LAMP法检测食品中凝固酶阳性葡萄球菌
食物中毒中LAMP法快速检测金黄色葡萄球菌的研究
食物中毒中LAMP法快速检测金黄色葡萄球菌的研究摘要】目的通过一起疑似金黄色葡萄球菌食物中毒的病原菌检测方法比对，探讨在食物中毒中Loop-Mediated Isothermal Amplification（LAMP）法快速检测的应用。
方法应用LAMP法进行快速检测，并用国标GB 4789.10-2010法和Real-time PCR法检测进行比对。
结果 LAMP法与国标GB 4789.10-2010法、Real-time PCR法结果一致，均为从1份病人呕吐物和1份厨房用具涂抹样中检出金黄色葡萄球菌，肠毒素检测为B+C型。
结论该起食物中毒是由金黄色葡萄球菌肠毒素引起，LAMP法快速灵敏，是一种适用于基层实验室金黄色葡萄球菌食物中毒的快速检测手段。
【关键词】 LAMP 金黄色葡萄球菌食物中毒金黄色葡萄球菌是食品安全国家标准食品微生物学检验常规检测项目之一[1]，是常见的食源性致病菌。
由于致病金黄葡萄球菌能产生肠毒素，故一旦污染食品，在适宜的温度环境下大量繁殖，产生的肠毒素随污染食品进入人体后引起食物中毒。
2012年4月18日，昆明市某酒店7名顾客在就餐2h左右后，相继出现呕吐、恶心、腹痛、腹泻等急性肠胃炎症状。
根据现场流行病学调查以及实验室检测结果分析是由金黄色葡萄球菌引起的食物中毒。
1 材料与方法1.1 标本来源昆明市疾病预防控制中心共采集标本42件，其中患者呕吐物1件，肛拭子7件，剩余食品22件，工作人员手部涂抹样3件，厨房用具涂抹样9件。
1.2仪器与试剂恒温培养箱，VITEK-32全自动微生物鉴定系统，恒温水槽，ABI 7500 Real-time PCR仪；7.5%氯化钠肉汤，Baird-Parker平板，血平板，BHI肉汤，兔血浆，VITEK GPI鉴定卡，金黄色葡萄球菌核酸检测试剂盒（环介导恒温扩增法）（广州华峰生物科技有限公司），金黄色葡萄球菌检测试剂盒（实时荧光PCR法）（深圳市生科源技术有限公司），金黄色葡萄球菌肠毒素三合一金标快速检测卡（北京路桥技术有限责任公司）。
LAMP在食品卫生沙门菌检验中的应用价值
LAMP在食品卫生沙门菌检验中的应用价值分离培养法是国内食品沙门菌检测的常用方法, 其操作流程繁琐, 且需耗费大量的时间。
同时, 针对免疫学方法, 其敏感度不高, 针对聚合酶连反应法, 其需特殊仪器和设备, 导致检测受到限制[1]。
环介导等温扩增技术, 即LAMP,其属于新型等温核酸扩增方法, 操作方式简单、敏感度高等是其主要优点〔2〕。
因此, 为研究LAMP在食品卫生沙门菌检验中的应用价值, 本研究以84件食品样本为对象, 采用2种不同的检测方法, 取得了一定成效, 现将相关报道如下。
1 一般资料与方法1.1一般资料选取2015年3~12月收集的食品样本84件, 其中, 包括20件生鲜肉、巧件熟肉制品、18件生水产品、17件非发酵豆制品、4件冷冻生肉、4件生食类蔬菜和6件鲜榨果汁。
以肠炎沙门菌为参考菌株。
1.2方法1.2.1食品样本前增菌以《食品微生物学检验沙门氏菌检验》为依据, 分别选取25g食品标本, 将其添加至225mlBPw无菌质袋内, 利用拍击式均质器, 进行1~2min的拍打, 基于37°c下, 8~18h为培养时间。
针对冷冻产品, 应以低于45°C为基础条件, 解冻时间不得超过15min.1.2.2LAMP检测方法分别取食品标本前增菌液lml,基于10000r/min指标下, 进行2min的离心, 除去上清液后, 借助核酸通用提取试剂盒, 提取核酸。
与此同时, 取μl上清液, 用于制作待检模板DNA.以食品微生物学检验沙门氏菌检验冲指导, 设计引物, 并检测食品标本增菌液DNA,且以标准的反应体系为指标。
以65°C为条件, 进行60min的水浴, 基于80°C灭活酶前提下, 促使反应体系得以终止。
待结束反应后, 通过肉眼检测, 若表现出混浊现象, 则为阳性, 若不存在混浊现象, 则为阴性。
1.2.3分离培养鉴定基于《食品微生物学检验沙门氏菌检验》指导下, 在轻轻晃动经培养过的食品标本前增菌液后, 以1ml为标准, 将其放置于10mlTTB增菌液中, 以42°C为标准, 18~24h为培养时间。
金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和表皮葡萄球菌LAMP检测方法的建立
金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和表皮葡萄球菌LAMP检测方法的建立金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和表皮葡萄球菌LAMP检测方法的建立引言近年来，食品安全问题引起了广泛关注。
细菌感染是食品中最常见的安全隐患之一，特别是金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和表皮葡萄球菌的污染可能导致食品中毒事件。
因此，发展一种快速、准确、灵敏的检测方法对于食品安全具有重要意义。
