自身抗体精选.ppt
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• 稀释待检血清可检测ANA效价。
精心整理
ANA的筛选：间接免疫荧光法
+
+
抗原
抗体（血清） 抗原—抗体
第二抗体
精心整理
ANA
的 筛 选 ： 间 接 免 疫 荧 光 法
精心整理
抗核抗体（ANA）
方法——间接免疫荧光法 结果判断:
①滴度〉1：100为阳性 ②常见核型——5种核型（免疫荧光法）： 均质型、膜型、斑点型、核仁型、着丝点型 等。 不同核型的临床意义不同
精心整理
自身抗体的意义
• 是自身免疫病的标记 • 有助于结缔组织病（CTD）的诊断和鉴别
诊断 • 判断疾病的活动性 • 预测疾病的预后
精心整理
抗核抗体(antinuclear antibodies， ANAAs)：
ANA是泛指抗各种细胞核成分的 自身抗体，以自身组织成分为靶抗原 而出现的相应抗体，是血清中存在的 一类和自身组织细胞的细胞核发生反 应的自身抗体的总称。
• 我室起始1：100，同时做1：1000稀释，根据2者 的抗体滴度及强度情况判读。
• 意义>1：320，则提示自身免疫疾病
精心整理
小结
• ANA是诊断结缔组织病的重要依据。 • ANA滴度不一定与疾病活动性相关，正常人、尤
其老年人可有低滴度ANA。感染性疾病、肿瘤、 药物也可阳性。 • 有资料表明：ANA在健康人群中阳性率为3-15%， 而且与患者年龄有关，年龄65岁以上健康人群可 达10-37%，健康人群在感染病毒情况下，也可以 出现ANA阳性，但这些抗体多为暂时性。
精心整理
ANA根据核荧光的类型分为以下几种类型： ①周边型（M型）：核周边的荧光增强呈环状。M型的ANA
主要有抗双链DNA抗体组成，故高滴度的M型ANA几乎仅 见于SLE，因此有助于SLE的诊断。 ②均质型（H型）：整个细胞核呈一片模糊而均匀的荧光。 H型的ANA主要有抗脱氧核蛋白抗体组成。高滴度的H型 ANA主要见于SLE，而低滴度H型ANA偶可见于药物性狼 疮，JRA等其他自身免疫性疾病。 ③斑点型（S型）：核内荧光呈颗粒状。是有抗Sm抗体，抗 SSB/La抗体、抗Scl-70抗体等多种抗体组成。因此S型 ANA可见于SLE，混合性结缔组织病（MCTD），硬皮病 （SSc），干燥综合征（SS），多法性肌炎及皮肌炎 （PM或DM）等自身免疫病。
精心整理
• ANA在各种自身免疫性疾病中的阳性率
自身免疫性疾病
系统性红斑狼疮(SLE) 活动期
非活动期 药物诱导性红斑狼疮(DLE) 混合结缔组织病 (MCTD) 类风湿性关节炎(RA) 进行性系统性硬化症(PSS) 多发性肌炎及皮肌炎(PM/DM) 干燥综合症(SS) 慢性活动性肝炎(CAH) 溃疡性结肠炎(UC)
精心整理
ANA阳性率
95%-100% 80%-100%
100% 100%
20%-40% 85%-95% 30%-50%
70%-80% 30%-40% 26%
小结
• 我免疫实验室应用现代化工艺进行细胞培养和抗 原固定，在整个培养和固定过程中采用了保护抗 原的方法，因而具有很高的敏感性，起始稀释度 为1：100，稀释因子为3.2，而很多实验室采用的 是鼠肝或自己培养的HP-2细胞作为基质，敏感性 低，起始稀释度为1：20，稀释因子为2，如果滴 度为1：80则提示自身免疫性疾病，而欧蒙公司 提供判断标准及临床意义：
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ANA分类
根据细胞内靶抗原的理化特性和分布： • 抗DNA（dsDNA,ssDNA) • 抗组蛋白（Histone) • 抗非组蛋白（抗可溶性核抗原抗体anti-extractable
nuclear antigen antibodies,ENA和抗着丝点抗体ACA） • 抗核仁（Nucleolus）
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• 1、（史密斯抗体）抗Sm:是SLE标记抗体，帮助前瞻 性和回顾性诊断。对早期、不典型的SLE诊断意义大。 经治疗缓解后SLE回顾性诊断。抗Sm抗体是系统性红 斑狼疮的特异性抗体，与抗dsDNA抗体一起，是系统 性红斑狼疮的诊断指标
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免疫印迹技术（最常用）
• 先将ENA混合抗原作凝胶电泳，分 离开不同的区带，然后把这些区带 转印到硝酸纤维膜上，加入待检血 清，最后用酶标抗体使相应的抗原 带显色
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抗可溶性核抗原(ENA)抗体检测
• 抗可溶性核抗原(ENA)抗体：Sm、 U1RNP 、SSA、SSB、Scl－70、 Jo-1、rRNP 、Histones、Ro-52、 ACA、PO、PCNA、PM-sc1、Nucleosom
自身抗体ANA、ENA谱
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• 综述 • 结缔组织疾病（CTD，connective tissue
diseases）是一类自身免疫疾病，其特征之一就 是患者血液中存在抗抗体（ANA，antinuclear antibodies）。ANA是一群特异性的自身抗体，它 们能够结合和破坏细胞内细胞核的特定结构。在 正常人群中也可能检测到低滴度的自身抗体，而 在CTD患者中会发生ANA滴度的急升。这些抗体 不仅与疾病病理过程相关，它们同时还是CTD诊 断和治疗的依据。高敏感性和高特异性对于这些 抗体的检测是最为重要的。
