动物性食品中环境雌激素残留的检测与分析
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Tongji Medical College Huazhong University of Science & Technology
Wuhan, Hubei, 430030, P. R. China January, 2013
独创性声明
本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及 取得的研究成果。尽我所知，除文中已经标明引用的内容外，本论文不包含 任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出贡献 的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律 结果由本人承担。
采用高效液相色谱-串联质谱方法（LC/MS/MS）检测了样品中雌酮（E1）、17β雌二醇（E2）、雌三醇（E3）、乙炔基雌二醇（EE2）、己烯雌酚（DES）、双酚 A（BPA）、 壬基酚（4-NP）、辛基酚（4-t-OP）等 8 种常见的环境雌激素。结果表明，天然雌激素 E1、E3 在动物性食品中均未检出，所有的样品中都检测到 E2，检出率达 100%，其 浓度范围在 0.44~15.04 ng/g 之间，中值浓度为 7.93 ng/g。人工合成雌激素 EE2 在部分
学位论文作者签名： 日期： 年 月 日
学位论文版权使用授权书
本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有 权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和 借阅。本人授权华中科技大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据 库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。
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华中科技大学硕士学位论文
样品中有检出，总体检出率为 33.1%，在样品中检测到的最高浓度为 2.8 ng/g，DES 在任何样品中均未检测到。酚类环境雌激素 BPA 和 4-NP 有较高的检出率约 83%， 4-t-OP 的检测值均低于检测下限。BPA 和 4-NP 的浓度范围在 nd ~35.76 ng/g 之间。 结论：重组基因酵母筛检法是筛选和定量分析样品总雌激素活性的一种快速、有效的 方法，重组基因酵母对雌激素类化合物有较高的灵敏度。所有样品测得的 EEQbio （8.29-118.32 ng/g）均高于化学雌二醇当量（EEQchem，0.44-15.91 ng/g），两种方法测 得的 EEQ 值有一定的相关性（r = 0.84）。 关键词： 环境雌激素；重组基因酵母；HPLC/MS/MS；动物性食品；雌激素活性
本部分采用该方法对动物性食品中总的雌激素活性进行测定。结果表明所有样品 均检测到一定的雌激素活性，生物雌二醇当量浓度（EEQbio）在 8.29~118.32 ng/g 之间。 四大类动物性食品中，家畜样品测得的雌激素活性值最高，EEQbio 为 34.28~118.32 ng/g，比鸡蛋测得值高 4~5 倍，鸡蛋样品测得的雌激素活性值最低，EEQbio 为 8.29 ~20.91ng/g；家禽、水产品测得的 EEQbio 的范围在 12.82~110.94 ng/g 之间。 第二部分：动物性食品中 8 种常见环境雌激素含量的测定
分类号 学校代码 10487
学 号 M201075007 密级
硕士学位论文
动物性食品中环境雌激素残留的 检测与分析
学位申请人： 王 君 学科专业 ： 卫生检验与检疫 指导教师 ： 王 琳 副教授
徐顺清 教授 答辩日期 ： 2013 年 1 月
A Dissertation Submitted in Partial Fulfillment of the Requirements for the Degree of Master of Medicine
Detection and analysis of environmental estrogens residues in animal
source food
Candidate: Wang Jun Major: Health Inspection and Quarantine
Supervisor: Vice. Prof. Wang Lin Prof. Xu Shunqing
保密□， 在 不保密□。 （请在以上方框内打“√”）
年解密后适用本授权书。
学位论文作者签名： 日期： 年 月 日
指导教师签名： 日期： Fra Baidu bibliotek 月 日
目录
摘 要...........................................................................................................1 ABSTRACT...............................................................................................3 全文缩略词 ................................................................................................5 前 言...........................................................................................................6 第一部分 动物性食品中雌激素活性效应的测定..................................8
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华中科技大学硕士学位论文
Detection and analysis of environmental estrogens residues in animal source food
Master Candidate : Wang Jun Supervisor : Assoc. Prof. Wang Lin Prof. Wu Shunqing
Abstract
Objective: With the development of industry and agriculture, the environmental estrogens (EES) widely widespread in our living environment. The study found that they can affect the endocrine systems of human and animal, causing developmental, behavioral and reproductive disorder, which lead to serious impact on people’s health. Food is the material foundation of humanity for existence and development. The primary of route of human expose to EES is via food. Therefore, monitoring the EES in foodstuffs is essential in order to discover and eliminate potential harmful effects on human health. Method: In the study, we analyzed estrogenic activity in 142 samples from 16 types of commonly consumed animal foodstuffs in four cities of China by the recombinant yeast estrogen screen (YES). Meanwhile, eight target EEs in samples were simultaneously determined by high performance liquid chromatography-Tandem mass spectrometry (LC-MS/MS) system. Result: The main results are summarized as follows: 1. The determination of the total estrogenic activity in animal foodstuff