本文旨在建立一种利用LAMP技术检测金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和表皮葡萄球菌的方法。
材料与方法1. 实验样品准备：从市场上购买金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和表皮葡萄球菌，采用传统培养方法培养，获得细菌培养物。
2. 提取细菌DNA：采用商业化DNA提取试剂盒，按照说明书操作，提取细菌DNA。
3. LAMP引物设计：根据金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和表皮葡萄球菌的保守基因序列，设计与目标序列互补的引物。
4. LAMP反应体系：按照标准反应体系配制反应液，包括目标DNA、引物、酶和缓冲液。
将反应液加入LAMP反应管中。
5. LAMP反应条件：将LAMP反应管放入恒温水浴中，在特定的温度下反应一定时间。
6. LAMP产物分析：将LAMP反应产物进行凝胶电泳分析，观察是否有特异性扩增产物。
结果与讨论通过实验，我们成功建立了一种利用LAMP技术检测金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和表皮葡萄球菌的方法。
首先，我们从市场上购买了金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和表皮葡萄球菌的培养物，确保实验样品的来源真实性。
其次，我们采用商业化DNA提取试剂盒，成功提取了目标菌株的DNA，为后续的LAMP反应提供了可靠的实验材料。
接着，我们根据目标菌株的保守基因序列设计了特异性引物，确保检测方法的准确性和可靠性。
然后，我们按照标准反应体系配制了反应液，并将反应液加入LAMP反应管中。
通过恒温水浴，我们在特定的温度下进行了LAMP反应。
最后，我们将LAMP反应产物进行了凝胶电泳分析。
结果显示，在金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和表皮葡萄球菌的目标序列位置，出现了特异性扩增产物。
LAMP技术及其在微生物检测中的应用
LAMP技术及其在微生物检测中的应用近年来，随着食品安全事件的频繁发生，食品安全问题受到了越来越多的重视。
然而，在食品微生物检测过程中，传统的检测方法已经远远不能满足微生物快速、简易、高特异性的鉴定要求。
随着分子生物学技术的发展，核酸扩增法已经被广泛应用于病原微生物的鉴定，LAMP法（即环-媒恒温核酸扩增方法）就是近几年发展起来的新技术之一。
1 LAMP技术简介1.1 LAMP技术原理LAMP法是由Notomi等[1]于2000年开发出来的一种连续、恒温、基于酶反应的新型核酸扩增方法，其原理是针对靶基因的6个区域设计两对特殊的内、外引物，利用一种链置换DNA聚合酶（Bst酶）在恒温条件（60-65℃）下启动循环链置换反应。
在靶标DNA区启动互补链合成，结果在同一链上互补序列周而复始形成有很多环的花椰菜结构的茎-环DNA混合物。
LAMP反应过程中，从dNTP析出的焦磷酸根离子与反应溶液中的Mg2+结合，产生副产物（焦磷酸镁）形成乳白色沉淀，加入显色液，即可通过肉眼观察判定扩增与否。
1.2 LAMP技术的优缺点1.2.1 优点1.2.1.1 特异性强、灵敏度高4条引物可以严格识别靶核酸序列上的6个独立区域，反应过程不会受到反应混合物种非靶序列DNA的影响，保证了LAMP扩增的高度特异性。
在检测过程中可以根据是否扩增就能判断目标基因是否存在，可用于细菌或病毒的定性检测。
1.2.1.2 等温高效L AMP在等温条件下扩增，不会因温度改变而造成时间的损失，在1h 内可将靶序列扩增至109~1010倍。
而且受非靶序列的影响小，模板也不需要热变性。
1.2.1.3 整个扩增反应操作简便、快捷LAMP反应过程中会产生白色的焦磷酸镁沉淀，肉眼即可直接观察，是鉴定反应是否进行的最直接方法。
另外，LAMP扩增产物可以像PCR 反应利用凝胶电泳结合成像系统进行鉴定，通过产生的不同梯型来区分特异性扩增和非特异性扩增。
1.2.1.4 实验装置简单，费用相对较低LAMP反应不需要进行模板的热变性、长时间的温度循环、繁琐的电泳和紫外观察等，在操作过程中，仅需要普通的水浴锅或其他可以得到稳定热源的设备即可。
多重荧光LAMP法在食源性致病菌风险监测中的应用
多重荧光LAMP法在食源性致病菌风险监测中的应用
田浩;李光耀;史笑娜
【期刊名称】《食品工程》
【年(卷),期】2017(000)003
【摘要】为解决食源性致病菌传统检测方法耗时长、工作量大问题,利用金黄色葡萄球菌femA序列和沙门氏菌invA序列设计了两套LAMP引物,添加荧光染料建立混合体系,通过恒温荧光检测仪对目标DNA进行扩增得到相关曲线,同时对扩增产物进行电泳分析,并且对100批次食品样品进行了效果验证.试验结果表明,该检测方法的普筛性与特异性良好,灵敏度达到71 CFU/mL,检测过程不易污染、耗时短.该方法可应用于部分食源性致病菌的快速初筛.
