水浸提灵芝多糖条件研究

西安源森生物实验室对水浸提灵芝多糖的条件研究

灵芝提取物灵芝多糖作为西安源森生物的主打产品之一，以其调节人体免疫、抗衰老的特色优势受到了保健品市场的广泛认可。它的常用提取方法包括水、稀酸、稀碱以及二甲基亚砜等多种溶剂类型，经过研究，西安源森生物实验室发现，水浸提法在操作成本、灵芝多糖活性保持方面具有相当优势。

为了研究确定水浸提灵芝多糖的适宜条件，西安源森生物实验室在本次实验中，采用苯酚-硫酸检测法对灵芝多糖的含量进行测定，对水浸提灵芝多糖的时间、温度、固液比例三因素进行试验和正交试验：

一. 实验材料与方法

1. 材料、仪器和试剂

材料：赤芝，来自西安源森生物实验室

仪器：752-C紫外可见分光光度计、分析天平、植物粉碎机

试剂:标准葡萄糖、苯酚、硫酸。

2. 实验方法

（1）多糖含量测定方法：采用苯酚-硫酸法。

（2）材料处理：取一定量干燥的灵芝碎片，经植物粉碎机破碎后，加入一定比例水在一定温度下浸提一定时间，得到灵芝多糖的水浸提液。

（3）标准溶液的制备：取标准葡萄糖20 mg于500 mL容量瓶中,加水定容至刻度。

（4）标准曲线的制作：精确量取标准葡萄糖溶液0.0、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6及1.8 mL，各以水补至2.0 mL，然后分别加入6%苯酚1.0 mL、浓硫酸5.0 mL，静置10 min，摇匀，室温放置20 min后于490 nm处测定吸光度。

横坐标为多糖微克数，纵坐标为光密度值，得到标准曲线如图1。

（5）灵芝多糖提取液稀释至适当倍数后，精密吸取1.0 mL，按照标准曲线的方法测定吸光度，计算得灵芝多糖含量。

二. 实验结果

实验结果一：不同浸提时间对灵芝多糖提取的影响

浸提时间对灵芝多糖提取的影响如图2所示：

如图2所示，在浸提时间到2h时，提取量基本不再变化，说明此时提取液中的灵芝多糖已经达到平衡，因此浸提时间2h时的提取效果最好；

从整体曲线走向来看，浸提时间越长，提取效果越好，直至2h时达到平衡。

实验结果二：浸提料液比对灵芝多糖提取的影响

料液比是指浸提时的加水量（图3）：

如图3所示，灵芝多糖溶出量随着加水量的增加逐渐提高，但是当加水量过大会给后续的浓缩操作带来不便；

以实际应用为前提，加水量应该确定在灵芝多糖提取量趋于稳定的节点（1：15），因此料液的最佳比例应为1：15。

实验结果三：浸提温度对灵芝多糖提取率的影响

温度的不断升高,分子运动的速度越快,越易于灵芝多糖在水中溶出（图4）：

（1）浸提温度越高，灵芝多糖的提取效果就越好；

（2）在80～90℃之间，灵芝多糖提取量的增加趋于平缓；

（3）随着浸提时间的延长，浸提液会不断减少，从而会影响灵芝多糖的提取量，并且温度过高也会影响灵芝多糖的生物活性。因此，最适宜的灵芝多糖浸提温度范围应该在80～90℃之间。

实验结果四：正交试验

为了确定浸提时间、料液比例和浸提温度对灵芝多糖提取效果的影响大小，西安源森生物对此三因素进行了正交试验。

因素水平表1：

正交试验结果以及数据分析见表2和表3所示：

F(0.1)=1.80

从正交试验结果看出：

（1）最佳提取条件为:A3B3C3，即

浸提温度--90℃浸提时间--2.0 h 料液比—1:20

（2）由方差分析和直观分析得出，

三因素以料液比对灵芝多糖提取的影响程度最小，而且料液比太大还会影响浓缩操作，因此料液比最适宜比例最后确定为1∶15。

三.最终实验结果与讨论

1.根据以上三个单因素试验和正交试验，西安源森生物实验室得出以下结论：

（1）水浸提灵芝多糖的三个因素对提取效果的影响大小排列为：浸提温度>浸提时间>料液比；

（2）灵芝多糖的最佳水浸提条件为：浸提温度90℃；浸提时间2.0 h；浸提料液比1∶15。

2.讨论

西安源森生物实验室对灵芝多糖的常用提取方法：水、稀酸、稀碱和二甲基亚砜溶剂的优劣势分析：

（1）稀酸提取——要求时间短，温度≤5℃（故而生产中要考虑制冷），导致提取成本增加；（2）稀碱提取——可以提高多糖的提取率，但会很大程度上影响多糖的生物活性；

（3）二甲基亚砜——是一种提取灵芝多糖的良好溶剂，但是在提取过程中会有很多不利因素：

a.溶剂价格昂贵，提取过程会大量损耗有效成分;

b.提取工艺过程繁复，工作量大、生产不易控制、人为因素多;

c.生产中产生的废液会造成环境污染，并且有害人体健康;

以上分析表明，与其它常用方法相比，水浸提灵芝多糖具有独特的优势。西安源森生物公司在生产过程中一直采用适宜条件（浸提温度90℃，时间2.h，料液比1:15）下的灵芝多糖水浸提，在保持高生物活性的前提下降低提取成本，提高了灵芝多糖销售的市场竞争力。