食用菌三级菌种制作技术

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。 4. 栽培种:由原种再扩大接种一次培养而得。直接应
用于生产。 5. 消毒和灭菌。
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母种
原种
栽培种
第一节 制种场地、设备等
一、制种场地 二、常用设备 三、制种用具 四、消毒药品
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一、制种场地
➢ 闲散房屋均可用。新建时选择场地要注意:交通 方便,水电齐全,周围环境要卫生。
4. 培 养 室 环 境 污 染 。 培 养 室 环 境 不 卫 生 , 或 通 风 不 良、潮湿等导致棉塞等封口材料受潮而污染。
▪ 措施:选择清洁、高燥的场地作菌种培养室。 5. 破 口 污 染 。 灭 菌 操 作 或 运 输 中 不 小 心 , 使 容 器 破
裂或出现微孔而污染。 ▪ 措施:灭菌操作或运输中要轻拿轻放,所用器具
• 装料设备:人工装料或用装瓶装袋两用机 。关键是料的松紧度,可3-5人合作,约 1000袋/h。
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(二)灭菌设备
❖ 根据灭菌压力:高压灭菌设备和常压灭菌设备。 1. 高压灭菌特点:温度高,灭菌速度快,灭菌彻底
,但每次灭菌量小,投资较大。 高压灭菌设备:①手提式高压灭菌锅。②立式高 压灭菌锅。③卧式高压灭菌锅。
➢ 建造可参照 “U”字型房,以方便生产。包括: 配料室、灭菌室、冷却室、接种室、菌种培养室 、销售室以及库房等。
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二、常用设备
(一)拌料和装料设备 (二)灭菌设备 (三)接种设备 (四)培养设备
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(一)拌料和装料设备
• 拌料设备:可人工拌料,也可用拌料机, 有桶式和开放式两种。
点燃酒精灯,种菇表面消毒后从中间纵向撕开, 用无菌小镊子夹取菌柄、菌盖交界处的菌肉,迅 速放入培养基上,塞上棉塞。特殊种类:灵芝、 金针菇、鸡腿菇等。
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⑥ 培养。适宜条件下,2-3天组织块上即萌发出菌丝, 8-10天可长满。期间要检查,从中选留无污染、 菌丝洁白浓密、长速正常的菌种。
1.组织分离的概念、种类和特点
① 概念:是指在双核菌丝的组织上切取一块组织, 使其在培养基上萌发而获得纯双核菌丝体的方法 。称作原始母种。
② 种类:据切取组织的来源,分为子实体组织分离 、菌核、菌索组织分离和基内菌丝组织分离。
③ 特点:简单易行;为无性繁殖。
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2.平菇子实体组织分离方法
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(四)培养设备
1. 培养室:要清洁卫生,有调温设备。可用于原种 、栽培种培养,要做一些培养架,便于菌种检查 和提高空间利用率。
2. 电热恒温培养箱:温度可调,容积小。
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三、制种用具
1、酒精灯; 2、托盘天平; 3、地泵; 4、水桶、盆、铝锅; 5、镊子; 6、接种钩和接种铲; 7、试管、菌种瓶和菌种袋; 8、漏斗; 9、电炉或煤炉; • 另外,还需温度计、湿度计、量筒和量杯、
• 高压灭菌:1.4~1.5kg/cm2压力下灭1.5~2h,压 力不稳或压力低时要延时。高压灭菌应注意:
a. 灭菌锅内冷空气必须排尽。否则会产生假蒸汽压 。
b. 培养基必须排放有序,蒸汽畅通。 c. 灭菌完毕应缓慢减压。自然降温或缓慢排气,防
止液体突然沸腾弄脏瓶塞,或瓶、袋胀破。 d. 棉塞防湿。灭菌时棉塞不能接触锅壁,并盖报纸
4.灭菌:与原种相同。
(二)栽培种的制作
1. 场地消毒:同前。 2. 接种方法:双手表面消毒后进入接种箱;原种
表面消毒,放于三角架或空瓶上,瓶口表面消 毒、火焰灭菌;用镊子把菌种扒成1-2cm小块, 均匀接于料面,绑口。
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接种时注意: 1)接种过程应在酒精灯旁进行。 2)每瓶原种接栽培种10~15袋(两头接种)或50瓶 左右。 3)接种用具使用前表面消毒,火焰灭菌。 4)接完种后,据接种量确定封口松紧度。
4.5学时
第二章 食用菌制种技术
• 关于制种的几个概念 第一节 制种场地、设备、用具及消毒药品 第二节 三级菌种制作技术 • 本章重点
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有关概念