【总页数】5页(P23-27)
【作者】田浩;李光耀;史笑娜
【作者单位】河北东淼检测科技股份有限公司科研企划部,河北保定071000;河北东淼检测科技股份有限公司科研企划部,河北保定071000;河北东淼检测科技股份有限公司科研企划部,河北保定071000
【正文语种】中文
【中图分类】TS207.4
【相关文献】
1.多重LAMP—熔解曲线法检测食品中两种食源性致病菌 [J], 姜侃;张慧;汪新;刘鹏鹏;黄建锋;周志南
2.多重PCR法检测鲜切哈密瓜中3种食源性致病菌 [J], 冯可;胡文忠;姜爱丽;萨仁高娃;徐永平;杨柳;王馨
MP技术在食源性致病菌检测中的应用现状 [J], 杨柳;张一;边忠博;陈宇飞
4.多重聚合酶链反应-毛细管电泳-激光诱导荧光法检测三种食源性致病菌 [J], 毛红霞;黎源倩;裴晓方;何超;渠凌丽
5.生鲜肉中3种食源性致病菌Taqman多重荧光定量PCR检测方法的建立 [J], 陈秀琴;林甦;郑敏;黄梅清
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食品中金黄色葡萄球菌检验方法
食品中金黄色葡萄球菌检验方法金黄色葡萄球菌 (Staphylococcus aureus ) 是人类的一种重要病原菌，隶属于葡萄球菌属(Staphylococcus)，有“嗜肉菌"的别称，是革兰氏阳性菌的代表，可引起许多严重感染。
而对于金黄色葡萄球菌在速冻食品中的存在量，卫生部于2011年11月24日公布食品安全国家标准《速冻面米制品》，允许金葡菌限量存在。
实验设备耗材吸管(1ml、10ml)、恒温培养箱(36±1℃)、冰箱、均质器、振荡器、平皿、稀释瓶、天平、显微镜、接种棒等培养基和试剂普通肉汤培养基、胰蛋白胨大豆肉汤、Baird-Prker琼脂平板、缓冲蛋白胨水(BP)、凝固酶试验冻干血浆检验程序(非选择性增菌法)检样25g+225mlBP胨水10ml匀液+10ml双料胰胨肉汤操作步骤1.称取25g固体样品;吸取25mL液体样品，加入225mLBP胨水，固体样品研磨或置均质器中制成混悬液。
2.吸取10mL上述混悬液，接种于10mL双料胰蛋白胨大豆肉汤中，置36±1℃培养2h。
3.再加入20ml 含20%NaCl的单料胰蛋白胨大豆肉汤，置36±1℃培养24±2h。
4.划线转种2个表面干燥的Baird-Parker琼脂平板上，36±1℃培养46±2h。
5.挑取可疑菌落移种到肉汤培养基中，置36±1℃温箱培养24h。
6.取肉汤培养物0.3ml同0.5ml凝固酶试验冻干血浆于8mm*100mm试管内充分混合，置36±1℃培养，定时观察是否有凝块形成，至少观察6h，以内容物完全凝固，使试管倒置或倾斜时不流动为阳性。
试验中需同时做已知阳性和阴性对照。
对可疑结果，应进行革兰氏染色、镜检和其他辅助试验。
7.本菌为革兰氏阳性球菌，排列是葡萄球状，无芽胞，无荚膜，致病性葡萄球菌菌体较小，直径约为0.5～1μm。
在Baird-Parker平板上为圆形、光滑凸起、湿润、直径为2～3mm，颜色呈灰色到黑色，边缘为淡色，周围为一混浊带，在其外层有一透明圈。
LAMP方法在食品微生物检测中的应用
LAMP方法在食品微生物检测中的应用作者：陈跃龙楚雄医药高等专科学校来源：《中国食品》 2018年第15期摘要：近年来微生物食品中毒事件发生率不断增长，因此建立完善的食品安全监管体系，找到一种可靠的食品微生物检测办法至关重要。
LAMP法是在21世纪初期开发出来的恒温、连续性的新型核酸扩增方法，在食品微生物检测中发挥着重要作用。
本文对LAMP方法在食品微生物检测中的应用进行了分析与探讨。
关键词：LAMP；食品微生物检测；应用一、LAMP技术原理LAMP法是在2000年所开发出来的方法，是对靶基因设计出来的特殊内外引物，利用链置换DNA聚合酶，在恒温条件下开启循环链置换反应，在靶标DNA区域启动互补链合成，在同一链上互补序列，通过多次反复形成有很多环花椰菜结构茎环DNA混合物。
在LAMP反应中从NTP析出焦磷酸根离子和反应溶液中的镁离子相结合，从而产生焦磷酸酶，形成乳白色沉淀，加入显色液后即可通过人肉眼观察并判定是否扩增。
二、LAMP方法在食品微生物检测中的应用大肠杆菌检测。
