细菌药敏试验及耐药机制研究进展

用纸片扩散法能可靠地测定分离于囊性纤维化病人的铜 绿假单菌的敏感性，但在作为敏感结果报告前，应将孵育 时间延长至24小时。
3.不动杆菌属纸片扩散法、液体稀释法、琼脂稀释法
试验条件 培养基 接种物 孵育 Mueller-Hinton 琼脂、CAMHB、Mueller-Hinton 琼脂 生长法或直接菌落悬液法，相当于 0.5 麦氏标准。 35℃±2℃；空气；20-24 小时
15-18 ≥19
叶酸代谢途径抑制剂 A 甲氧苄啶/ 1.25/23. ≤10 磺胺甲噁唑 75μg
11-15 ≥16
≥ 8/152
≤ 3/38
（2）嗜麦芽窄食单胞菌液体稀释法、琼脂稀释法解释标准
试 验 / 抗微生物药 报告 分组 β内酰胺类/β内酰胺类抑制剂 B 替卡西林/克拉维酸 S MIC 值（μg/ml） I R
9.流感嗜血杆菌和副流感嗜血杆菌纸片扩散法、液体稀释法
试验条件 培养基 接种物 孵育 嗜血杆菌试验培养基(HTM)，HTM肉汤 直接菌落悬液法，相当于0.5 麦氏标准 35℃±2℃；5%CO2;16-18 小时（纸片扩散法）；空气，20-24 小时（液 体稀释法）
TCC49247；流感嗜血杆菌 A TCC49766；大肠埃希菌 推荐的质控菌株 流感嗜血杆菌 A A TCC35218（测试阿莫西林/克拉维酸时）
（1）嗜麦芽窄食单胞菌纸片扩散法解释标准
试 验 / 抗微生 报告 物药 分组 四环素类 B 米诺环素 氟喹诺酮类 B 左氧氟沙星 5μg ≤13 14-16 ≥17 ≥8 ≤2 纸片含药 量 抑菌环直径（mm） R ≤14 I S 相对应 MIC 值 （μg/ml） R S ≥16 ≤4 注释
30μg
（1）对于从粪便中分离的沙门菌和志贺菌属，常规仅测试 和报告氨苄西林，一种喹酮类药和甲氧苄啶/磺胺甲噁唑。此 外对于胃肠外分离的沙门菌属还一定要测试并报告氯霉素及 其某一种Ⅲ代头孢菌素的结果。 （2）所有确认产ESBLs的菌株应当报告为耐所有青霉素类， 头孢菌素类和氨曲南。 （3）出于对流行性，治疗及感染控制方面的考虑，应该把 从尿中分离的所有菌株做ESBLs 筛选试验作为一个基本制度。 （4）仅当被认为与临床有关时（如菌血症）才进行奇异变 形杆菌ESBLs筛选试验 （5）肠杆菌属、枸橼酸杆菌属和沙雷菌属可发展为耐药。 最初分离的敏感菌株在开始治疗3~4天内可变为耐药，因此 对重复分离菌株应重新进行药敏试验。 。
≥32 ≥16 ≥16 ≥8 ≥32 ≥4/76
phenicols B 氯霉素 叶酸代谢途径抑制剂 A 甲氧苄啶/磺胺甲噁唑
16 -
5.嗜麦芽窄食单胞菌纸片扩散法、液体稀释法、琼脂稀释法 试验条件 培养基 接种物 孵育 推荐的质控菌 株
Mueller-Hinton 琼脂、CAMHB、Mueller-Hinton 琼脂 生长法或直接菌落悬液法，相当于 0.5 麦氏标准。 35℃±2℃；空气；20-24 小时 大肠埃希菌 ATCC 25922；铜绿假单胞菌 ATCC27853； 大肠埃希菌 ATCC 35218（为监控β-内酰胺酶/β-内酰胺抑制剂纸片用）
g/ml
4
2
1
0.5
0.25
0.12
0
微量液体稀释法
细菌药敏试验- E-test法
E-test Strips containing a gradient of antibiotic are placed on lawn of bacteria and incubated overnight. MIC is determined at point where zone of inhibition intersects scale on strip. Combines ease of KB with an MIC method. Particularly useful for S. pneumoniae.
