17.340、34.680 μg/L；阿魏酸系列浓度为4.504、9.008、13.512、18.016、22.520、4
5.040 μg/L的系列对照品溶液，按“2.1”项下色谱条件，分别进样20 μL，分别记录原儿茶醛、咖啡酸、阿魏酸峰面积，以进样浓度为横坐标(X)，峰面
积为纵坐标(Y)，分别进行线性回归，绘制标准曲线，计算回归方程为：(原儿茶醛)Y1=2.469×103 X1-14.568 1×103(r=0.999 6)；(咖啡酸)Y2=11.201
6×103X2+2.018 8×103(r=0.999 7)；(阿魏酸)Y3=7.479×104X3-
3.618×103(r=0.999 8)。

结果表明，原儿茶醛在
4.1156～102.89 μg/mL，咖啡
酸在4.800 4～120.00 μg/ mL，阿魏酸在5.756～143.90 μg/mL浓度范围内与
峰面积线性关系良好。

a：混合对照品；b：供试品；c：缺丹参阴性供试品；d：缺蒲公英阴性供试品；e：缺当归阴性供试品；f：缺丹参、蒲公英、当归阴性供试品；A：原儿茶醛；B：咖啡酸；C：阿魏酸。

图1 复方麒麟巴布剂HPLC色谱图
3.3 精密度考察取上述对照品混合储备液，分别精密吸取10 mL，置于50 mL容量瓶中，加入70%甲醇稀释溶解，并定容至刻度，摇匀，按“2.1”项下色谱条件连续进样6次，记录峰面积，计算结果，原儿茶醛平均峰面积的RSD为
0.59%(n=6)；咖啡酸平均峰面积的RSD为1.03%(n=6)；阿魏酸平均峰面积的RSD为0.98%(n=6)，表明仪器精密度良好。

3.4 稳定性实验取复方麒麟巴布剂(批号19042501)，称取0.50 g，按上述
“2.2.2”项下供试品溶液的制备成供试品溶液，分别于0、1、2、4、8、12 h时按“2.1”项下色谱条件分别进样20 μL，分别记录峰面积，原儿茶醛平均峰面积
的RSD为1.61%(n=6)；咖啡酸平均峰面积的RSD为1.99%(n=6)；阿魏酸平均
峰面积的RSD为0.83 %(n=6)，表明供试品溶液在12 h内稳定。

3.5 重复性实验取复方麒麟巴布剂(批号19042501),分别称取6份，各取0.50 g，按上述“2.2.2”项下供试品溶液的制备方法，制备成供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件分别进样测定，记录色谱图，计算各组分的平均含量，结果原儿茶醛、咖啡酸和阿魏酸平均含量分别为409.49 μg/g、509.68 μg/g、1 263.05 μg/g，分别计算RSD为1.55%(n=6)、1.91%(n=6)、1.29%(n=6)，表明该方法重复性良好。

3.6 加样回收率试验精密称定复方麒麟巴布剂(批号19042501)已知含量的巴布剂
6份，各0.25 μg，分别加入适量的原儿茶醛、咖啡酸、阿魏酸对照品，按上述“2.2.2”项下供试品溶液的制备方法，制备成供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件进行测定，记录峰面积，计算回收率，回收率(%)=(测得量-样品含量)/加标品量×100%。

通过加样回收率结果计算RSD分别为1.74%(n=6)、0.80%(n=6)、
0.56%(n=6)，表明该实验结果良好，数据可靠，方法可行,见表1。

表1 加样回收率试验结果有效成分取样量/g样品含量/μg加标品量/μg测定量
/μg回收率/%平均回收率/%RSD/%原儿茶醛
0.25017102.4410100.25203.1725100.4899.721.740.25102102.7891100.2520 0.145697.110.25037102.5229100.25204.1179101.340.25123102.8751100.25 201.256198.140.25048102.5680100.25202.792499.970.25115102.8423100.2 5204.3983101.30咖啡酸
0.25017127.5058120.50249.8014101.49101.480.800.25102127.9391120.502
50.1176101.390.25037127.6078120.50249.7316101.350.25123128.0461120. 50248.8014100.210.25048127.6638120.50251.2005102.730.25115128.0053 120.50250.3412101.73
续表1：
有效成分取样量/g样品含量/μg加标品量/μg测定量/μg回收率/%平均回收率/%RSD/%咖啡酸阿魏酸
0.25017315.9762310.00629.4455101.12100.340.560.25102317.0498310.006 26.179399.720.25037316.2288310.00625.461899.750.25123317.3150310.00 628.0039100.220.25048316.3678310.00627.4916100.360.25115317.214031 0.00629.8077100.84
4 样品含量测定
取复方麒麟巴布剂3批(批号19042501、19042502、19042503)，按“2.2.2”
项下供试品溶液制备方法制备，按“2.1”项下色谱条件进行测定原儿茶醛、咖啡酸、阿魏酸的含量，见表2。

表2 样品含量测定结果(μg/g)批号原儿茶醛含量咖啡酸含量阿魏酸含量19042501409.49509.681263.0519042502410.75510.251265.0819******** 9.82511.081262.88
通过测定3批复方麒麟巴布剂含量结果，计算原儿茶醛平均含量为410.02 μg/g，咖啡酸平均含量为510.34 μg/g，阿魏酸平均含量为1 263.67 μg/g。

故暂定复方麒麟巴布剂在平均值的基础上，下浮10%。

制作的复方麒麟巴布剂的规格为2.0
g/贴，故暂定复方麒麟巴布剂的含量为原儿茶醛含量不少于0.74 mg/贴，咖啡酸含量不少于0.92 mg/贴，阿魏酸含量不少于2.27 mg/贴。

5 讨论
复方麒麟巴布剂处方中，方中血竭、麝香为君药，当归、蒲公英、丹参为臣药。

其
中君药无具体的含量测定指标，于是选择了臣药丹参、蒲公英、当归中的有效成分原儿茶醛、咖啡酸、阿魏酸的含量指标来进行质量标准的制定[8]。

本实验查阅文献[9-10]，原儿茶醛的紫外吸收波长为280 nm、咖啡酸的紫外吸收波长为323 nm，阿魏酸的紫外吸收波长为321 nm。

本实验考察了甲腈-0.1%磷酸水，乙腈-0.1%磷酸水，甲醇-0.1%磷酸缓冲盐等不同流动相系统进行洗脱，发现固定流动相无法使得3个有效成分达到基线分离，故最终确定选择梯度洗脱进行分离，本实验所测定的制剂中所含成分均较高，通过高效液相色谱法可以很好的检测其所含成分含量，本实验含量测定方法简单、稳定、重复性好，可以作为复方麒麟巴布剂的含量测定方法，从而为制定其质量标准提供支撑。

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