大肠杆菌是可以引起人类发生出血性肠炎的微生物因子，主要是经口传播，虽然大肠杆菌传染病在一些卫生条件良好的国家中已经基本得到控制，但部分地区仍然有大肠杆菌感染问题发生，并受到各国相关部门的高度重视。
由于大肠杆菌类型较多、血清复杂，采用常规的检测方法难以对其进行灵敏、快速、准确的全面检测。
刘倩瑛等人在食品大肠杆菌检测中采用原位LAMP方法对stx2基因进行检测，采用FIFC标记抗体，在紫外线下照射，经试验研究结果发现，原位LAMP与原位PCR相比，其温和渗透性对细胞损伤较小，且在DNA扩增中可以采用荧光抗体标记。
另外还有相关学者发现LAMP方法的背景颜色浅，因此LAMP具有较强的敏感性和特异性，在EHEC检测中较为适用。
沙门氏菌检测。
沙门氏菌是导致食物中毒的主要病原菌，其通过水源和污染食品传播，在食物中毒事件中，沙门氏菌病毒是最为常见的一种病原菌，约占细菌性食物中毒事件的50%。
LAMP技术在动物源性食品安全检测中的应用
LAMP技术在动物源性食品安全检测中的应用边忠博;孙如一;王磊;张一;杨柳;陈宇飞【摘要】近年来,动物源性食品安全问题时有发生,急需发展快速、高效的检测技术.环介导等温扩增技术是一种新的体外扩增特异DNA片段的分子生物学技术,因其具有特异性强、灵敏度高、检测速度快等优点,可以在动物源性食品安全检测中应用.文章针对环介导等温扩增技术在动物源性食品病原菌检测、动物源性成分检测两个方面的应用进行综述,分析LAMP技术的应用优势,旨在为更好地解决动物源性食品安全问题提供帮助.%The problem of animal derived food safety has occurred occasionally in recent years.The fast and efficient detection technique is in urgent need.The loop-mediated isothermal amplification is a new molecular biological technique which can amplify specific DNA fragments in vitro.This technique can be applied in animal derived food safety detection because of its strong specificity,high sensitivity and fast testing speed.The application of LAMP in animal derived food pathogenic bacteria and animal derived ingredients detection are summarized.The advantages of application of LAMP technique are analyzed,which can provide help for solving the problem of animal derived food safety better.【期刊名称】《中国调味品》【年(卷),期】2017(042)011【总页数】3页(P127-129)【关键词】动物源性食品;LAMP技术;致病菌;成分;检测【作者】边忠博;孙如一;王磊;张一;杨柳;陈宇飞【作者单位】吉林工商学院食品工程学院,长春130507;吉林农业大学生命科学学院,长春130118;吉林工商学院食品工程学院,长春130507;吉林工商学院食品工程学院,长春130507;吉林工商学院食品工程学院,长春130507;吉林工商学院食品工程学院,长春130507【正文语种】中文【中图分类】TS207.3动物源性食品是指来源于猪、牛、羊、禽、马属动物、犬、兔、蜜蜂及水产类动物的可供人食用的肉、乳、蛋及制品和副产品[1]。
食品安全国家标准 金黄色葡萄球菌检验
食品安全国家标准金黄色葡萄球菌检验1 范围本标准规定了食品中凝固酶阳性的金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）的检验方法。