试验条件 培养基 接种物 孵育 Mueller-Hinton 琼脂，CAMHB,MHA 生长法或直接菌落悬液法，相当于0.5 麦氏标准。 35℃±2℃；空气；16-18 小时；测万古霉素需24 小时
TCC29212 推荐的质控菌株 金黄色葡萄球菌ATCC25923(Mueller-Hinton 琼脂);粪肠球菌A
推荐的质控菌株 大肠埃希菌 ATCC 25922；铜绿假单胞菌 ATCC27853； 大肠埃希菌 ATCC 35218（为监控β-内酰胺酶/β-内酰胺抑制剂纸片用）
4.洋葱伯克霍尔德菌纸片扩散法、液体稀释法、琼脂稀释法
试验条件 培养基 接种物 孵育 Mueller-Hinton 琼脂、CAMHB、Mueller-Hinton 琼脂 生长法或直接菌落悬液法，相当于 0.5 麦氏标准。 35℃±2℃；空气；20-24 小时
推 荐的质控 菌株 金黄色 葡萄球 菌ATCC25923；大肠 埃希菌A TCC 35218（为 控 监 β-内酰 胺酶/β-内酰胺抑制剂纸片用） ；金黄色葡萄球菌 ATCC BAA-977 和金黄 色葡萄 球菌ATCC BAA-976（用于 克林霉 素诱导试 验质量 评估）
7.葡萄球菌属液体稀释法、琼脂稀释法
2.铜绿假单胞菌纸片扩散法、液体稀释法、琼脂稀释法
试验条件 培养基 接种物 孵育 推荐的质控菌株 Mueller-Hinton 琼脂、CAMHB、Mueller-Hinton 琼脂 生长法或直接菌落悬液法，相当于 0.5 麦氏标准。 35℃±2℃；空气；16-18 小时 大肠埃希菌 ATCC 25922；铜绿假单胞菌 ATCC27853； 大肠埃希菌 ATCC 35218（为监控β-内酰胺酶/β-内酰胺抑制剂纸片用）
推 的 控 株 淋 奈 菌A 荐 质 菌 病 瑟 TCC49226
11.肺 链 菌 扩 法 液 稀 法 炎 球 片 散 、 体 释
试 条 验 件 培 基 养 接 物 种 孵 育 脂 羊 ； H M ueller-H inton琼 +5% 血 CAM B+2.5~5% /V融 的 血 V 解 马 直 菌 悬 法 相 于0.5麦 标 接 落 液 ， 当 氏 准 ± ； CO 20-24小 时 35℃ 2℃ 5% 2；
二、药敏试验基本条件
1.肠杆菌科－纸片扩散法、液体稀释法、琼脂稀释法 试验条件 培养基 接种物 孵育 推荐的质控菌 株
Mueller-Hinton 琼脂、CAMHB、Mueller-Hinton 琼脂 生长法或直接菌落悬液法，相当于 0.5 麦氏标准。 35℃±2℃；空气；16-18 小时 大肠埃希菌 ATCC 25922； 大肠埃希菌 ATCC 35218（为监控β-内酰胺酶/β-内酰胺抑制剂纸片用）
（1）对于肠球菌属，头孢菌素，氨基糖苷类（筛选高水平耐药 除外），克林霉素和甲氧苄啶-磺胺甲噁唑可以在体外显示活性 但临床上无效，因此这些菌株不应该报告为敏感。 （2）肠球菌心内膜炎要求大剂量青霉素或氨苄西林，或万古霉 素或替考拉宁联合庆大霉素或链霉素以增加杀菌作用。
（3）庆大霉素和链霉素筛选试验，能够预测氨苄西林、 青霉素或万古霉素与一种氨基糖苷类抗生素之间的协同 效应。其它的氨基糖苷类不需进行测试，因为它们对肠 球菌的活性并不优于庆大霉素和链霉素。 （4）对血和脑脊液分离株推荐用头孢硝噻吩β-内酰胺 酶试验。β-内酰胺酶试验阳性提示青霉素耐药，同时也 对酰胺基，羧基和脲基青霉素耐药。
推荐的质控菌株 大肠埃希菌 ATCC 25922；铜绿假单胞菌 ATCC27853； 大肠埃希菌 ATCC 35218（为监控β-内酰胺酶/β-内酰胺抑制剂纸片用）
（1）洋葱伯克霍尔德菌纸片扩散法解释标准
试验/ 报告 分组 抗微生物药纸片含药量 抑菌环直径（mm） 相对应 MIC 值 （μg/ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱl） S ≤8 ≤4 ≤4 注释
≤ 2/38
（2）洋葱伯克霍尔德菌液体稀释法、琼脂稀释法解释标准
试验/ 抗微生物药 报告 分组 β内酰胺类/β内酰胺类抑制剂 B 替卡西林/克拉维酸 S MIC 值（μg/ml） I R
注释
≤16/2
32/2-64/ 2
≥128/2