1 引言 ....................................................................................................8 2 实验部分............................................................................................9 3 结果与讨论......................................................................................14 4 结论 ..................................................................................................18 第二部分 动物性食品中 8 种环境雌激素含量的测定........................19 1 引言 ..................................................................................................19 2 实验部分..........................................................................................19 3 结果与讨论......................................................................................22 4 结论 ..................................................................................................29 参考文献 ..................................................................................................30 综 述.........................................................................................................36 参考文献 .............................................................................................46 附 录.........................................................................................................53 致 谢.........................................................................................................54
华中科技大学硕士学位论文
动物性食品中环境雌激素残留的检测与分析
硕士研究生：王 君 导 师：王 琳 副教授 徐顺清 教授
摘要
目的：随着工农业的发展，环境雌激素在我们的生活中被广泛应用，经研究发现，它 们可以干扰人类和动物的内分泌系统，引起发育、行为和生殖等各方面的异常变化， 这严重影响了人类的健康。食品是人类生存和发展的物质基础，是人类暴露于环境雌 激素的主要途径。因此，开展食品中环境雌激素的监测，对于发现和消除对人类健康 的潜在危害具有重要意义。 方法：本研究采用重组基因酵母筛检法（YES）对中国四个城市居民经常食用的 16 种 142 个动物性食品的雌激素活性进行评价，并结合高效液相色谱-串联质谱法 （LC-MS/MS）分析样品中常见 8 种环境雌激素的含量。 结果：主要内容包括两部分： 第一部分：动物性食品中总的雌激素活性测定
Wuhan, Hubei, 430030, P. R. China January, 2013
独创性声明
本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及 取得的研究成果。尽我所知，除文中已经标明引用的内容外，本论文不包含 任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出贡献 的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律 结果由本人承担。
采用高效液相色谱-串联质谱方法（LC/MS/MS）检测了样品中雌酮（E1）、17β雌二醇（E2）、雌三醇（E3）、乙炔基雌二醇（EE2）、己烯雌酚（DES）、双酚 A（BPA）、 壬基酚（4-NP）、辛基酚（4-t-OP）等 8 种常见的环境雌激素。结果表明，天然雌激素 E1、E3 在动物性食品中均未检出，所有的样品中都检测到 E2，检出率达 100%，其 浓度范围在 0.44~15.04 ng/g 之间，中值浓度为 7.93 ng/g。人工合成雌激素 EE2 在部分
学位论文作者签名： 日期： 年 月 日
学位论文版权使用授权书
本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有 权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和 借阅。本人授权华中科技大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据 库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。
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华中科技大学硕士学位论文
样品中有检出，总体检出率为 33.1%，在样品中检测到的最高浓度为 2.8 ng/g，DES 在任何样品中均未检测到。酚类环境雌激素 BPA 和 4-NP 有较高的检出率约 83%， 4-t-OP 的检测值均低于检测下限。BPA 和 4-NP 的浓度范围在 nd ~35.76 ng/g 之间。 结论：重组基因酵母筛检法是筛选和定量分析样品总雌激素活性的一种快速、有效的 方法，重组基因酵母对雌激素类化合物有较高的灵敏度。所有样品测得的 EEQbio （8.29-118.32 ng/g）均高于化学雌二醇当量（EEQchem，0.44-15.91 ng/g），两种方法测 得的 EEQ 值有一定的相关性（r = 0.84）。 关键词： 环境雌激素；重组基因酵母；HPLC/MS/MS；动物性食品；雌激素活性
本部分采用该方法对动物性食品中总的雌激素活性进行测定。结果表明所有样品 均检测到一定的雌激素活性，生物雌二醇当量浓度（EEQbio）在 8.29~118.32 ng/g 之间。 四大类动物性食品中，家畜样品测得的雌激素活性值最高，EEQbio 为 34.28~118.32 ng/g，比鸡蛋测得值高 4~5 倍，鸡蛋样品测得的雌激素活性值最低，EEQbio 为 8.29 ~20.91ng/g；家禽、水产品测得的 EEQbio 的范围在 12.82~110.94 ng/g 之间。 第二部分：动物性食品中 8 种常见环境雌激素含量的测定
分类号 学校代码 10487
学 号 M201075007 密级
硕士学位论文
动物性食品中环境雌激素残留的 检测与分析
学位申请人： 王 君 学科专业 ： 卫生检验与检疫 指导教师 ： 王 琳 副教授
徐顺清 教授 答辩日期 ： 2013 年 1 月
A Dissertation Submitted in Partial Fulfillment of the Requirements for the Degree of Master of Medicine
Detection and analysis of environmental estrogens residues in animal
source food
Candidate: Wang Jun Major: Health Inspection and Quarantine