本标准第一法适用于食品中凝固酶阳性的金黄色葡萄球菌的定性检验；第二法适用于金黄色葡萄球菌含量较高的食品中凝固酶阳性的金黄色葡萄球菌的计数；第三法适用于金黄色葡萄球菌含量较低而杂菌含量较高的食品中凝固酶阳性的金黄色葡萄球菌的计数。
2 设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：2.1 恒温培养箱：36 ℃±1 ℃。
2.2 冰箱：2 ℃～5 ℃。
2.3 恒温水浴箱：37 ℃～65 ℃。
2.4 天平：感量0.1 g。
2.5 均质器。
2.6 振荡器。
2.7 无菌吸管：1 mL（具0.01 mL 刻度）、10 mL（具0.1 mL 刻度）或微量移液器及吸头。
2.8 无菌锥形瓶：容量100 mL、500 mL。
2.9 无菌培养皿：直径90 mm。
2.10 L涂布棒。
2.11 pH 计或pH 比色管或精密pH 试纸。
3 培养基和试剂3.1 7.5 %氯化钠肉汤：见附录A 中A.1。
3.2 血琼脂平板：见附录A 中A.2。
3.3 Baird-Parker 琼脂平板：见附录A 中A.3。
3.4 兔血浆纤维蛋白原（RPF）琼脂培养基：见附录A 中A.4。
3.5 脑心浸出液肉汤(BHI) ：见附录A 中A.5。
3.6 兔血浆：见附录A 中A.6。
3.7 稀释液：磷酸盐缓冲液：见附录A 中A.7。
3.8 营养琼脂小斜面：见附录A 中A.8。
3.9 革兰氏染色液：见附录A 中A.9。
3.10 无菌生理盐水：见附录A 中A.10。
第一法金黄色葡萄球菌定性检验4检验程序金黄色葡萄球菌定性检验程序见图1。
图1 金黄色葡萄球菌检验程序5 操作步骤5.1 样品的处理称取25 g 样品至盛有225 mL 7.5 %氯化钠肉汤的无菌均质杯内，8000 r/min～10000 r/min 均质1 min～2 min，或放入盛有225 mL 7.5 %氯化钠肉汤无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1 min～2 min。
凝固酶阳性的葡萄球菌可分为金黄色葡萄球菌
凝固酶阳性的葡萄球菌可分为金黄色葡萄球菌、中间型葡萄球菌和家畜葡萄球菌。
因此凝固酶试验阳性者不能定为金黄色葡萄球菌，必须再进行有关生化试验如耐热DNA酶、β-半乳糖苷酶，方可正确鉴定。
中间型葡萄球菌一、病原学食物中毒的细菌病原众多,可按其致病机制分成三类:①细菌污染食品并在其内繁...凝固酶阳性的葡萄球菌常为金黄色葡萄球菌，但一些中间葡萄球菌及猪葡萄球菌亦产生此酶。
所有其他葡萄球菌均为凝固酶阴性，其中最主要的是表皮葡萄球菌及腐生葡萄 ...引发奶牛乳房炎的病菌有哪些？全球品牌畜牧网2014-09-18来源：互联网浏览次数：769次评论:（0）字号：【大中小】在奶牛生活环境中分布着各种各样的的微生物，大多数乳房炎是由链球菌属和大肠菌群引起的，现将乳房炎的病原菌分为以下几类介绍：（一）传染性微生物1、金黄色葡萄球菌葡萄球菌属于微球菌科，葡萄球菌属，为革兰氏阳性球菌。
本属细菌分布于自然界及动物的饲料及环境中，也存在人和动物的皮肤黏膜。
大部分是不致病的腐生寄生菌，仅少数了引起人和动物的局部炎症感染，甚至发生败血症。
能引起奶牛、羊及其他动物乳房炎的葡萄球菌有金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、猪葡萄球菌、中间葡萄球菌、腐生葡萄球菌、溶血葡萄球菌等。
其中金黄色葡萄球菌是主要致病菌，其余为凝固酶阴性葡萄球菌，它们是牛体的常在菌群。
2、无乳链球菌和停乳链球菌链球菌种类很多，广泛存在于自然界。
常分布在水、乳、尘埃、动物植物的表面、呼吸道、消化道以及泌尿生殖道黏膜。
由链球菌所致的奶牛传染性乳房炎，只要是无乳链球菌，该菌常通过挤乳或用具传播而引发乳房炎。
停乳链球菌一般归为环境链球菌类。
3、支原体支原体又称霉形体，是目前发现的最小、最简单的细胞，也是唯一一种没有细胞壁的原核细胞。
（二）环境性微生物环境性微生物包括环境性链球菌、凝固酶阴性葡萄球菌、肠球菌、大肠杆菌、肺炎克雷伯菌、产气肠杆菌、沙雷氏菌、变形杆菌及绿脓杆菌等。
通常为非传染性的条件致病菌。