1. 菌种:由人工方法培育出来的纯双核菌丝体。 2. 母种:由孢子或者组织分离而得到的最初菌种。 3. 原种:将母种扩大到新培养基上培育出来的菌丝体
➢ 基内菌丝组织分离以及菌核和菌索的组织分离过 程类似,只是所取部位不同。
➢ 原始母种还可转接扩繁3-4次,以增加母种量。 ➢ 长满后暂时不用的母种要置于2-5℃下冷藏。
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(三)母种的扩大
1. 培养基的制备(同前) 2. 接种场地的消毒灭菌(同前) 3. 母种的扩大 4. 培养
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2.常压灭菌特点:容量大(0.5-1吨料/次),投资 小,但时间长,灭菌效果较差。 常压灭菌设备:常压灭菌灶、灭菌室或灭菌包 (可利用节能型多功能蒸汽炉或普通锅炉)。
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(三)接种设备
1. 洁净工作台:适合接母种和少量原种。 2. 接种箱:成本低,容量较大,适合各级菌种。 3. 接种帐:适于接栽培袋,但效果稍差。 4. 接种室:与接种帐类似。 5. 电炉和蒸汽接种:简易,成功率80%以上。
第二节 三级菌种制作技术
一、母种制作技术 (一)母种培养基制备 (二)组织分离法 (三)母种的扩大
二、原种制作技术 (一)原种培养基的制备 (二)原种的制作
三、栽培种制作技术 (一)栽培种培养基制备 (二)栽培种的制作
四、菌种污染的原因及防止措施
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ห้องสมุดไป่ตู้
一、母种制作技术
(一)母种培养基的制备 1. 培养基的概念 2. 常用的母种培养基配方 3. 母种培养基的制作
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三、栽培种制作技术
(一)栽培种培养基的制备 • 培养基配方:与原种培养基可以相同。 1. 菌种袋规格:选用聚丙烯或高密度聚乙烯塑料
袋。①17×32cm,一端开口,每袋装干料6两。 ②17×40cm,两端开口,每袋装干料1斤。
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3.拌料装袋,注意: 1)料松紧度适宜;袋壁光滑。 2)料面要平,中间打孔,以利通气。 3)绳要绑紧,尽量排除袋内空气,防止涨袋。
▪ 措施:锅内空气排尽;保证灭菌压力和时间。
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2.菌种带杂菌。表现为菌种块周围首先污染。 ▪ 措施:选用纯正菌种。 3.接种操作中污染。污染点常分散在培养基表面。
原因:接种时无菌操作不严格。 ▪ 措施:接种场所及工具消毒、灭菌要彻底,接种
操作在灯焰形成的无菌区进行,并要敏捷迅速。
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3.母种的扩大
要严格无菌操作。母种试管表面消毒,然后靠近 灯焰用接种钩将母种横切成若干份,再用接种铲 将横切的母种分成2-3份,取一份带1∼2mm厚的 培养基放入新的培养基斜面上。
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4.培 养
在适宜条件下培养。2-3天后,检查菌丝的生长 及杂菌污染情况,若在接种块或培养基表面上出 现独立的小菌落或奶油状小点,即为污染,应立 即淘汰。
麦粒预处理:冷水浸泡12小时后水煮,开锅后文火20min左右,麦粒 煮透,胀而不破,用水冷却后沥干表面水分,拌入石膏即可。
2.原种培养基制备
① 选定配方。分别称取各物质。 ② 加水拌料。含水量约60%~65%,料水比约
1:1.3~1.5。关键是拌匀,用量少的水溶性物质 要先溶于水,再拌入料中。
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磨口瓶、塑料绳、报纸以及pH试纸等。
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四、消毒药品
1. 75%酒精
2. 40%甲醛+高锰酸钾
3. 汽雾消毒剂 4. 高锰酸钾(0.1%-0.2%)
5. 5%石炭酸(苯酚) 6. 1%-2%来苏儿
7. 2%-5%漂白粉 8. 硫磺
• 各种药品最好轮换使用,以防产生抗药性。
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③ 装瓶。常用容器为750ml罐头瓶或菌种瓶,每瓶 装干料2.5~3两。料要装匀,松紧适度,装至瓶 肩下1cm处,料面压平。
④ 打洞封口。擦净瓶口,中央打直径2cm的孔至瓶 底。用两层报纸和一层聚丙烯膜封口。打洞可 增加料底透气性。