Supervisor: Vice. Prof. Wang Lin Prof. Xu Shunqing
保密□， 在 不保密□。 （请在以上方框内打“√”）
年解密后适用本授权书。
学位论文作者签名： 日期： 年 月 日
指导教师签名： 日期： Fra Baidu bibliotek 月 日
目录
摘 要...........................................................................................................1 ABSTRACT...............................................................................................3 全文缩略词 ................................................................................................5 前 言...........................................................................................................6 第一部分 动物性食品中雌激素活性效应的测定..................................8
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华中科技大学硕士学位论文
Detection and analysis of environmental estrogens residues in animal source food
Master Candidate : Wang Jun Supervisor : Assoc. Prof. Wang Lin Prof. Wu Shunqing
Abstract
Objective: With the development of industry and agriculture, the environmental estrogens (EES) widely widespread in our living environment. The study found that they can affect the endocrine systems of human and animal, causing developmental, behavioral and reproductive disorder, which lead to serious impact on people’s health. Food is the material foundation of humanity for existence and development. The primary of route of human expose to EES is via food. Therefore, monitoring the EES in foodstuffs is essential in order to discover and eliminate potential harmful effects on human health. Method: In the study, we analyzed estrogenic activity in 142 samples from 16 types of commonly consumed animal foodstuffs in four cities of China by the recombinant yeast estrogen screen (YES). Meanwhile, eight target EEs in samples were simultaneously determined by high performance liquid chromatography-Tandem mass spectrometry (LC-MS/MS) system. Result: The main results are summarized as follows: 1. The determination of the total estrogenic activity in animal foodstuff
1 引言 ....................................................................................................8 2 实验部分............................................................................................9 3 结果与讨论......................................................................................14 4 结论 ..................................................................................................18 第二部分 动物性食品中 8 种环境雌激素含量的测定........................19 1 引言 ..................................................................................................19 2 实验部分..........................................................................................19 3 结果与讨论......................................................................................22 4 结论 ..................................................................................................29 参考文献 ..................................................................................................30 综 述.........................................................................................................36 参考文献 .............................................................................................46 附 录.........................................................................................................53 致 谢.........................................................................................................54
华中科技大学硕士学位论文
动物性食品中环境雌激素残留的检测与分析
硕士研究生：王 君 导 师：王 琳 副教授 徐顺清 教授
摘要
目的：随着工农业的发展，环境雌激素在我们的生活中被广泛应用，经研究发现，它 们可以干扰人类和动物的内分泌系统，引起发育、行为和生殖等各方面的异常变化， 这严重影响了人类的健康。食品是人类生存和发展的物质基础，是人类暴露于环境雌 激素的主要途径。因此，开展食品中环境雌激素的监测，对于发现和消除对人类健康 的潜在危害具有重要意义。 方法：本研究采用重组基因酵母筛检法（YES）对中国四个城市居民经常食用的 16 种 142 个动物性食品的雌激素活性进行评价，并结合高效液相色谱-串联质谱法 （LC-MS/MS）分析样品中常见 8 种环境雌激素的含量。 结果：主要内容包括两部分： 第一部分：动物性食品中总的雌激素活性测定