应用LAMP快速检测金黄色葡萄球菌的研究
应用LAMP快速检测金黄色葡萄球菌的研究唐梦君;周生;葛庆联;张小燕;蒲俊华;高玉时【期刊名称】《现代食品科技》【年(卷),期】2011(027)006【摘要】建立环介导等温扩增技术(Loop-medisothermalamplification,LAMP)快速检测金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus).根据金黄色葡萄球菌nuc基因序列中的保守区域设计了4条特异性引物,在65℃等温条件下,45min即可扩增出梯形条带.LAMP检测金黄色葡萄球菌纯培养物的灵敏度为54CFU/mL.对11株细菌进行LAMP扩增,仅3株金黄色葡萄球菌得到阳性结果.应用该方法对240份鸡蛋样品进行检测,检测结果与国标方法相符合,12份蛋壳金黄色葡萄球菌检测阳性,蛋内容物均未检出.LAMP检测金黄色葡萄球菌灵敏度高,特异性强,耗时短,方法简便,有望发展成为快速检测食品中金黄色葡萄球菌的有效手段.【总页数】4页(P719-722)【作者】唐梦君;周生;葛庆联;张小燕;蒲俊华;高玉时【作者单位】农业部家禽品质监督检验测试中心江苏扬州 225003;中国农业科学院家禽研究所江苏扬州 225003;中国农业科学院家禽研究所江苏扬州 225003;农业部家禽品质监督检验测试中心江苏扬州 225003;中国农业科学院家禽研究所江苏扬州 225003;农业部家禽品质监督检验测试中心江苏扬州 225003;中国农业科学院家禽研究所江苏扬州 225003;农业部家禽品质监督检验测试中心江苏扬州225003;中国农业科学院家禽研究所江苏扬州 225003;农业部家禽品质监督检验测试中心江苏扬州 225003;中国农业科学院家禽研究所江苏扬州 225003【正文语种】中文【相关文献】1.冻鸡肉中金黄色葡萄球菌LAMP快速检测方法的建立 [J], 袁光宇;谢体波;龚维瑶;吴紫洁;程茹;张凯;钟新敏2.金黄色葡萄球菌LAMP可视化快速检测方法的建立 [J], 宋涛平;邱华丽;王淑娟;彭新凯;杨丽霞3.原料乳中金黄色葡萄球菌环介导等温扩增(LAMP)检测方法的建立及应用 [J], 李晓霞;贾淼;金君华;张红星;刘慧;谢远红4.微流控LAMP芯片构建及在MRSA快速检测中的应用研究 [J], 管潇;张梦军;韩清娟;冯志强;曹文轩;刘明;郭嘉伟;张惠静5.牛乳房炎金黄色葡萄球菌LAMP检测方法的建立及初步应用 [J], 丛日华;金剑;徐滢;张琪;许信刚因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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参考 文献 ：
【 汪隽 ， １ ］ 范必威 ， 许淑霞 ． 固相萃取一液质 联用法测 定乳制 品中的
对羟基苯 甲酸酯 食品科学 ，０ ８ ２ （） ２ — ３ ２ ０ ，９７： ８ ３ ｌ ３
［ 刘义 ， ２ １ 朱显琴 ， 邱宏 ， 高效 液相 色谱法 同时测定测定食 品中糖 等．
ｃ ｎ ｉ ｅ ｔ ｔ ｈ ｅ ｌ ｍｅＰＣＲ ｔｏ ｎ ｔ ｏ ． ｅｓ ｎ ｉｉｉ ｆ＿ ｏ ｓｌ ｎ ｈ ｔ ｅｒａｔ ｉ ｗｉ ｉ ｍｅ ｈ ｄ ａ ｄ ＧＢ ｍｅｈ ｄ Ｔｈ ｅ ｓｔ ｔ ｏ ＡＭＰ ｄ ｔ ｃｉｎｗａ ． Ｕ／ Ｏ － ｖｙ Ｉ ｅｅ ｔｏ ｓ １８ ＣＦ Ｉ ０ｇ
定Ⅲ． 国卫生检验杂 志，０ ５，５Ｕ： ６ ６ 中 ２ ０ １（ ６ — ７
收稿 日期 ：０ ０ １— ８ ２ １— ０ ０
检测 分析
张宏伟 等 ：Ａ Ｐ法检测食品 中凝 固酶阳性 葡萄球 菌 ＬＭ
