高中生物实验：细胞培养

高中生物实验：细胞培养
玻璃吸管和玻璃培养瓶的消毒:1)高压蒸汽灭菌15分钟以上;2)干烤消毒140度2小时以上;
无菌工作台先清洗后用75%酒精擦拭干净，紫外线照射40分钟以上;各种培养板照射3小时以上;
培养基(pH7.2)和血清配制好后要做无菌试验:将血清按10%加入培养基内，用无菌的玻璃离心管或玻璃瓶取完全培养基5-10ml置培养箱内培养2-3天，肉眼见无浑浊或沉淀等异物.分装后置-20度保存;
消化液(pH7.8)或其它加入液，应用高压蒸汽灭菌或一次性无菌滤器过滤除菌，分装成支置-20度保存;
各种炒娴囊禾甯次率庇Ρ咭”呷诨?否则有的液体(特别是培养基)容易产生沉淀.
培养箱应先用清水清洗后用75%酒精擦拭一遍(如有紫外线的应照射1小时以上，如有高温灭菌的应按程序来菌).至少每月一次.
进入操作时应注意先清洗双手及手腕，然后用75%酒精擦拭，操作时注意无菌台内空间层次.手及物品不要在暴露的瓶口上方来往，如果数量较多，培养瓶应放在与酒精灯平行地方便于操作，瓶与瓶之间应相隔一定的距离，开瓶(盖)时应先用75%酒精反复擦拭或用灯烧，开开后应用灯先烧口，然后烧盖.用完后同样操作.整个操作过程尽量在无菌台靠里面一点.
复苏:
应遵守慢冻快融的原则.先将水温锅调至37-37.5度，取出冻存的细胞迅速放入后交细胞面浸至水面以下不断摇动至融化.
在无菌台内将完全培养基加入50ml的小培养瓶内，约5ml左右，然后用无菌吸管从冻存管内取出细胞，置培养并内轻轻摇晃，使细胞均匀后置培养箱内培养.
贴壁细胞:
对于贴壁细胞应先吸(倒)尽培养基，吸的越干净越好，以免中和后加入的消化液，使强度减弱.50ml培养瓶加入消化液约0.6ml，按此比例进行消化，(根据配制强度经验)，晃动使消化液铺均匀置37度培养箱约2分钟，镜下见细胞收缩变圆或少数脱落后，轻轻振动瓶底使细胞全部脱落，加入2-3ml完全培养基后，轻轻吹打，使细胞基本成单个悬浮，然后分置其它无菌培养瓶内，加入完全培养基后继续培养或实验.
悬浮细胞:
一般传代可直接将细胞原液分置其它培养瓶内，加入完全培养基继续培养，如要高浓度可先离心500rpm，5min后加入完全培养基，轻轻吹匀后，分置其它培养瓶内加入完全培养基继续培养.
实验原理：DNA绿色，RNA红色
分布：真核生物DNA主要分布在细胞核中，线粒体和叶绿体内也含有少量的DNA；RNA主要分布在细胞质中。

观察叶绿体和细胞质流动
材料：新鲜藓类叶、黑藻叶或菠菜叶，口腔上皮细胞临时装片原理：叶绿体在显微镜下观察，绿色，球形或椭球形。

用健那绿染液染色后的口腔上皮细胞中线粒体成蓝绿色，细胞质接近无色。

考点提示：
为什么可直接取用藓类的小叶，而不能直接取用菠菜叶？
因为藓类的小叶很薄，只有一层细胞组成，而菠菜叶由很多层细胞构成。

取用菠菜叶的下表皮时，为何要稍带些叶肉？
表皮细胞除保卫细胞外，一般不含叶绿体，而叶肉细胞含较多的叶绿体。

怎样加快黑藻细胞质的流动速度？最适温度是多少？进行光照、提高水温、切伤部分叶片；25℃左右。

对黑藻什么部位的细胞观察，所观察到的细胞质流动的现象最明显？叶脉附近的细胞。

考点提示：
为何要选新鲜的肝脏？因为在不新鲜的肝脏中，过氧化氢酶的活性会由于细菌的破坏而降低。

该实验中所用试管应选较粗的还是较细的？为什么？应选用较粗的，因为在较细的试管中容易形成大量的气泡，而影响卫生香的复燃。

为何要选动物的肝脏组织来做实验，其他动植物的组织的研磨
液能替代吗？因为肝脏组织中过氧化氢酶含量较丰富；其它动植物组织也含有少量的过氧化氢酶，所以能够替代。

相同质量的块状肝脏和肝脏研磨液，哪一个催化效果好？为什么？研磨液效果好；因为它增加过氧化氢酶与过氧化氢的接触面积。

色素的提取和分离
原理：叶绿体中的色素能溶解在有机溶剂丙酮或无水乙醇——提取色素
各色素在层析液中的溶解度不同，随层析液在滤纸上扩散速度不同——分离色素
制备滤纸条
画滤液细线：均匀，直，细，重复若干次
分离色素：不能让滤液细线触及层析液
观察和记录:结果滤纸条上从上到下依次为:橙黄色(胡萝卜素)、黄色(叶黄素)、蓝绿色(叶绿素a)、黄绿色(叶绿素b).
观察质壁分离和复原
条件：细胞内外溶液浓度差，活细胞，大液泡
材料：紫色洋葱鳞片叶外表皮细胞(具紫色大液泡)，质量浓度0.3g/mL的蔗糖溶液，清水等。

步骤：制作洋葱鳞片叶外表皮细胞临时装片→观察→盖玻片一侧滴蔗糖溶液，另一侧用吸水纸吸引→观察(液泡由大到小，颜色由浅变深，原生质层与细胞壁分离)→盖玻片一侧滴清水，另一侧用吸水纸吸引→观察(质壁分离复原)
结论:细胞外溶液浓度＞细胞内溶液浓度，细胞失水质壁分离
探究酵母菌的呼吸方式
原理:酵母菌在有氧条件下进行有氧呼吸，产生二氧化碳和水：C6H12O6＋6O2＋6H2O6→CO2＋12H2O＋能量
在无氧条件下进行无氧呼吸，产生酒精和少量二氧化碳：
C6H12O6→2C2H5OH＋2CO2＋少量能量
检测：
检测CO2的产生：使澄清石灰水变浑浊，或使溴麝香草酚蓝水溶液由蓝变绿再变黄。

检测酒精的产生：橙色的重铬酸钾溶液，在酸性条件下与酒精发生反应，变成灰绿色。

观察细胞的减数分裂
目的要求：通过观察蝗虫精母细胞减数分裂固定装片，识别减数分裂不同阶段的染色体的形态、位置和数目，加深对减数分裂过程的理解。

方法步骤：
在低倍镜下观察蝗虫精母细胞减数分裂固定装片，识别初级精母细胞、次级精母细胞和精细胞。

先在低倍镜下依次找到减数第一次分裂中期、后期和减数第二次分裂中期、后期的细胞，再在高倍镜下仔细观察染色体的形态、位置和数目。

讨论：
如何判断视野中的一个细胞是处于减数第一次分裂还是减数第二次分裂？
减数第一次分裂与减数第二次分裂相比，中期细胞中的染色体的不同点是什么？末期呢？
看看网友们都有什么想法
网友1
叫原代细胞。

10代到50代才叫细胞株。

以后叫细胞系
网友2
细胞呼吸，光合作用，质壁分离。

因为都是关于细胞生理代谢的实验，怎么能用死的呢？
网友3
细胞培养微生物细胞培养微生物多为单细胞生物，野生生存条件比较简单。