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⑤ 灭菌:高压灭菌或常压灭菌。
• 常压灭菌:视灭菌量,需8~10h以上。注意: 一是培养料量要适中,物品排列合理,保证蒸汽 流通。二是大火猛烧,防止压力忽高忽低。三是 灭菌后闷4~6h再出锅。
烧开后减小火力并搅拌1min左右。
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3) 分装试管。常用试管为18mm×180mm,每管约 装培养基8-10ml。加棉塞后3个一把绑好。
4) 高压灭菌。在1.1-1.2kg/cm2压力下灭菌30-40min 。灭菌程序:放入物品,拧紧锅盖加热,当压力 达到0.5kg/cm2时,排出冷空气,关闭放气阀。压 力上去后记时,维持所需时间。
3. 培养:同原种。
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三级菌种生产的工艺流程
四、菌种污染原因及防止措施
(一)常见杂菌种类:细菌、酵母菌、放线菌和 霉菌。
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(二)污染原因及防止措施
1. 培养基灭菌不彻底。表现为瓶壁和袋壁上出现 杂菌菌落。原因:灭菌压力或时间不足,或者 高压灭菌时锅内空气没有排尽。
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二、原种制作技术
(一)原种培养基的制备 (二)原种的制作
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(一)原种培养基的制备
1.常用原种培养基配方(%)
编号 麦粒 棉子皮 木屑 麸皮 1 98
2 65 33
3
77-87
20-10
4
82
10
5
41
41 15
6
82 15
玉米面 5
蔗糖 石膏 2 2
12 12 12 12
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5) 摆斜面。灭完菌后,锅体自然冷凉,压力降到 0.5kg/cm2以下时,缓慢放气,气排尽后取出试 管,趁热摆斜面,40℃以下即可凝固。
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母 种 培 养 基 制 作 流 程
(二)菌种组织分离法
1. 组织分离的概念、种类和特点 2. 组织分离的方法
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1.培养基的概念
➢培养基是按照食用菌生长繁殖所需要的各种 营养,用人工方法配制而成的营养基质。
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2. 母种培养基配方(g/1000ml)
编号 土豆 棉籽皮 木屑 发酵料 麸皮 葡萄糖 琼脂 蛋白胨
1
200
20
2
200
20
3
100 100
50 20
4
100
100
50 20
或防水纸,防止冷凝水打湿棉塞。
(二)原种的制作
1. 场地消毒:将料瓶和用具放入接种箱熏0.5~2h。 2. 接种:母种表面消毒后带入接种箱,点燃酒精灯
,再次对试管外壁消毒。在灯焰范围内,用接种 钩将母种分成4~6份,取一份放入料面中部,封 口。两人合作既好又快。 3. 培养:在适宜条件下培养。定期检查。菌丝长满 后,再继续培养3~5天。
① 培养基制备。 ② 种菇选择:是指用来进行组织分离的子实体。
要选择适宜出菇期出菇早、出菇整齐、形态正 常、无病虫害、产量高的栽培袋,从上选择肥 大、肉厚、6成熟的幼嫩子实体,切去多余菌柄 。 ③ 接种场地消毒。
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④ 种菇处理:表面消毒。 ⑤ 接种过程:双手表面消毒,把种菇带入接种箱,
5
200
20
20 20 20 2-10 20 5 20 5-10
除配方1,其它均需加入KH2PO43克,MgSO41.5克,VB12片。
3.母种培养基的制作
➢ PDA培养基的制作过程: 1)煮土豆,取滤液。开锅后,文火煮30min,适当
搅拌,使营养充分溶出。 2)补足水,加药品溶化。琼脂溶解较慢并易溢锅,
不能带毛刺。
结束
本章重点
1. 菌种的本质,三级菌种的概念。 2. 三级菌种的制作方法以及制作过程中应
注意的问题。 3. 常用的消毒、灭菌方法。
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结束
复习思考题
1. 什么是菌种? 2. 什么是三级菌种?为什么要制作三级菌种? 3. 消毒和灭菌的概念?常用消毒、灭菌方法有哪些? 4. 如何提高制种的成功率和菌种质量? 5. 菌种制备过程中常见的污染原因及防止措施有哪些?
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