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浆凝 固酶）能加速人 或兔血 浆 的凝 固 ， 护病 原菌不 ， 保 被吞 噬或免受抗体 等的作用 。凝 固酶是一种类 似凝 血 酶原 （ ｒ ｈｏ ｂｎ 的物质 ， Ｐｏ ｒｍ ｉ） ｔ 通过 血浆 中的激 活 因子 变成 凝血样物质后 ， 能使 血浆 中的纤 维蛋 白原 变为 才 纤维蛋 白因而血浆凝 固。致病性 葡萄球 菌还产生 第 ２ 种血浆凝 固酶 （ 凝聚 因子 ）结合在菌细胞 上 ， ， 在血浆 中 将球菌凝集成堆 ， 无需血浆激活 因子 ， 而是直接作用 于 敏感 的纤维蛋 白原 。在抗吞噬作用方面 ，凝聚 因子 比 游离血浆凝 固酶更为重要 。 血浆凝 固酶是鉴别有无 致病性 的重要指标 ， 也是 葡萄球菌鉴 定必检 生化指标 ， 际鉴定 时采用试 管法 实 和压片法分别鉴定凝 固酶和凝集 因子［ 。 ７ 产生血浆凝 ＿ 砌 固酶和威 凝集 因子 的葡萄球 菌有 ： 金黄色葡 萄球 菌金
Ｚ Ａ ＧＨ ｎ － ｅ ＬＵＷｅ， Ｏ ｉｐｎ ， Ｈ Ｎ ｎ ｊ Ｈ Ｎ ｏｇ ｗ ｉ Ｉ ｉＨ ＵＬ— ｉｇＺ Ｅ ＧＷｅ－ｉ ， ｅ
（ ｉ ｊ ｎｒ－ ｘ ｓｅｔ ｅ ｎ ｕ ｒｎｉ ｕｅｕ Ｔａｊ ０ ２ １ Ｃ ｉａ Ｔａ ｉ Ｅ ｔ ｅｉＩ ｐ ｃ ｎ ｄ ａａ ｔ ｅ ｒａ ， ｉ ｉ ３ ０ ０ ， ｈｎ ） ｎｎ ｙ ｔｎ ｉ ａ Ｑ ｎＢ ｎｎ
Ｓａ ｙｏ ｏ ｇ ｌｓ ｎ ｎ ｇ ｔｖ ｔａｎｓｏ ｔｐｈ ｌ ｃ ａ ｕａ ｅｎ ｇ ｔ ｅ Ｔｈ ｐ ｃｆｃｔ ｆＬ ｔｐｈ ｌ ｃ ａ ｕａ ｅａ ｄ３１ ｅ ａｉｅｓｒ ｉ ｆＳａ ｙｏ ｏ ｇ ｌｓ ｅ ａｉ ． ｅｓ ｅ ｉ ｉｙｏ ＡＭ Ｐ ｄ ｔ ｃｉｎ ｗａ ｖ ｉ ｅｅ ｔｏ ｓ
特异性 Ｌ ＭＰ引物 ， Ａ 用来快速检 测金 黄色葡萄球 菌及 其它凝 固酶 阳性葡萄球菌 。
１ 材料及方法 １ 材料 ． １
１ ． 实验 菌株 ．１ １
菌株名 称 、 源及 编号 见表 １ 来 。
表 １ 实验菌株名称及来源
Ｔａ ｌ Ｓ ｒ ｉ ｓｏ ｈ ｔ ｙ ｂ ｅ１ ｔａ ｎ ｆｔ ｅｓｕｄ
菌名 Ｓ ｕｅｓ ．ｒ ａ ｕ
Ｓ ｕｅ ｓ ． ｒｕ ａ
中文名 金黄色葡萄球 菌
金黄色葡萄球菌
菌种编号 Ａ Ｃ ４ ３０ Ｔ Ｃ ３０
Ａ Ｃ ３５ １ Ｔ Ｃ ３ ９
菌名 Ｓ ｙｇｎｓ ． ｏｅ ｅ ｐ
Ｓｂｖｓ ．ｏ／
中文名 酿脓链球菌
波 比斯链 球菌
菌种编号 Ｃ Ｃ ３０７ ２ Ｍ Ｃ ２６—
黄亚种 （ ｒ ｓｂｐｏ ｒ ）金黄 色葡 萄球 菌厌 氧 Ｓ ｅ ｕｓ．ｚ Ｊｅ 、
性 肠炎 、 心包 炎等 ， 甚至 败血 症 、 脓毒 症等 全身 感染 。
凝 固酶阳性 葡萄球菌能产 生一种血浆凝 固酶 （ 游离血
亚种 （ ．２ ｅ ｓｂｐａａｒｂｕ ） Ｓ ｏｒ ｕ ｓ． ｅｏｉ 、海 豚 葡萄 球 菌 （． ￣ ｎ ｓ ｓ ｄｌｈｎ） 猪 葡 萄 球 菌 溶 酪 亚 种 （． ｉ ｓｓｂｐ ｅ ｉｉ、 ｐ Ｓｈ ｃ ｕ ｓ． ｙｕ ｃｒｍ ｇｇｓ 、 ｈｏ ｏｅｅ ）路邓葡萄球菌 （． ｇ ｕｅｓ ）中间葡 萄 Ｓ ｕｄ ｎ ｎｉ 、 １ ｓ 球 菌 （． ｔ ｍｅｉ ） Ｓ ｎｅ ｄｕ 、施 氏 葡 萄 球 菌 凝 聚 亚 种 （． ｉ ｒ ｓ ｓ ｓｈｅ ｅｉｕｓ ．ｏｇｌ ｓ 、 氏葡 萄球 菌施 氏亚种 （． ｃｌｉｒｓｂｐ ｃａ ｕ ｎ ）施 ｆ ａ Ｓ ｓｈｅ ｅｉｕ ｓ． ｈｅ ） ｃ ｌｉｒｓｂｐ ｃｌ ｆ ｓ 和鲁 氏葡萄球菌 （．ｔ ｅ… ５ Ｓｕａ） １ １ｒ 。 依据血 浆凝 固酶仅 在凝 固酶 阳性葡萄球 菌 中表 达 、 分
Ａ Ｃ ３３７ Ｔ Ｃ ３ １
Ｓｕｕ ．ｒｓ ａｅ
Ｓｏ ｒｕ ．ｚ ｓ ｌｅ Ｓｄ ｌｈｎ ．ｅｐ ｉｉ
金黄色葡萄球菌
金黄 色葡萄球菌 海豚葡萄球 菌
Ｃ Ｃ ２０ １１ Ｍ Ｃ ６ ７ —
Ｃ Ｃ ６ ７ ～ ＭＣ ２ Ｏ ２ １ Ａ Ｃ ４ １２ Ｔ Ｃ ９７
Ｓ ｇｌ ｔ ｅ ． ａ ｃｉ ａ ａ ａ
均在表 ３的数据之 间 ，满足液相 色谱 分析方法 的实验
【 黄百芬， ３ 】 张文娟， 向红． 沈 高效液相色谱法 同时测定酱油或 饮料 中
的 ８ 防腐剂和 ３ 种 种甜 味剂［ ． Ｊ 中国卫生检 验杂志 ， ０ ， （ ） ］ ２ ５１ １ ： ０ ５ Ｏ
１ ０ —１ １ ２ ８ ２１
道和上 呼吸道较 少见 ） 萄球 菌在多数 时 间是无 害 。葡 的 ，然而 当皮肤破损或有 其他损 伤时细菌可通过机 体 这种 防御机制 而引起感染 。葡萄球菌能感染身体 的任 何部位 ，而症状也视感染 的部位而定 。感染 的表现可