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ANA
间接免疫荧 光法（IFA Indirect Fluorescen t Assay ）
ENA
免疫印迹法 （IB）
Westernblot LIA
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2、ANA的检测方法 间接免疫荧光法
• 用核质丰富的培养细胞Hp-2细胞和灵长类 肝冰冻破片作为抗原基质。
• 用荧光显微镜观察A百度文库A荧光着染强度和免疫 荧光图形。
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ANA分类
根据细胞内靶抗原的理化特性和分布： • 抗DNA（dsDNA,ssDNA) • 抗组蛋白（Histone) • 抗非组蛋白（抗可溶性核抗原抗体anti-extractable
nuclear antigen antibodies,ENA和抗着丝点抗体ACA） • 抗核仁（Nucleolus）
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ANA
的 筛 选 ： 间 接 免 疫 荧 光 法
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ANA
的 筛 选 ： 间 接 免 疫 荧 光 法
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ANA
的 筛 选 ： 间 接 免 疫 荧 光 法
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ANA
的 筛 选 ： 间 接 免 疫 荧 光 法
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ANA
的 筛 选 ： 间 接 免 疫 荧 光 法
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ANA检测的临床意义
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ANA的筛选：间接免疫荧光法
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抗原
抗体（血清） 抗原—抗体
第二抗体
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ANA
的 筛 选 ： 间 接 免 疫 荧 光 法
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抗核抗体（ANA）
方法——间接免疫荧光法 结果判断:
①滴度〉1：100为阳性 ②常见核型——5种核型（免疫荧光法）： 均质型、膜型、斑点型、核仁型、着丝点型 等。 不同核型的临床意义不同
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自身抗体的意义
• 是自身免疫病的标记 • 有助于结缔组织病（CTD）的诊断和鉴别
诊断 • 判断疾病的活动性 • 预测疾病的预后
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抗核抗体(antinuclear antibodies， ANAAs)：
ANA是泛指抗各种细胞核成分的 自身抗体，以自身组织成分为靶抗原 而出现的相应抗体，是血清中存在的 一类和自身组织细胞的细胞核发生反 应的自身抗体的总称。
• 我室起始1：100，同时做1：1000稀释，根据2者 的抗体滴度及强度情况判读。
• 意义>1：320，则提示自身免疫疾病
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小结
• ANA是诊断结缔组织病的重要依据。 • ANA滴度不一定与疾病活动性相关，正常人、尤
其老年人可有低滴度ANA。感染性疾病、肿瘤、 药物也可阳性。 • 有资料表明：ANA在健康人群中阳性率为3-15%， 而且与患者年龄有关，年龄65岁以上健康人群可 达10-37%，健康人群在感染病毒情况下，也可以 出现ANA阳性，但这些抗体多为暂时性。
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ANA根据核荧光的类型分为以下几种类型： ①周边型（M型）：核周边的荧光增强呈环状。M型的ANA
主要有抗双链DNA抗体组成，故高滴度的M型ANA几乎仅 见于SLE，因此有助于SLE的诊断。 ②均质型（H型）：整个细胞核呈一片模糊而均匀的荧光。 H型的ANA主要有抗脱氧核蛋白抗体组成。高滴度的H型 ANA主要见于SLE，而低滴度H型ANA偶可见于药物性狼 疮，JRA等其他自身免疫性疾病。 ③斑点型（S型）：核内荧光呈颗粒状。是有抗Sm抗体，抗 SSB/La抗体、抗Scl-70抗体等多种抗体组成。因此S型 ANA可见于SLE，混合性结缔组织病（MCTD），硬皮病 （SSc），干燥综合征（SS），多法性肌炎及皮肌炎 （PM或DM）等自身免疫病。
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• ANA在各种自身免疫性疾病中的阳性率