头孢类（注射药物）（包括头孢菌素Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ和Ⅳ代） B 头孢他啶 ≤8 18 碳青霉烯类 B 美洛培南 四环素类 B 米诺环素 氟喹诺酮类 B 左氧沙星 ≤2 ≤8 ≤2/38 4 ≤4 ≤4 8 8
细菌药敏试验-宏量稀释法
Minimal inhibitory concentration (MIC) Reference method. Add standard inoculum to dilutions of antibiotic. Incubate overnight. MIC is lowest concentration that inhibits growth (can also be performed by agar dilution). Interpretation (S or R) is based on achievable drug levels 104 cfu
10.淋 奈 菌 片 散 、 脂 释 病 瑟 纸 扩 法 琼 稀 法
试 条 验 件 培 基 养 接 物 种 孵 育 G 脂 础 特 的 长 充 。片 散 不 要 用 半 氨 C琼 基 +1% 定 生 补 品 纸 扩 法 需 使 无 胱 酸 的 长 充 。 生 补 品 直 菌 悬 法 相 于0.5麦 标 接 落 液 ， 当 氏 准 36℃ 1℃ 超 ± (不 过37℃ 5% 2； )； CO 20-24 小 。 时
推 的 控 株 肺 链 菌A 荐 质 菌 炎 球 TCC49619
试验条件 培养基 肉汤稀释法：CAMHB；2％NaCL+ CAMHB 用于检测苯唑西林、甲氧西 林、萘夫西林； 琼脂稀释法：Mueller-Hinton 琼脂；2％NaCL+ MHA 用于检测苯唑西林、 甲氧西林、萘夫西林 直接菌落悬液法，相当于 0.5 麦氏标准。 35±2℃；空气；16－18 小时；测苯唑西林、甲氧西林、萘夫西林和万 古霉素需 24 小时。试验温度超过 35℃不能检测 MRS。
注释
≤16/2
32/2-64/ ≥128/2 2
头孢类（注射药物）（包括头孢菌素Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ和Ⅳ代） B 16 头孢他啶 ≤8 ≥32 四环素类 B 米诺环素 氟喹诺酮类 B 左氧沙星 ≤2 ≤8 ≤2/38 4 ≥8 ≥32 ≥4/76 ≤4 8 ≥16
phenicols B 氯霉素 叶酸代谢途径抑制剂 A 甲氧苄啶/磺胺甲噁唑
R I S R 头孢类（注射药物）（包括头孢菌素Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ和Ⅳ代） B ≥32 头孢他啶 30μg ≤17 18-20 ≥21 碳青霉烯类 B 美洛培南 四环素类 B 米诺环素 叶酸代谢途径抑制剂 A 甲氧苄啶 /磺胺甲 噁唑 1.25/23.7 5μg ≤10 11-15 ≥16 ≥ 8/152 10μg 30μg ≤15 ≤14 16-19 15-18 ≥20 ≥19 ≥16 ≥16
细菌药敏试验及耐药机制 研究进展
安徽省细菌耐药监控中心 安徽医科大学临床检验诊断学教研室 安徽医科大学第一附属医院检验科 徐元宏
一、药敏试验种类
1、 纸片扩散法 2、稀释法 稀释法包括宏量肉汤稀释法(macrodilution test)、微 量肉汤稀释法(microdilution test)、琼脂稀释法(agar dilution test)。 3、E-test法
16 -
6.葡萄球菌属纸片扩散法
试 验条件 培 养基 接 种物 孵 育 Mueller-Hinton 琼 脂 直接菌 落悬液 ，相当 法 于0.5 麦 氏标准 。 35±2℃；空气；16－18 小时；测苯唑西林、甲氧西林、萘夫西林和万 古霉素 需24 小 时。试验 温度超 过35℃不能检 测MRS。
接种物 孵育
推荐的质控菌株 金黄色葡萄球菌 ATCC29213；大肠埃希菌 ATCC 35218（为监控β-内酰 胺酶/β-内酰胺抑制剂纸片用） ；金黄色葡萄球菌 ATCC BAA-977 和金黄 色葡萄球菌 ATCC BAA-976（用于克林霉素诱导试验质量评估）
8.肠球菌属纸片扩散法、液体稀释法、琼脂稀释法