以从很轻微直 到威 胁生命 。 凝 固酶 阳性 葡萄 球菌 是人 类 化脓 感染 中最 常见
摘 要： 建立凝 固酶 阳性葡 萄球 菌环介导等温扩增方法（ Ａ ）运 用在食 品样 品检测 中， Ｌ ＭＰ ， 与实时荧光 Ｐ Ｒ方法及 国 Ｃ
家标 准检测 方法进行 比较 。 以毒 力 因子——凝 固酶的编码基 因ｃａ为 目的基 因设计 引物 ， ｏ 建立环介 导等温扩增 方法，
对 ９株凝 固酶 阳性 葡萄球 菌和 ３ 株 对照菌（ ｌ 均为凝 固酶阴性 ） 进行测试 ， 并对 ５种共 １ ４ 份食品进 行检 测。建立的 １ ３
Ｌ ＡＭＰ ｄ ｔｃｉｎ ｔｒ ｅｅ ｈ ｏ ｇ ｎ ｔ ｐ ｃｆ ｐ ｉ ｒ ．Ｔ ｅ ｄ ｔｃｉｎ ｗａ ｅ ａ ｕ ｔｄ ｂ ｔａ ｎ ｆ ｅｅ ｔｏ ａ ｇ ｔｄ ｔ ｅ ｃ ａ ｅ ｅ ｗｉｈ ｓ ｅ ｉ ｃ ｒｍｅ ｓ ｈ ｅ ｅ ｔｏ ｓ ｖ ｌ ａｅ ｙ ９ ｓｒ ｉ ｓ ｏ ｉ
要 求 。本方 法净 化效果好 ， 灵敏 度高 ， 复性好 ， 以 重 可
作 为一针检测 １ 防腐剂 的高通量检测方法 ， Ｏ种 同时满 足 Ｇ ２ ６ — ０ ７ 食 品添加 剂 使用 卫 生标 准 》 Ｂ ７０ ２０｛ 中规 定 的酱油 中的多种 防腐剂 的检测需求 。
［ 龙朝 阳， 秀敏 ． 中 ４ ４ ］ 许 食品 种常用尼 泊金 酯的高效液相 色谱法测
２ ５ ＣＦ １ ０ ｇ ｏ ｔｐｈ ｌｃ ％ ｕ ａ ｅ ｏ ｄ ． Ｕ／ ０ ｆＳ ａ ｙｏ ｏ ｏ ｌｓ ｆｏ ．Ｗ ｉｈ ｔｅ ［ＡＭＰ ｔ ｏ ｅｅ ｔｄ ４１ ｆｏ ａ ｌ ｓ ｉ ｖ ｔ ｈ ， ｍｅ ｈ ｄ ｗｅ ｄ ｔ ｃｅ １ ３ ｏ ｄ ｓ ｍｐ ｅ ｎ ｆ ｅ ｉ ｃ ｔｇ ｒｅ ． ｔ ｎ ｅ ｏ ｏ ｃｍｅｈ ｄｆｒｅ ｔｎｄｉ ｏ ｄｄ ｔｃｉｎ． ａ ｅ ｏ ｉｓ Ｉ＂ ａ ｃ ｎ ｍｉ ｔ ｏ ｏ ｘ ｅ ｎｆｏ ｅｅ ｔｏ Ｓ
物 。约 ２ ０％～ ０ ３ ％健 康成人 的鼻腔 里和皮肤上在 正常 情况下 即有 葡萄球 菌（ 口腔 、 在 乳腺 、 泌尿生 殖道 、 消化
基金项 目： 质检 总局科技计划项 目（ 编号 ２０ Ｉ ３ ） ０师 ， 士 ， 究方 向 １７ ， 汉 ， 硕 研
精钠 、 甲酸 、 苯 山梨酸 、 富马酸 二 甲酯 和脱氢 乙酸钠 【． Ｊ 中国卫 ］
生检验杂志 ，０ ９ １（） ８ — ８ ２ ０ ，９３： ２ ５ ３ ５
本 方 法对 多种 牛奶 、 乳饮 料 、 物蛋 白饮 料进 行 植
了分 析 ， 在线性范 围内其 加标 回收率和相 对标 准偏差
－＝ ２ ＝ ６
２１ ０ １年 ５月 第３ ２卷第 ５期
食品研究与开发
Ｆ ｏ ｅｅｒ ｎ ｅｅ ｐ ｎ ｏｄＲ ｓ ｃ Ａ ｄＤｖｌ ｍｅｔ ａｈ ｏ 检 测分 析
Ｌ ＭＰ法检测食品中凝固酶阳性葡萄球菌 Ａ
张宏伟 ， 刘伟 ， 丽萍 ， 侯 郑文杰 ’ （ 天津 出入 境检验检疫局 ， 天津 ３０ ０ ） ０ ２ １
Ｋｅ ｏｄ ： ｔ ｈ ｌ ｏｇ ｌ ｅ Ｌ ｏ － ｅｉｔ ｏ ｅｍａａ ｐ ｆ ａ ｏ （ Ａ ） ｅａ ｅ ｅ ｙｗ ｒ ｓＳ ｐ ｙ ｃａｕａ ； ｏｐ ｍ ｄ ｅ ｉ ｔ ｒ ｌ ｍ ｌ ｃｔ ｎ Ｌ ＭＰ ； ｏ ｎ ｏ ｏ ｓ ａ ｄｓ ｈ ｉ ｉ ｉ ｇ
葡 萄球 菌是 一类 革 兰 氏染色 呈 阳性 的病原 微 生
Ｓｈｍｏ ｔ ．ｅ ｌ ｉ ｙｃ Ｓｈｍｏ ｔ ．ｅ ｌ ｉ ｙｃ
无乳链球菌
甲型溶血性链 球菌 甲型溶血性链 球菌
Ｃ Ｃ ２ １ ＭＣ ３ １６
Ｃ Ｃ ２０—２ ＭＣ ３ ２ ５ １ Ｃ Ｃ ２０ ＭＣ ３ ２ ９
ｓ ｕｄ ｎｎｉ ． ｇ ｕｅ ｓ １ ｓ
Ｓｉｔｒ ｅ ｉｓ ． ｅｍ ｄｕ ｎ
Ａｂ ｔａ ｔ ｓ ｒ ｃ ：Ａ ｏ ｅ ＡＭ Ｐ ｄ ｔｃｉ ｎ ｍｅｈ ｄ ｏ ａ ｙ ｏ ｏ ｇ ｌｓ ｎ ｆ ｏ ｓ ｄ ｖ ｌｐ ｄ ｉ ｒ ｓ ｎ ｔ ｄ ． ｅ ｎ ｖ ｌＬ ｅ ｅ ｔ ｔｏ ｆＳｔｐｈ ｌ ｃ ａ ｕａ ｅ ｉ ｏ ｄ ｗａ ｅ ｅ ｏ ｅ ｎ ｐ ｅ ｅ ｔｓｕ ｙ Ｔｈ ｏ