自身免疫性疾病
系统性红斑狼疮(SLE) 活动期
非活动期 药物诱导性红斑狼疮(DLE) 混合结缔组织病 (MCTD) 类风湿性关节炎(RA) 进行性系统性硬化症(PSS) 多发性肌炎及皮肌炎(PM/DM) 干燥综合症(SS) 慢性活动性肝炎(CAH) 溃疡性结肠炎(UC)
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ANA阳性率
95%-100% 80%-100%
100% 100%
20%-40% 85%-95% 30%-50%
70%-80% 30%-40% 26%
小结
• 我免疫实验室应用现代化工艺进行细胞培养和抗 原固定，在整个培养和固定过程中采用了保护抗 原的方法，因而具有很高的敏感性，起始稀释度 为1：100，稀释因子为3.2，而很多实验室采用的 是鼠肝或自己培养的HP-2细胞作为基质，敏感性 低，起始稀释度为1：20，稀释因子为2，如果滴 度为1：80则提示自身免疫性疾病，而欧蒙公司 提供判断标准及临床意义：
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ANA分类
根据细胞内靶抗原的理化特性和分布： • 抗DNA（dsDNA,ssDNA) • 抗组蛋白（Histone) • 抗非组蛋白（抗可溶性核抗原抗体anti-extractable
nuclear antigen antibodies,ENA和抗着丝点抗体ACA） • 抗核仁（Nucleolus）
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• 1、（史密斯抗体）抗Sm:是SLE标记抗体，帮助前瞻 性和回顾性诊断。对早期、不典型的SLE诊断意义大。 经治疗缓解后SLE回顾性诊断。抗Sm抗体是系统性红 斑狼疮的特异性抗体，与抗dsDNA抗体一起，是系统 性红斑狼疮的诊断指标
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免疫印迹技术（最常用）
• 先将ENA混合抗原作凝胶电泳，分 离开不同的区带，然后把这些区带 转印到硝酸纤维膜上，加入待检血 清，最后用酶标抗体使相应的抗原 带显色
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抗可溶性核抗原(ENA)抗体检测
• 抗可溶性核抗原(ENA)抗体：Sm、 U1RNP 、SSA、SSB、Scl－70、 Jo-1、rRNP 、Histones、Ro-52、 ACA、PO、PCNA、PM-sc1、Nucleosom
自身抗体ANA、ENA谱
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• 综述 • 结缔组织疾病（CTD，connective tissue
diseases）是一类自身免疫疾病，其特征之一就 是患者血液中存在抗抗体（ANA，antinuclear antibodies）。ANA是一群特异性的自身抗体，它 们能够结合和破坏细胞内细胞核的特定结构。在 正常人群中也可能检测到低滴度的自身抗体，而 在CTD患者中会发生ANA滴度的急升。这些抗体 不仅与疾病病理过程相关，它们同时还是CTD诊 断和治疗的依据。高敏感性和高特异性对于这些 抗体的检测是最为重要的。
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ANA
间接免疫荧 光法（IFA Indirect Fluorescen t Assay ）
ENA
免疫印迹法 （IB）
Westernblot LIA
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2、ANA的检测方法 间接免疫荧光法
• 用核质丰富的培养细胞Hp-2细胞和灵长类 肝冰冻破片作为抗原基质。
• 用荧光显微镜观察A百度文库A荧光着染强度和免疫 荧光图形。
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ANA分类
根据细胞内靶抗原的理化特性和分布： • 抗DNA（dsDNA,ssDNA) • 抗组蛋白（Histone) • 抗非组蛋白（抗可溶性核抗原抗体anti-extractable
nuclear antigen antibodies,ENA和抗着丝点抗体ACA） • 抗核仁（Nucleolus）
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ANA
的 筛 选 ： 间 接 免 疫 荧 光 法
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ANA
的 筛 选 ： 间 接 免 疫 荧 光 法
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ANA
的 筛 选 ： 间 接 免 疫 荧 光 法
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ANA
的 筛 选 ： 间 接 免 疫 荧 光 法
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ANA
的 筛 选 ： 间 接 免 疫 荧 光 法
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ANA检测的临床意义